高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响

目的探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响。方法无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎。采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AECⅡ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组。于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 L/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养。二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达。采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验。结果细胞爬片上AECⅡ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用。与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AECⅡ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AECⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达最强。结论高氧暴露可促使胎鼠AECⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一。

肺表面活性物质蛋白B基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的研究

目的探讨肺泡表面活性物质蛋白B(SPB)基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的关系。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院的新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)诊断病例为病例组,并按1∶2比例收集胎龄和出生体重相匹配的无明显感染症状早产儿为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术及基因测序技术检测SPB-18A/C及SPB1580C/T多态性,观察两组间基因型频率和等位基因频率的差异。并复习文献比较本研究汉族与其他种族人群等位基因频率的差异。结果 2008至2010年NRDS组91例,对照组182名进入分析。①SPB-18A/C基因在NRDS组AA,AC,CC基因型频率分别为11.0%、40.7%和48.4%,对照组分别为6.6%、31.3%和62.1%;两组基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);NRDS组A等位基因频率显著高于对照组(31.3%vs22.3%)。②SPB1580C/T基因在NRDS组TT、TC和CC基因型频率分别为5.5%、63.7%和45.1%,对照组分别为30.8%、6.6%和48.4%;两组基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);NRDS组C等位基因频率显著高于对照组(79.1%vs70.9%)。③本研究汉族人、美国人、巴西人和丹麦人SPB1580等位基因C频率分别为79%、35%、41%和46%,差异有统计学意义(P<0.05),与日本人群等位基因C频率(72%)差异无统计学意义(P>0.05);本研究汉族人、巴西人、美国人和丹麦人SPB-18等位基因A频率分别为31%、58%、57%和61%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究汉族人群SPB-18A/C及SPB1580C/T基因多态性是NRDS的危险因素。不同种族人群SPB1580C/T和SPB-18A/C基因多态性分布存在明显差异。

高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响

目的研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系,待其在37℃、5%CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度>90%,CO2浓度为5%;空气组仍置于含5%CO2培养箱中。两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用Western blot检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果①与空气组相比,A549细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA表达显著增强(P<0.05);48 h后Trx-2mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05)。②与空气组相比,A549细胞高氧暴露后12 h Trx-2蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h显著减弱(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导A549细胞中Trx-2动态表达的变化,这种变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。

武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D基因多态性及其与支气管肺发育不良相关性分析

目的:研究武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D(SP-D)基因多态性及其与支气管肺发育不良(BPD)易感性的相关关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对218例武汉汉族新生儿SP-D相关位点进行基因型检测,同时进行基因测序验证结果。结果:SP-DM et11Thr三种基因型TT、TC、CC频率分别为10.5%、49.1%、40.4%,等位基因T和C频率分别为35.1%和64.9%。SP-DA la160Thr三种基因型GG、GA、AA频率分别为54.6%、39.4%、6.0%,等位基因G和A频率分别为74.3%和25.7%。与对照组比,SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联(P>0.05)。结论:SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因型和等位基因频率存在种族差异性;SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联。

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧(高氧)暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(Trx-2)和细胞色素C(Cytc)的动态表达,探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后,加入100 g/L胎牛血清的MEM培养基,置于37℃50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组,每组18瓶A549细胞(50 mL培养瓶)。高氧组持续暴露于常压高氧中,氧体积分数为900 mL/L,CO2体积分数为50 mL/L;空气组仍置于50 mL/LCO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后提取A549细胞总RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平;蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较,高氧组24 h Trx-2 mRNA的表达显著增强(P<0.05);48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05)。2.与空气组比较,高氧组12 h Cytc mRNA的表达显著增强(P<0.05);24 h Cytc mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。3.与空气组比较,高氧组12 h Trx-2蛋白的表达显著增强(P<0.05);24 h仍增强,二组比较无显著差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达,提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用,Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。

