粤北地区鸭源沙门菌分离鉴定及生物学特性研究

为了解粤北地区鸭源沙门菌流行菌株生物学特性,本研究对鉴定的鸭源沙门菌菌株进行了血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验及致病性初步试验。结果显示,病死鸭组织沙门菌分离率为57.14%(16/28);鉴定为鼠伤寒沙门菌占62.5%(10/16),肠炎沙门菌占31.25%(5/16)。分离菌株最少携带了12个毒力基因,最多携带了19个毒力基因。分离菌株对阿莫西林、青霉素、罗红霉素等耐药率超过90%,对多西环素、大观霉素、环丙沙星、阿米卡星等较为敏感,所有菌株呈多重耐药。分离菌株可导致小鼠发病和部分死亡。研究结果表明,沙门菌在粤北地区发病肉鸭中有较高感染率,流行的优势血清型为鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌,流行菌株普遍存在多重耐药性且具有一定的致病性。

动物免疫学实验课程教学改革实践

从实验教学内容、教学手段和考核评价3个方面入手,对动物免疫学实验课程教学现状进行分析,并以应用为导向进行教学改革实践。教学内容方面,选用自编动物免疫学实验教学指导书,结合案例设计实验教学内容和学时,以及加强对学生数据分析和应用能力的培养;教学手段方面,减少验证性和重复性实验,利用线上教学资源满足学生学习需求;考核评价方面,综合考核实验教学效果。结果表明,在该教学模式下,学生的就业竞争力得到明显增强,教学实践成效明显,为动物医学专业人才培养模式创新与优化提供参考。

5种猪源消化道传播病原体荧光定量PCR检测方法的建立

猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×10^(1)~1×10^(9),批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%~100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所建立的荧光定量PCR方法灵敏、特异、稳定,能够同时、快速区分检测上述5种猪源消化道传播病原体,可为猪肉制品从产地到餐桌全环节样品的监测提供有力的技术支持。

猪肠外致病性大肠杆菌SGPLB02株的分离鉴定与特性研究

研究了某屠宰场待上市猪分离的肠外致病性大肠杆菌SGPLB02菌株的特性.进行了细菌分离培养、形态与生化试验鉴定、药敏试验、毒力基因PCR检测、小鼠致病性试验等.鉴定结果显示该菌株生化特性符合大肠杆菌产酸产气、能分解多种糖分等的生化特性;药敏试验结果显示其对头孢噻吩、青霉素、氨苄青霉素等22种药物耐药,对头孢唑林、羧苄西林、丙氟哌酸及罗美沙星4种药物中度敏感,对头孢他啶、头孢拉定、头孢曲松钠等10种药物敏感;PCR检测出该菌株携带STb、fyuA、fimC等6种毒力基因;小鼠致病性试验结果表现为高剂量感染组小鼠均死亡,低剂量感染组小鼠均存活.研究为SGPLB02菌株能够成为疫苗候选株提供数据参考.

某规模化猪场猪瘟抗体水平的监测

为了对某猪场猪瘟疫苗免疫效果做出评估并进一步优化免疫程序,应用猪瘟疫苗抗体阻断ELSIA检测试剂盒对该场不同日龄仔猪及育肥猪的猪瘟疫苗抗体水平进行检测,对抗体合格率、平均阻断率和变异系数统计分析。检测数据显示,该猪场猪瘟免疫空白期过长,疫苗免疫接种后抗体合格率较低,增加了感染猪瘟病毒的风险,应及时进行猪瘟免疫程序的优化。猪瘟疫苗抗体水平监测对猪瘟防控具有重要意义,可为规模化猪场开展猪瘟疫苗抗体检测,制定合理的免疫措施提供参考。

粤北地区新生仔猪腹泻病原学调查及PEDV ORF3基因分子特征和遗传变异分析

为了解粤北地区新生仔猪腹泻病的主要病原,本试验采用实时荧光定量RT-PCR方法对2015年粤北地区6个规模化猪场31份新生仔猪腹泻样品进行了猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)检测,并对5株PEDV流行毒株ORF3基因进行测序分析。病原检测结果显示,83.87%(26/31)样品为PEDV阳性,没有检测到TGEV和PoRV阳性样品。对PEDV ORF3基因序列分析结果显示,5个流行毒株ORF3基因全长均为675bp,相互之间核苷酸同源性为98.7%~100.0%,与参考序列同源性为94.5%~100.0%,多个核苷酸位点发生了共同突变。系统进化树分析结果表明,PEDV可分为两个基因群,粤北地区流行的PEDV与2013-2015年间在中国部分地区、东南亚、北美洲和欧洲流行的PEDV遗传关系较近,位于基因1群中的同一个亚群,而2011-2012年中国流行的PEDV主要毒株及疫苗毒株则归类于另外两个基因亚群。结果表明,粤北地区新生仔猪腹泻主要是由PEDV感染引起的,PEDV基因随着时间推移呈现不断进化和变异趋势。

