大剂量地塞米松对犬严重肺冲击伤的治疗作用

目的 观察大剂量地塞米松对犬严重肺冲击伤的治疗效果。方法 将 18条成年犬随机分为对照组 (T0 )与治疗组 (Tdex) ,用BST 1生物激波管造成犬严重肺冲击伤。T0 组伤后即刻给予半卧位、吸氧、补液、抗感染等处理 ;Tdex组在以上处理基础上分 3次 (伤后 0 .5、8、12h)给予总量 11mg/kg大剂量地塞米松治疗 ,于致伤后 0、0 .5、2、4、6、8、12h检测血流动力学与血气指标 ,观察伤后 2 4h内平均肺体指数及死亡率。结果 T0 组伤后血流动力学及血气指标发生严重紊乱 ,HR、sBP出现一过性下降 ,CI、CO、LCW、PaO2 及SO2 指标明显下降而SVR、SVRI显著增高 ,伤后 2 4h肺体指数为 ( 1 83±0 3 8) % ,死亡率为 40 % ;Tdex组伤后HR、sBP、CI没有明显下降 ,与T0 组相比 ,伤后 0 .5hsBP显著增高 (P <0 .0 5 ) ,伤后 4～8hLCW也显著增高 (P <0 .0 5 ) ,伤后 6～ 12hSVR显著降低 (P <0 .0 1) ,SVRI也显著降低 (P <0 .0 5 ) ,伤后 2 4h肺体指数仅为 ( 1.3 2± 0 .2 1) % (P <0 .0 5 ) ,死亡率仅为 14 .3 % ,但对血气指标紊乱没有明显改善。

IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体及CD14表达的影响

本研究旨在观察IL 10对肺泡巨噬细胞 (AM)、清道夫受体 (SR)、CD14表达的影响 ,探讨IL 10在内毒素血症时防止AM由免疫防御向炎症效应转变中的作用。分离培养小鼠AM ,以不同剂量 (0 ,0 0 1,0 1,1,10 ,10 0 μg/L)IL 10刺激细胞 16h或以 10 0 μg/LIL 10刺激细胞不同时间 (0 ,2 ,4 ,6 ,8,12 ,16h) ,采用免疫细胞化学及RT PCR方法观察SR、CD14表达变化。结果显示低至 10 μg/LIL 10刺激 16h或 10 0 μg/LIL 10刺激 12～ 2 4h能显著增强SRmRNA并抑制CD14mRNA表达 ,SR蛋白表达也显著增强 ,但CD14蛋白表达无明显变化。IL 10刺激下对SR蛋白表达的增强能降低AM对LPS的反应性 。

MD-2基因启动子区-1064、-1625 SNP对启动子活性的影响

目的探讨MD-2基因启动子区-1064、-1625SNP位点碱基变异对启动子活性的影响。方法通过PCR和定点突变技术,构建了含MD-2基因基础启动子及-1625G和-1064G突变启动子,以双荧光素酶报告系统观察SNP对MD-2基因启动子活性的影响。结果化学发光结果显示,在U937细胞中,-1625G突变启动子活性比MD-2基础启动子活性高11.4%,差异显著。而-1064G突变启动子与MD-2基础启动子活性无明显差异。结论-1625C→G碱基变异可增强MD-2基因启动子活性,但-1064SNP对靶基因启动子活性无明显影响。

内毒素直接作用于血管内皮细胞激活信号分子的研究

目的 :对内毒素 (LPS)直接作用于血管内皮细胞 (VECs)激活的多种信号通路的主要激酶及转录因子进行筛选研究。方法 :10 0ng·ml-1浓度的LPS刺激细胞至预定时相点后 ,用免疫细胞化学观察信号分子的磷酸化和 /或核转位。结果 :LPS直接作用于VECs在 5～ 15min内即可观察到多种信号分子的激活 ,随刺激时间延长 ,信号分子激活程度逐步增强 ,至一定时相点后活性又消失 ,这些信号分子的活性在持续时间上存在一定的差异。这些激活的信号分子包括p38、ERK1/ 2MAPK、CREB、STAT5、STAT6、NF -kB家庭成员p6 5、p5 0、p5 2、c-Rel、Rel-B等。结论 :LPS直接作用于VECs可以迅速激活多种信号分子 ,诱导信号分子的磷酸化和 /或核转位。LPS诱导的CREB磷酸化、不同NF -kB家族成员核转位持续时间的差异是第一次报道。

