胃癌患者外周血中单个核细胞及CD3^+CD8^(low)T细胞中ILT3的表达及意义

目的探讨免疫球蛋白样转录子3(ILT3)在胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)和CD3+CD8lowT淋巴细胞亚群中的表达,并分析其表达与胃癌生物学行为和临床病理学特征的关系。方法选择80例胃癌患者及40例健康人对照者为研究对象,用实时荧光定量PCR检测PBMC的ILT3 mRNA的表达,流式细胞术(FACS)检测外周血CD3+CD8lowT淋巴细胞亚群中ILT3的表达,并结合临床病理特征进行分析。结果胃癌患者与健康人对照者PBMC的ILT3 mRNA相对表达量分别为8.465±0.674和6.234±0.556,差异有统计学意义(t=2.160,P<0.05);低分化和中、高分化胃癌患者PBMC的ILT3 mRNA相对表达量分别为8.217±0.433(n=66)和3.656±0.195(n=14),差异有统计学意义(t=4.802,P<0.01);肿瘤未侵及深肌层与侵及深肌层比较,PBMC的ILT3 mRNA相对表达量分别为3.495±0.243(n=24)和7.316±0.404(n=56),差异有统计学意义(t=5.971,P<0.01)。胃癌患者和健康人对照者CD3+CD8lowT淋巴细胞亚群ILT3阳性率为(75.53±2.20)%和(12.83±0.94)%,差异有统计学意义(t=19.67,P<0.01)。结论胃癌患者PBMC的ILT3 mRNA表达与肿瘤细胞分化和浸润程度有关。ILT3在胃癌患者CD3+CD8lowT细胞亚群的表达增强,提示其可能参与肿瘤的免疫逃逸。

免疫球蛋白样转录子2在胃癌细胞中的表达及临床意义

目的检测免疫球蛋白样转录子2(ILT2)在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达,分析其表达与胃癌生物学行为和临床特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测50例胃癌病理组织中ILT2蛋白的表达,并结合临床病理指标进行分析。采用实时荧光定量PCR和FACS流式细胞术检测6株高(MKN1)、中(SGC-7901,AGS)、低(MGC-803)及未分化(HGC-27,BCG-823)人胃癌细胞株ILT2的mRNA和蛋白表达。MTT法检测自然杀伤细胞(NK-92)和外周血淋巴细胞(PBMCs)对HGC-27、MKN1两种胃癌细胞的杀伤活性。结果 50例胃癌病理组织中ILT2表达阳性率为62.0%(31/50),正常胃组织不表达ILT2。在低分化型胃癌组织中ILT2表达阳性率为73.3%(22/30),在分化型组织中表达阳性率为45%(9/20),差异有统计学意义(χ2=4.089,P<0.05);肿瘤直径>5 cm时胃癌组织中ILT2表达阳性率为84.2%(16/19),明显高于肿瘤<5 cm时患者阳性率48.4%(15/31),差异有统计学意义(χ2=6.417,P<0.01)。6株人胃癌细胞均表达ILT2,ILT2在低分化和未分化胃癌细胞中表达阳性率高于中分化和高分化细胞(P<0.05)。在不同效靶比下人PBMC及NK-92细胞对MKN1细胞(ILT2低表达)的杀伤能力高于对HGC-27细胞(ILT2高表达)的杀伤(P<0.05)。结论胃癌组织细胞ILT2的表达与细胞分化程度和胃癌临床病理特征显著相关,PBMC和NK-92细胞对高表达ILT2的胃癌细胞的杀伤能力降低。提示ILT2可能参与肿瘤的免疫逃逸并可作为胃癌诊断和治疗的新靶点。

环孢菌素A对NK细胞免疫球蛋白样转录子4的表达和杀伤功能的影响

目的探讨CsA对NK细胞抑制性受体ILT4的表达及NK细胞杀伤功能的影响。方法以10mg／LCsA分别处理NK细胞12、24、36h作为3个实验组，以DMSO分别作用NK细胞12、24、36h作为3个对照组。通过RT—qPCR和流式细胞术分别检测各组中NK细胞ILT4mRNA和蛋白表达变化，同时测定人胃癌细胞株BGC-823、绒毛膜癌细胞株JEG-3HLA—G的表达，采用MTT法检测NK细胞经CsA处理36h前后对肿瘤细胞杀伤活性的变化。用药处理不同时间段ILT4表达数据比较先使H{单因素方差分析，再进行各均数问两两比较Dunnettt检验，而JEG-3、BGC-823细胞HLA—G的表达差异及NK细胞对JEG-3、13GC-823细胞的杀伤活性比较采用t检验。结果用RT—qPCR检测经CsA处理12、24、36h组的NK细胞ILT4mRNA相对表达水平依次为0．99±0．27、1．79±0．29、6．79±0．64，经DMSO处理的对照组分别为0．86±0．11、0．94±0．12、1．06±0．17；CsA处理NK细胞24、36h组的ILT4表达较对照组明显增加（t值分别为4．69、14．99，P均〈0．05），而作用12h前后组间的差异无统计学意义（t=0．78，P〉0．05）。刚流式细胞术检测经CsA处理12、24、36h组的NK细胞ILT4蛋白表达阳性率分别为（5．16±0．42）％、（6．23±0．48）％、（23．8±1．5）％，分别高于经DMSO处理12、24、36h组[（3．08±0．19）％、（3．35±0．12）％、（3．36±0．21）％]，且不同处理组在不同处理时间的阳性率比较差异有统计学意义（t值分别为7．70、10．06、20．72，P均〈0．01）；CsA处理NK细胞36h组的ILT4mRNA和蛋白表达均显著高于处理12h和24h组（t值分别为16．38、14．12、21．81、20．56；P均〈0．01）。同时，当经CsA处理前后且效靶比为10：1时，NK细胞对低表达HLA—G的肿瘤细胞BGC-823的杀伤率分别为（81．96±2．80）％、（60．23±1．57）％，CsA对NK细胞杀伤活性的抑制率为（26．48±2．42）％；而NK细胞对高表达HLA—G的JEG-3细胞的杀伤率分别是（53．46±2．21）％、（28．30±1．85）％，抑制率为（47．10±1．59）％。经CsA处理前后NK细胞对肿瘤细胞杀伤活性的变化表明CsA可抑制NK细胞对BGC-823和JEG-3细胞的杀伤（t值分别为11．74、15．16，P均〈0．01），对JEG-3细胞杀伤抑制率显著高于对BGC-823细胞的杀伤抑制率（t=12．31，P〈0．01）。结论CsA可上调NK细胞抑制性受体ILT4的表达，并通过ILT4与HLA—G相互作用影响NK对肿瘤细胞的杀伤。