中国13家医院住院分娩早产儿呼吸窘迫综合征前瞻性调查分析

目的了解国内住院分娩早产儿呼吸窘迫综合征（respiratory distress syndrome,RDS）的发生率、病死率、并发症特点、发生高危因素、产前激素应用对早产儿RDS的发生率及预后的影响。方法收集国内13家医院2014年1月1日至12月31日住院分娩的24周≤胎龄〈37周的全部早产儿共7684例。前瞻性分析RDS发生率、病死率、并发症、发生高危因素及产前应用地塞米松的效果。结果活产出生新生儿共75 360例,其中早产儿7 684例（其中入院早产儿6604例,非入院1080例）,早产儿发生率为10.2%。其中极早产儿957例,占12.5%;超早产儿92例,占1.2%。发生RDS 1 177例,发生率为15.3%。24周≤胎龄〈25周、25周≤胎龄〈26周、26周≤胎龄〈27周、27周≤胎龄〈28周、28周≤胎龄〈29周、29周≤胎龄〈30周、30周≤胎龄〈31周、31周≤胎龄〈32周、32周≤胎龄〈33周、33周≤胎龄〈34周、34周≤胎龄〈35周、35周≤胎龄〈36周、36周≤胎龄〈37周早产儿RDS发生率分别为100.0%、90.0%、85.0%、85.1%、81.0%、74.3%、55.4%、47.1%、33.1%、17.9%、9.6%、5.0%、1.9%。出生体重〈500 g、500~749 g、750~999 g、1 000~1 499 g、1 500~2 499 g、2 500~4 000 g、〉4 000 g早产儿RDS的发生率分别为100.0%、100.0%、79.2%、55.8%、15.0%、3.6%、9.5%。RDS早产儿病死率为10.5%,其中胎龄24周≤胎龄〈25周、25周≤胎龄〈26周、26周≤胎龄〈27周、27周≤胎龄〈28周、28周≤胎龄〈29周、29周≤胎龄〈30周、30周≤胎龄〈31周、31周≤胎龄〈32周、32周≤胎龄〈33周、33周≤胎龄〈34周、34周≤胎龄〈35周、35周≤胎龄〈36周、36周≤胎龄〈37周早产儿RDS病死率,分别为100%、70.0%、23.5%、20.0%、16.2%、10.3%、8.1%、9.6%、8.9%、6.0%、5.5%、8.8%、4.5%。RDS患儿颅内出血（ICH）、早产儿视网膜病（ROP）、支气管肺发育不良（BPD）、坏死性小肠结肠炎（NEC）、动脉导管未闭（PDA）、肺出血及败血症的发生率较非RDS早产儿高,差异有非常显著性（P〈0.001）。logistic回归分析显示：男性、胎龄〈33周、出生体重〈2 500 g、身长〈40 cm、新生儿窒息、产次≥2次、前置胎盘是早产儿RDS发病的危险因素;多胎妊娠是RDS的保护因素。胎龄〈33周早产儿RDS发病高危因素包括：男性、胎龄〈28周、出生体重〈2 500 g、身长〈40 cm、新生儿窒息、前置胎盘;产前应用地塞米松是RDS的保护因素。胎龄≥33周早产儿RDS发病高危因素包括：男性、胎龄〈35周、出生体重〈2 500 g、新生儿窒息、产次≥2次、剖宫产、前置胎盘;多胎妊娠是RDS的保护因素。产前应用地塞米松2 879例,占37.5%。胎龄〈33周地塞米松组RDS发生率较非地塞米松组低。地塞米松组胎龄〈33周RDS发生率、重度RDS发生率、病死率均较非地塞米松组低,差异有显著性;地塞米松组需要使用2剂以上肺表面活性物质的比例、机械通气比例、机械通气时间均较非地塞米松组低,差异无显著性;地塞米松组总吸氧时间较非地塞米松组高,差异无显著性;地塞米松组总住院时间较非地塞米松组长,差异有显著性。地塞米松组胎龄≥33周早产儿,除RDS发生率、重度RDS发生率、机械通气比例、总吸氧时间、总住院时间较非地塞米松组高且差异有显著性外,余差异均无显著性。结论国内早产儿发生率较前上升,早产儿及极早产儿、超早产儿救治存活率均较前明显提高。RDS患儿病死率及并发症发生率较高。胎龄〈33周的早产儿RDS的发病高危因素多为自身因素,产前应用地塞米松能有效减少RDS的发生率并改善预后;胎龄≥33周的早产儿RDS发病高危因素则多为围产期病理因素,产前地塞米松预防RDS的作用不明显。