高压氧对犬严重肺冲击伤的治疗研究

目的 观察高压氧对犬严重肺冲击伤的治疗效果。方法 将 18条成年犬随机分为对照组与高压氧治疗组。用BST 1生物激波管造成犬严重肺冲击伤 ,对照组伤后立即给予吸氧、补液、抗感染等处理 ;高压氧治疗组在以上处理基础上于伤后 5小时给予高压氧治疗。两组均于伤前及伤后 0 .5、4、8、12小时等时相点检测血气与血流动力学指标 ,观察伤后 2 4小时内肺体指数及死亡率。结果 两组动物伤后血气及血流动力学指标均发生严重紊乱 ,HR、sBP、PO2 、SO2 、CI、CO及LCW等指标明显下降 ,而SVR、SVRI显著增高 ,但治疗后高压氧治疗组PO2 略高于对照组 ,而SVR、SVRI略低于对照组。对照组伤后 2 4小时肺体指数为 (1.83± 0 .38) % ,死亡率为 4 0 % ;高压氧治疗组伤后 2 4小时肺体指数为 (1.35± 0 .19) % ,明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,死亡率仅为 12 .5 %。

汉族人髓样分化蛋白2基因启动子区多态性与严重创伤后并发症易感性的关系

目的探讨中国汉族人髓样分化蛋白2(MD-2)基因启动子单核苷酸多态性及其与严重创伤患者多器官功能衰竭和脓毒症易感性之间的关系。方法应用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应技术,检测105例严重创伤患者(其中42例并发脓毒症)MD-2基因启动子-1625C/G单核苷酸多态性位点基因型。并对所有患者进行多器官功能障碍综合征(MODS)评分。结果-1625G等位基因携带者MODS评分显著高于C等位基因携带者(显性遗传模式P<0.001,隐性遗传模式P>0.05)。携带G等位基因型的创伤患者比C等位基因携带者并发脓毒症的可能性高(OR值为0.477,95%可信区间为0.266-0.855,P<0.05)。携带G等位基因型的创伤患者死亡率显著高于C等位基因携带者(显性遗传模式P<0.05,隐性遗传模式P>0.05)。结论汉族人严重创伤后多器官功能衰竭、脓毒症的易感性与MD-2基因启动子-1625C/G单核苷酸多态性相关。-1625G可能是严重创伤后并发症发生的危险因素。

VEGF基因真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的探讨经腺病毒表达载体转染血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165基因的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)体内外基因表达的特点。方法构建VEGF基因腺病毒表达载体,将VEGF165基因转染到MSCs中。用RT-PCR法检测转基因MSCs中基因表达情况。结果转基因MSCs及其分化的子代细胞均有VEGF165的表达,并持续2周左右时间。结论经腺病毒表达载体转染VEGF165基因的MSCs在体内外均有良好的基因表达。

TNF-α对小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体表达的影响

本研究旨在通过观察TNF α对肺泡巨噬细胞 (AM)清道夫受体 (SR)、CD14表达的影响 ,探讨TNF α在内毒素血症时AM由早期防御性 (清除、灭活内毒素 )向后期效应性 (释放大量的致炎与抗炎因子 )转变中的作用。分离培养小鼠AM ,以不同剂量TNF α(0 ,0 0 0 1,0 0 1,0 1,1,10 ,10 0 μg L)刺激细胞 16h或以 10 0 μg LTNF α刺激细胞不同时间 (0 ,2 ,4 ,6 ,8,12 ,16 ,2 4h) ,采用免疫细胞化学及RT PCR方法观察SR、CD14表达变化。结果显示 ,以低至 0 1μg LTNF α刺激16h或 10 0 μg LTNF α刺激 6h以上就能显著增强CD14并抑制SR蛋白的表达 ,实验同时显示 ,CD14mRNA、SRmRNA表达也显著增强 ,SRmRNA表达变化与SR蛋白表达趋势不一致。研究结果提示 ,TNF α能通过增强CD14蛋白表达并抑制SR蛋白表达而在内毒素血症时小鼠AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用。