粤北地区仔猪腹泻源大肠杆菌毒力基因检测及致病性初步研究

采用PCR方法对56株仔猪黄白痢源大肠杆菌肠毒素和耶尔森菌强毒力岛(HPI)相关毒力因子STa、STb、LT和irp2进行检测,进而根据毒力因子基因型对部分菌株进行致病性试验。结果显示,38株受试菌检测到毒力因子,其中STa基因阳性率为3.57%,STb基因阳性率为53.57%,LT基因阳性率为7.14%,irp2基因阳性率为21.43%,检测的毒力因子表现为5种基因型,主要的毒力因子基因型是STb和STb+irp2。致病性试验显示毒力基因阳性菌株均对小白鼠具有致病性。结果表明,粤北地区致仔猪黄白痢大肠杆菌流行的主要毒力因子为STb,其次为irp2、少数菌株携带STa和LT毒力因子,相关毒力基因检测可以作为快速确定大肠杆菌致病性的重要依据。

华南地区猪输血传播病毒流行病学调查与分析

为了解华南地区规模化猪场猪输血传播病毒(TTV)感染状况,采用PCR方法对2005-2007年间来自广东、江西、湖南、福建和广西五省44个规模化猪场193份病料进行检测。结果显示,TTV1型阳性率为41.5%,TTV2型阳性率为21.8%,TTV1型和TTV2型共同感染阳性率为13.0%。TTV1型阳性猪场占72.7%,TTV2型阳性猪场占63.6%,TTV1型和TTV2型共同感猪场占43.1%,TTV阴性猪场占11.4%。研究表明,我国华南地区规模化猪场广泛存在TTV流行,各地区TTV1型阳性率为33.3%～57.1%,TTV2型阳性率为5%～25.7%,除湖南外,其他地区均存在TTV1和TTV2混合感染情况。

小反刍兽疫病毒分子生物学与疫苗研究进展

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是小反刍动物一种重要的传染病,是世界动物卫生组织规定的A类传染病,在我国被列为一类动物疫病,具有很高的发病率和死亡率,该病的广泛流行,给世界养羊业造成了巨大的损失。特别是该病2007年第一次在我国报道后,更应加强对它的研究。文章主要叙述了小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)分子生物学的研究情况,特别是主要基因特征和结构蛋白的功能,并对小反刍兽疫疫苗的使用和最新研究进展进行了总结。

山羊痘病毒载体研究进展

山羊痘病毒(GPV)为痘病毒科,羊痘病毒属的一个成员,基因组呈线性,全长约150kb,编码147个开放阅读框。GPV的胸苷激酶基因是复制非必需基因,插入外源基因而不影响病毒复制,TK基因具有高度保守性,可以作为构建重组病毒的同源臂。GPV宿主范围小,对人不具有感染性,对外源基因的耐受性强,是一种更为理想的活病毒载体。国外的研究人员已经构建了多种表达外源基因的重组GPV,我国的相关研究刚刚起步,随着对GPV研究的进一步深入,重组GPV病毒在预防反刍动物疫病中将会发挥重要作用。

携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定

将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt-egfpP启动子P7.5的下游,构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt-egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中,通过同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒,通过纯化和PCR鉴定,证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。

猪O型口蹄疫母源抗体的变化规律及应用

O型口蹄疫是猪场疫病防控的重点之一.对猪群进行科学免疫是猪场防控O 型口蹄疫病毒感染的重要途径,为确定某猪场仔猪O型口蹄疫的首免时间,以该场经O型口蹄疫灭活疫苗免疫的母猪所产的仔猪为研究对象,利用口蹄疫O型正向间接血凝抗体检测试剂盒对不同日龄段仔猪群母源抗体进行检测. 结果表明,37～44 日龄时,仔猪的母源抗体效价合格率为70%;45～51日龄时,仔猪的母源抗体效价迅速下降,合格率仅为40%左右.检测结果说明该猪场仔猪O型口蹄疫首次免疫最佳时间在45～50日龄比较适宜.

猪细环病毒流行病学及致病性研究进展

猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)1999年由美国学者报道,随后多个国家都相继证实了该病毒在猪群中广泛存在。文章就猪细环病毒流行范围、病毒遗传变异、易感动物、传播途径和其致病性最新研究进行综述。

我国部分地区猪圆环病毒2型和猪细环病毒混合感染的调查

为了解猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细环病毒(TTV)混合感染情况,用PCR方法对来自湖南、江西、广东、福建和广西五省区的193份猪组织样品进行PCV-2、TTV-1和TTV-2进行检测。结果显示,PCV-2感染率为61.1%(118/193),PCV-2和TTV-1混合感染率为32.1%(62/193),PCV-2和TTV-2混合感染率为16.9%(32/193),3种病原混合感染率为9.8%(19/193),2006年PCV-2和TTV的混合感染率最高。由此可见,目前猪群中存在PCV-2和猪TTV的混合感染,PCV-2和TTV-1型混合感染率高于和TTV-2型的混合感染率,且存在一定比例的三重感染情况。