胎膜早破对胎龄<37周早产儿并发症的影响

目的探讨胎膜早破（premature rupture of the membrane,PROM）对早产儿并发症的影响。方法收取课题组各协作单位产科登记信息在2014年1月1日~2014年12月31日出生的胎龄〈37周的早产儿共7684例。各协作单位派专人培训后填写统一的表格,记录相关信息,包括患儿性别、胎龄、出生体质量、有无PROM、胎盘早剥、产前激素使用、Apgar评分、羊水污染、并发症等。按有无PROM分为PROM组与对照组,统一对其临床资料进行分析。结果（1）PROM组病死率小于对照组,颅内出血、坏死性小肠结肠炎、早产儿视网膜病、支气管肺发育不良发生率均高于对照组,两组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;OR值95%CI分析：病死率〈1;颅内出血、坏死性小肠结肠炎、早产儿视网膜病、支气管肺发育不良并发症〉1。（2）调整胎龄、出生体质量、性别、分娩方式、胎盘早剥、前置胎盘、产前激素、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压病和5 min Apgar评分〈7分等因素后,坏死性小肠结肠炎、早产儿视网膜病、支气管肺发育不良的发生率两组间差异均有统计学意义（P〈0.05）,且OR 95%CI〉1,但病死率和ICH比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 PROM是早产儿并发症坏死性小肠结肠炎、早产儿视网膜病、支气管肺发育不良发生的危险因素,规范处理PROM可减少早产儿并发症NEC、早产儿视网膜病、支气管肺发育不良的发生。

中国14家医院超/极早产儿早期预后的多中心调查

目的报道国内14家医院产科收治的出生胎龄24～31周早产儿的早期病死率和主要并发症发生率,并分析其影响因素。方法收集2013年1月1日至2014年12月31日国内14家医院产科收治的出生胎龄24～31周早产儿的一般资料,分析各胎龄组早产儿的病死率和主要并发症如支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)、新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)、早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)、脑室内出血(intraventricular hemorrhage,IVH)和败血症等的发生率,并分析其影响因素。结果 24～31周各胎龄组早产儿的存活率分别为0、28.0%、84.8%、83.5%、87.4%、90.7%、93.9%和96.0%,无严重合并症存活率分别为0、8.0%、60.6%、53.2%、62.3%、67.9%、79.1%和85.8%,随着胎龄的增加存活率及无严重合并症存活率均增加。胎龄<28周早产儿的产前激素使用率低于28～31周(28.0%～44.3%vs 49.7%～59.6%,P<0.05),总体使用率为56.0%,足疗程为32.3%。早产儿胎龄越小,并发症发生率越高。24～31周早产儿总体呼吸窘迫综合征的发生率为58.5%, BPD的发生率为12.5%,NEC的发生率为3.9%,IVH的发生率为15.4%,ROP的发生率为5.4%,动脉导管未闭的发生率为28.4%,败血症的发生率为9.7%。低胎龄(OR=0.891,95%CI:0.796～0.999,P=0.0047)、低出生体重(OR=0.520,95%CI:0.420～0.643,P=0.000)、小于胎龄儿(OR=1.861,95%CI:1.148～3.017,P=0.012)和5分钟低Apgar评分(OR=1.947,95%CI:1.269～2.987,P=0.002)是早产儿死亡的高危因素。低胎龄(OR=0.666,95%CI:0.645～0.688,P=0.000)、低出生体重(OR=0.921,95%CI:0.851～0.997,P=0.041)、男性(OR=1.235,95%CI:1.132～1.347,P=0.000)、小于胎龄儿(OR=1.511,95%CI:1.300～1.755,P=0.000)、5分钟时低Apgar评分(OR=2.262,95%CI:1.950～2.624,P=0.000)以及围产期合并症如前置胎盘(OR=1.452,95%CI:1.202～1.753,P=0.000)、胎盘早剥(OR=1.380,95%CI:1.082～1.760,P=0.010)、妊娠期高血压疾病(OR=2.262,95%CI:1.950～2.624,P=0.000)、多胎(OR=1.162,95%CI:1.056～1.278,P=0.002)和产前发热(OR=1.367,95%CI:1.228～1.521,P=0.000)等是早产儿并发症发生的高危因素。产前使用激素治疗可以降低超早产儿和极早产儿的死亡风险(OR=0.615,95%CI:0.483～0.801,P=0.033)。结论胎龄26周以下超早产儿的存活率较低,26～31周早产儿的存活率虽逐渐接近发达国家,但严重并发症的发生率较高,提高对围产期合并症的预防和管理有助于改善此类早产儿的生存质量。

Effects of Hyperoxia on Cytoplasmic Thioredoxin System in Alveolar Type Epithelial Cells of Premature Rats