脾脏切除对实验性脑损伤大鼠生存率及血液、脑组织中IL-1β含量的影响

目的观察脾脏切除对实验性脑损伤大鼠死亡率、血液中白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度以及致伤区脑组织IL-1βmRNA含量的影响,为提高重型颅脑创伤患者救治水平探讨新思路。方法成年雄性SD大鼠随机分为3组:颅脑创伤假手术+脾切除假手术组(A组),颅脑创伤+脾切除假手术组(B组)和颅脑创伤+脾切除组(C组)。采用Feeney自由落体法对大鼠右顶叶致伤,观察各组大鼠致伤后7天内死亡率(nA=23,nB=65,nC=65);ELISA法测定致伤后6、12、24小时、2天及3天时大鼠血液中IL-1β的浓度(各时相点nA=nB=nC=6);荧光定量PCR法检测致伤后6、12、24小时、2天及3天时致伤区域脑组织IL-1βmRNA的含量(各时相点nA=nB=nC=3)。结果致伤后7天内大鼠A、B、C组死亡率分别为0%,38.46%及16.92%,各组间比较均具有显著差异(P<0.05);ELISA检测发现致伤后2天及3天时B组IL-1β显著增高,A、B及C组分别为:184.3±31.6、355.3±58.1(P<0.01)及140.4±29.5,109.4±16.7、1205.6±128.8(P<0.01)及165.0±20.1;荧光定量PCR检测发现,B、C两组致伤侧脑组织IL-1βmRNA含量均出现先显著升高、后下降的趋势,但C组较B组下降明显。结论颅脑创伤大鼠于伤后行脾脏切除能够显著降低大鼠死亡率,对血液及创伤区域脑组织中IL-1β的产生均有一定的抑制作用。

细菌内毒素对枯否细胞丝裂原活化蛋白激酶家族的影响

为阐明LPS诱导全身炎症反应失控的信号转导机制 ,采用Westernblot检测LPS刺激对枯否细胞ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平的影响。结果显示 ,LPS刺激后 ,枯否细胞内ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达无明显变化 ,但其磷酸化水平均发生了显著变化 ,刺激后 5min即明显升高 ,并分别于 30、45、2 0min达到高峰 ,然后逐渐下降 ,2h后基本恢复至正常水平 ,其中以p38MAPK变化最快且变化幅度最大。LPS浓度在 10pg/ml～ 10 0ng/ml范围内时 ,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平与LPS刺激浓度呈明显的剂量依赖性。提示ERK、JNK、p38MAPK均是LPS信号转导途径中的重要信号分子 ,其中p38MAPK在LPS所介导的枯否细胞早期反应中可能较ERK和JNK有着更为重要的作用。

AP-1在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在TNF-α表达中的调控作用

为观察内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核转录因子AP 1活性的影响 ,探讨AP 1在LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞表达TNF α中的基因调控作用 ,应用凝胶迁移阻滞技术(EMSA)检测LPS(Ecoli0 2 6∶B6)刺激大鼠AM核蛋白中AP 1的DNA结合活性的动态变化 ;在LPS刺激前 12h ,应用转基因技术将AP 1的硫代寡核苷酸圈套 (S ODNdecoy)转入大鼠AM ,应用ELISA法观察AP 1硫代寡核苷酸圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF α的影响。结果发现 ,应用 10 0ng/mlLPS刺激大鼠AM 0 5h,AP 1即迅速出现活化并达到峰值 ,在 1h活性略有下降 ,3h活性又逐渐回升 ,5h、8h又迅速回落 ,AP 1的活化状态至少可以持续 8h ,且与LPS刺激呈明显的量效关系 ;AP 1的S ODN圈套能明显抑制但不能完全阻断LPS诱导的TNF α表达。说明LPS刺激可使大鼠AM内AP 1活化 ,其在LPS介导的炎症反应中可能发挥重要作用 ;AP 1在LPS诱导的大鼠AM表达TNF α中可能起重要的调控作用 ,但TNF

CRIF1基因的克隆表达

目的克隆表达CRIF1基因蛋白,为进一步研究该基因在骨髓微环境诱导白血病细胞G0/G1期阻滞过程中作用以及相关机制奠定基础。方法自HL60细胞中提取总RNA、逆转录,并与pET32a构建融合蛋白表达载体、蛋白原核表达载体;优化蛋白表达诱导条件,蛋白纯化;SDS-PAGE、Western Blot检测目的蛋白的表达。结果克隆并经测序获得全长744bp的CRIF1基因,成功构建融合蛋白表达载体和原核表达载体,优化并纯化蛋白;SDS-PAGE在42.5 kD处获得目的条带,Western Blot检测确定为CRIF1表达蛋白。结论成功克隆表达出CRIF1基因蛋白。

内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL的变化及其对LPS致炎效应的影响

目的 探讨内毒素血症小鼠血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox LDL)的变化规律及其对内毒素(LPS)作用的影响。方法 静脉分别注射LPS 1、2 5、5mg kg ,复制小鼠内毒素血症模型,ELISA法检测血浆Ox LDL含量;Ox LDL 0 3 5、1 4mg kg静脉注射预处理小鼠,3 0min后注射LPS 1mg kg ,ELISA法测定血浆TNF α含量;观察Ox LDL预处理对内毒素血症小鼠2 4h死亡率的影响。结果 内毒素血症小鼠血浆Ox LDL明显升高,LPS注射后0 5～8h ,各剂量组血浆Ox LDL水平均显著高于正常对照(P <0 0 1) ;不同剂量Ox LDL预处理小鼠血浆TNF α水平均显著高于LPS单纯注射组同时相点(P <0 0 1) ,且2 4h死亡率增加。结论 内毒素血症小鼠血浆Ox LDL水平明显增高,与LPS呈明显的量效关系;Ox LDL能增强LPS的致炎效应,这可能与其部分封闭清道夫受体(SR) ,导致LPS清除减少有关。