表达gpt和EGFP基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定

在包含山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)疫苗株复制非必需区TK(Thymidine kinase)基因和背靠背启动子的质粒PtkPP的两个启动子下游插入EGFP(增强绿色荧光蛋白)基因,构建了质粒PtkPegfpP和PtkPPegfp,这两个重组质粒分别瞬时转染LT细胞,验证了启动子P11和P7.5能成功表达EGFP基因后,在PtkPP启动子P11的下游插入gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶)基因和EGFP基因,构建重组质粒PtkPgpt-egfpP,该重组质粒和GPV同源重组获得重组病毒rGPV-PtkPgpt-egfpP,利用MPA(霉芬酸)阻断核酸代谢途径筛选到稳定表达EGFP基因的重组GPV。为进一步开展GPV活载体疫苗的研究提供了技术平台。

哺乳期母猪猪瘟抗体变化及仔猪母源抗体水平和免疫效果研究

为了解母猪哺乳期猪瘟抗体变化和母源抗体水平对仔猪免疫效果影响,采用ELISA方法分别对40头母猪哺乳前后猪瘟抗体水平和13窝仔猪28日龄母源抗体水平进行检测,同时选择6窝仔猪跟踪检测了首免和二免后猪瘟抗体变化.结果显示:一个哺乳期母猪猪瘟抗体呈现不同程度下降,但抗体阻断率高于70%的母猪降幅度要小于阻断率低于70%的母猪;仔猪28日龄的母源抗体水平和母猪分娩当天抗体水平呈正相关;当仔猪母源抗体阻断率高于60%时,严重影响猪瘟疫苗免疫效果.研究结果表明,母猪群猪瘟抗体水平对商品猪群免疫效果影响明显,高效价和低离散度的母猪群抗体是商品猪群制定合理免疫程序和确保免疫效果的基础.

2014-2016年粤北地区规模化猪场伪狂犬病血清学调查与分析

为了解粤北地区猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)毒野毒感染及疫苗免疫情况,用ELISA方法对2014-2016年粤北地区25个规模猪场送检的3 895份(49批次)血清进行了伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)g E抗体和g B抗体检测.检测结果显示,粤北地区2014-2016年猪场PR野毒阳性率分别为78.57%、77.78%和64.71%,样品阳性率分别为7.02%、9.72%和10.44%.2014-2016年公猪、经产母猪、后备母猪、保育猪和生长育肥猪gE抗体总阳性率分别为11.72%、10.3%、9.49%、4.89%和14.61%,不同猪群间PR野毒感染率差异显著.2014-2016年不同猪群PRV gB抗体调查结果显示,公猪、经产母猪、后备母猪、保育猪和生长育肥猪总阳性率分别为96.55%、98.97%、92.4%、65.23%和35.79%.结果表明,粤北地区规模猪场PR野毒感染普遍存在,整体阳性率相对不高;种猪群PR疫苗免疫抗体水平较高,但保育猪群和生长育肥猪群疫苗抗体水平较低,成为野毒感染高风险群体.

猪瘟病毒分子生物学与致病机制研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒感染导致的高度接触性传染病,家猪和野猪对该病原易感.该病主要特征是高热、微血管变性而引起实质器官出血、坏死,是世界上危害最严重猪病之一,给养猪业带来重大损失.综述了猪瘟病毒基因组、蛋白质功能以及致病机理的最新研究进展,为相关研究人员参考.

猪瘟免疫程序优化及免疫效果评价

为了提高猪瘟疫苗免疫效果,增强猪群抵抗猪瘟病毒感染能力,采用ELISA方法对某猪场仔猪母源抗体消长情况进行监测,根据母源抗体消长规律对猪瘟疫苗首免日龄由原来的20日龄调整为35日龄,二免日龄由60日龄调整为65日龄。连续两批商品猪的猪瘟抗体监测数据表明,免疫程序调整后猪群的猪瘟抗体合格率上升,变异系数下降,疫苗免疫效果提高明显。

猪伪狂犬、繁殖与呼吸障碍综合征和链球菌混合感染诊断

广东某猪场,哺乳仔猪和保育猪舍仔猪出现以神经症状、呼吸困难和关节炎为主要特征的疾病。发病猪样品经过实验室检测,结果表明猪伪狂犬病毒g E抗体和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸呈阳性,细菌分离鉴定猪链球菌2型为阳性。综合临床症状、剖检变化及实验室检测结果,该例传染病诊断为猪伪狂犬病毒、繁殖与呼吸障碍综合征病毒和链球菌混合感染。