This study investigated the effects of hyperoxia on dynamic changes of thioredoxin-1 （Trx1） and thioredoxin reductase-1 （TrxR1） in alveolar type Ⅱ epithelial cells （AECⅡ） of premature rats. Pregnant Sprague-Dawley rats were sacrificed on day 19 of gestation. AECⅡ were isolated and purified from the lungs of premature rats. When cultured to 80% confluence, in vitro cells were randomly divided into air group and hyperoxia group. Cells in the hyperoxia group were continuously exposed to 95% O2/5% CO2 and those in the air group to 95% air/5% CO2. After 12, 24 and 48 h, cells in the two groups were harvested to detect their reactive oxygen species （ROS）, apoptosis, TrxR1 activity and the expressions of Trx1 and TrxR1 by corresponding protocols, respectively. The results showed that AECⅡ exposed to hyperoxia generated excessive ROS and the apoptosis percentage in the hyperoxia group was increased significantly at each time points as compared with that in the air group （P0.001）. Moreover, TrxR1 activity was found to be markedly depressed in the hyperoxia group in comparison to that in the air group （P0.001）. RT-PCR showed the expressions of both Trx1 and TrxR1 mRNA were significantly increased in AECⅡ exposed to hyperoxia for 12 and 24 h （P0.01）, respectively. At 48 h, the level of Trx1 mRNA as well as that of TrxR1 mRNA in the hyperoxia group was reduced and showed no significant difference from that in the air group （P0.05）. Western blotting showed the changes of Trx1 protein expressions in the hyperoxia group paralleled those of Trx1 mRNA expressions revealed by RT-PCR. It was concluded that hyperoxia can up-regulate the protective Trx1/TrxR1 expressed by AECⅡ in a certain period, however, also cause dysfunction of the cytoplasmic thioredoxin system by decreasing TrxR1 activity, which may contribute to the progression of oxidative stress and cell apoptosis and finally result in lung injury.

高体积分数氧对人肺腺癌细胞硫氧还蛋白-1及硫氧还蛋白还原酶-1表达的影响

目的研究高体积分数氧(高氧)对人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-1(Trx1)及硫氧还蛋白还原酶-1(TrxR1)表达的影响,探讨Trx1及TrxR1在高氧肺损伤中的作用。方法体外传代培养A549细胞,待其生长至融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组置于一饱和湿度密封箱中,通以950 mL.L-1氧气(O2)[含50 mL.L-1二氧化碳(CO2)]15 min;空气组置于同一室空气中15 min;2组同时置于37℃含50 mL.L-1CO2细胞培养箱中,分别于6 h、12 h、24 h提取其A549细胞总RNA和总蛋白。采取半定量反转录(RT)-PCR测定其Trx1 mRNA、TrxR1 mRNA的表达;采用Western blot检测其A549细胞Trx1蛋白的表达。结果 1.与空气组比较,A549细胞高氧暴露6 h、12 h时Trx1 mRNA表达显著增强(P=0.012,0.002),24 h时减弱,与空气组比较差异无统计学意义(P=0.795);与空气组比较,高氧暴露6 h TrxR1 mRNA无明显变化(P=0.878);12 h、24 h时TrxR1 mRNA表达明显增强(P=0.003,0.001)。2.与空气组比较,高氧暴露6 h Trx1蛋白有所增加但差异无统计学意义(P=0.575);12 h、24 h时Trx1蛋白表达均显著增强(P=0.003,0.026)。结论高氧暴露可上调A549细胞中Trx1及TrxR1的表达,提示内源性的Trx1及TrxR1在高氧肺损伤机制中提供了保护作用。

硫氧还蛋白及其还原酶的研究进展

硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）、硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR）及烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）构成的Trx系统是一个广泛分布于原核生物和真核生物的NADPH依赖的二硫化物还原酶系统，在机体氧化还原平衡及细胞增殖中具有重要调节作用。近年来，对Trx及TrxR的研究已覆盖了大部分生物医学领域。