Ox-LDL对内毒素血症小鼠肝、肺组织TNF-α含量的影响及其意义

目的研究氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)注射对内毒素致炎效应的影响。方法OxLDL0.35mg/kg或1.4mg/kg静脉注射预处理小鼠30min后注射LPS1mg/kg,ELISA法测定肝、肺组织TNFα含量变化。结果与单纯注射LPS相比,OxLDL预处理小鼠肝、肺组织TNFα含量明显升高(P<0.01)。结论OxLDL能增强LPS的致炎作用,使小鼠肝、肺组织TNFα增加,其机制可能与清道夫受体(SR)封闭,LPS清除减少、过多的游离LPS大量激活炎症细胞有关。

草麻黄水提物对大鼠蛛网膜下腔出血后继发性脑损伤的影响

目的观察草麻黄水提物对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后继发性脑损伤的治疗作用并探讨其部分机制。方法SD大鼠50只,分为模型组、对照组和3个不同浓度(4、12、36mg/kg草麻黄水提物)治疗组,术后3d,各组动物脑含水量及脑组织匀浆检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)与羟自由基等的变化;HE染色观测各组动物SAH与水肿情况;免疫组织化学及Western blot法检测各组动物脑组织补体C3的表达变化。结果术后3d,同模型组相比,12、36mg/kg治疗组脑组织MDA水平、GSH-Px酶活力、羟自由基能力显著降低(P<0.01),4 mg/kg治疗组的MDA水平变化不明显(P>0.05),但GSH-Px酶活力与抑制羟自由基能力显著降低(P<0.01),同时,12、36mg/kg治疗组脑组织含水量较模型组明显降低;Western blot与免疫组织化学显示36mg/kg治疗组补体C3的表达较模型组明显降低。结论草麻黄水提物能降低脑水肿的严重程度,从而减轻炎性反应,对SAH动物具有较好的治疗效。

蜕皮甾酮对大鼠脑组织自由基损伤的保护作用

目的观察蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)对大鼠脑损伤的治疗作用。方法 SD雄性大鼠120只,按随机数字表法分6组,每组20只。采用Feeney法自由落体打击鼠脑造模。假手术组动物只开颅,不打击;治疗组:分别采用4、8、16 mg/kg的EDS腹腔注射模型动物;阴性治疗对照组:模型动物腹腔注射生理盐水;阳性治疗对照组:模型动物腹腔注射3 mg/kg依达拉奉。伤后7 d计算各组动物死亡率;检测各组动物脑组织含水量及丙二醛(MDA)、羟自由基能力及超(过)氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等。HE染色观测各组大鼠脑组织海马病变情况。结果伤后7 d,16 mg/kg EDS治疗组的死亡率、脑组织含水量MDA与羟自由基含量较阴性治疗对照组明显降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.01),脑细胞损害明显减轻,大鼠海马CA1区正常神经元数量明显优于阴性治疗组(P<0.01)。结论蜕皮甾酮对脑损伤具有保护治疗作用。

脂多糖刺激血管内皮细胞激活cAMP反应元件结合蛋白

目的 研究细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)刺激时 ,血管内皮细胞 (vascularen dothelialcells,VECs)激活cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein ,CREB)。 方法 用 10 0ng/mlLPS刺激VECs至预定时相点 (0 ,15 ,30 ,6 0 ,12 0 ,180min) ,然后用免疫细胞化学和Westernblotting方法研究CREB的磷酸化 ,用凝胶电泳迁移分析法 (EMSA)研究CREB与DNA的结合活性 ;用不同浓度的LPS(0 ,0 .0 1,0 .1,1.0 ,10 ,10 0 ,10 0 0ng/ml)刺激VECs30min ,然后用凝胶电泳迁移分析法研究CREB与DNA的结合活性。 结果 10 0ng/mlLPS刺激VECs后 15～ 12 0min ,均可检测到CREB的磷酸化及与DNA结合活性的增强 ,30～ 6 0min时增强最为明显 ,180min后恢复至正常水平 ;LPS刺激VECs可以诱导CREB -DNA结合活性的增强 ,且随着LPS刺激浓度增加 ,结合活性逐渐增强 ,10 0ng/ml及 10 0 0ng/ml浓度组具有最强的结合活性。