高氧暴露对早产新生大鼠肺组织凋亡信号调节激酶1表达的影响

目的研究早产新生大鼠高氧肺损伤肺组织中凋亡信号调节激酶1（ apoptosis signalregulating kinase 1, ASK1 ） 及硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）和硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reduetase，TrxR）的表达变化及意义，探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法早产新生SD大鼠128只，生后1d随机分为空气组和高氧组，每组64只。两组于生后1、4、7、10、14d各时间点处死8只大鼠取肺组织，采用HE染色观察肺组织病理学变化；采用逆转录-聚合酶链反应技术测定Trx和TrxRmRNA表达；免疫组织化学方法检测肺组织ASK1蛋白的表达和分布，Western印迹法检测ASK1蛋白表达水平变化。两组间比较采用t检验。结果（1）肺组织病理学：与对照组比较，高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后。（2）肺组织ASK1广泛分布于肺泡上皮细胞和血管内皮细胞胞浆中；高氧暴露1、4d肺组织ASK1蛋白表达分别为0．4382±0．0227和0．5270±0．0432，高于空气组（0．3458±0．0263和0．3760±0．0058）（P〈0．01），7d时下降为0．4343±0．0254，但仍高于空气组（0．3473±0．0220）（P〈0．01）。（3）高氧组Trx和TrxRmRNA表达强度均高于空气组，且二者分别于10d（0．6860±0．0811）和7d（2．0351±0．1600）时达高峰（P％0．05）。（4）Western印迹法检测ASK1蛋白水平变化与免疫组织化学法的结果一致。结论ASK1可能参与高氧肺损伤的发生发展，而Trx系统可能在其中发挥重要保护作用。

新生儿肺泡表面活性物质蛋白A1基因多态性与支气管肺发育不良相关性研究

目的探讨肺泡表面活性物质蛋白A1(SPA1)基因多态性与新生儿支气管肺发育不良(BPD)相关性。方法应用聚合酶链反应-限制酶切技术(PCR-RFLP)分析2008年7月至2010年10月同济医院接诊的38例武汉汉族BPD患儿与55例对照组的SPA1基因分布。结果 BPD组和对照组之间AA50基因型分布(P=0.038)和等位基因频率(P=0.012)差异有统计学意义。AA219、AA62、AA19三个位点基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。AA50病例组CC基因型明显低于对照组(7vs23),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SPA1上AA50位点基因多态性可能与新生儿支气管肺发育不良有关,CC基因型可能对BPD患病有保护作用。

肺泡表面活性物质蛋白B基因多态性与支气管肺发育不良易感性的关系

目的了解肺泡表面活性物质蛋白B(SPB)-18A/C和SPB1580C/T基因多态性与支气管肺发育不良(BPD)易感性的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析技术及基因测序技术检测57例BPD患儿及103例同胎龄无BPD早产儿的SPB-18及SPB1580基因多态性,比较2组SPB-18及SPB1580基因型和基因分布的差异。结果 1.SPB-18A/C基因型在BPD组与对照组AA、AC、CC基因型频率分别为14.0%、45.6%、40.4%和4.9%、31.1%、64.1%;A等位基因增加新生儿患BPD的风险:AC/CC与AA/CC的OR值分别为2.3(95%CI1.2～4.7,P=0.02)和4.7(95%CI1.4～16.2,P=0.01);2.SPB1580C/T基因型在对照组和BPD组TT、CT、TT分布分别为6.8%、45.6%、47.6%和12.3%、40.4%、47.4%,对照组和BPD组比较差异无统计学意义(χ2=1.50,P>0.05)。结论中国武汉汉族人中SPB-18基因多态性是BPD的危险因素,基因型为AA者是BPD易感人群。SPB1580C/T基因多态性与BPD发病无明显相关性。

肺泡表面活性物质B-18基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性关系分析

目的了解肺泡表面活性物质蛋白B(SPB)-18基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)易感性的关系。方法 (1)高分辨率熔解曲线法和基因测序法检测2009年5月至2010年12月武汉市妇女儿童医疗保健中心和华中科技大学同济医学院附属同济医院100例NRDS患儿及186名同胎龄儿SPB-18多态性位点基因型和等位基因的差异。(2)应用蛋白印记法分析技术(WB)检测2009年5月至2010年12月武汉市妇女儿童医疗保健中心31例基因型为SPB-18AA和36例SPB-18CC的足月新生儿支气管肺泡灌洗液中SPB水平,比较两组之间差异。结果 (1)SPB-18A/C基因在NRDS组和对照组中AA、AC、CC的基因型频率分别为11.0%、40.0%、49.0%和6.5%、31.7%、61.8%,两组基因型分布差异无统计学意义(χ2=4.83,P>0.05。);但等位基因A频率在NDRS组和对照组间分别为31.0%和22.3%,差异有统计学意义(χ2=5.19,P<0.05)。(2)基因型为SPB-18AA者比CC者支气管肺泡灌洗液中SPB蛋白水平低。WB灰度值分别为8002.3±452.9和14339.2±1076.3,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SPB-18基因多态性是NRDS的危险因素,A等位基因可能通过影响SPB水平,增加NRDS易感性。

小分子干扰RNA抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞中的硫氧还蛋白-2对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1、细胞色素C氧化酶I表达的影响

目的探讨小分子干扰RNA（small interference RNA，siRNA）抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2（thioredoxin-2，Trx-2）对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）脱氢酶亚单位1（NADHdehydrogenase subunit1，NDl）及细胞色素c氧化酶I（eytochrome C oxidase I，COXI）表达的影响。方法体外传代培养A549细胞系，将Trx-2序列特异性的SiRNA转染A549细胞，随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组与干扰后高氧组。分别于高氧或空气暴露12、24、48h提取A549细胞总RNA和蛋白。采用逆转录一聚合酶链反应技术测定Trx-2、ND1和COX I mRNA水平的表达，Western印迹技术检测Trx-2蛋白的表达。结果（1）序列特异性SiRNA可显著抑制Trx-2表达。（2）无干扰高氧组24hTrx-2mRNA水平为0．7799±0．1249，显著高于无干扰空气组（0．4424±0．1140）（P〈0．05）。干扰后高氧组24hTrx-2mRNA水平为0．2774±0．0174、48h为0．2587±0．0069，均显著低于干扰后空气组和无干扰高氧组（P〈0．05）。（3）无干扰高氧组24hND1 mRNA水平为0．6609±0．0368，显著低于无干扰空气组（0．8898±0．1049）（P〈0．05）。干扰后高氧组12hND1 mRNA水平为0．8848±0．0135，显著高于干扰后空气组（P〈0．05）。干扰后高氧组48hND1 mRNA水平为0．3808土0．0937，均显著低于干扰后空气组和无干扰高氧组（P〈0．05）。（4）无干扰高氧组12hCox 1 mRNA水平为1．7313±0．4331、24h为2．1929±0．6722、48h为2．0754±0．2584，均显著高于无干扰空气组（P〈0．05）。结论ND1、COXI参与高氧肺损伤发生发展过程，Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。

RNA干扰抑制高氧暴露下A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的研究

目的研究小分子干扰RNA（small interference RNA，SiRNA）抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2（thioredoxin-2，Trx-2）的表达及其与细胞凋亡的关系，探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系，将Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipo—fectamine 2000转染A549细胞，随机分为干扰后空气组、无干扰高氧组和干扰后高氧组。三组分别于高氧或空气暴露12、24、48h后采用RT-PCR技术测定Trx-2和细胞色素c（cytochromec，Cytc）mRNA的表达；采用流式细胞术检测三组A549细胞凋亡情况。结果（1）RT-PCR检测显示序列特异性SiRNA可显著降低Trx-2 mRNA的表达。（2）干扰后高氧组24hTrx-2 mRNA水平为0．2774±0．0174，48h为0．25874-0．0069，均低于无干扰高氧组（分别为0．7799±0．1249，0．4050±0．0842）（P均〈0．05）。无干扰高氧组24hTrx-2 mRNA水平高于干扰后空气组（O．4046±0．0161）（P〈0．05）。（3）无干扰高氧组24hCytc mRNA水平为0．3957±0．0903，48h为0．3438±0．0092，均低于干扰后高氧组（分别为0．6620±0．0395，0．4806±0．0977）和干扰后空气组（分别为0．5197±0．0377，0．4902±0．1079）（P均d0．05）。（4）干扰后高氧组A549细胞凋亡率明显高于干扰后空气组。结论SiRNA能显著下调A549细胞Trx-2 mRNA的表达；高氧暴露诱导SiRNA干扰后A549细胞Trx-2和Cytc mRNA表达的变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。

硫氧还蛋白在高氧肺损伤中的作用

支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）的具体发病机制尚未完全阐明，高氧暴露所导致的氧化应激损伤被认为是其发病的主要机制之一。近年研究显示硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）广泛参与体内氧化应激、核酸代谢、炎症反应、细胞生长及凋亡等多种生物学过程。

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的研究硫氧还蛋白（Trx）及其还原酶（TR）在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义。方法早产新生SD大鼠，生后第一天随机分为空气组和高氧组，每组64只。两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA，采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定Trx和TR mRNA表达；同时采用HE染色观察肺组织病理学变化，并进行辐射状肺泡计数（RAC）。结果病理学观察显示：与对照组比较，高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后，同时RAC值亦较空气组显著减少（P〈0．05）。高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强（P〈0．05），且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰。结论高氧上调肺组织Trx、TR表达；肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用。