B6-Co与B6小鼠眼睑角质形成细胞的原代无血清培养及比较研究

为进一步研究B6-Co小鼠眼睑发育缺陷机制,首次培养了小鼠眼睑角质形成细胞,并对B6-Co和B6小鼠眼睑角质形成细胞的迁移能力进行划痕实验分析,FITC-phalloidin染色比较B6-Co和B6小鼠肌动蛋白细胞骨架。结果表明,B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞迁移的数目和距离明显少于B6小鼠,细胞骨架异常,B6-Co小鼠眼睑闭合不全(EOB)是由小鼠眼睑角质形成细胞迁移缺陷造成的。

基于人工智能的心理倾诉亭设计与实现

我国有关部门的调查统计表明,目前近30%的中小学生有不同程度的心理问题,而心理倾诉亭的设计主要是为了缓解当代学生面临的各种心理压力。心理倾诉亭适用于各年龄段的学生,广大中小学生日常学习和生活的重要场所是学校,由于当代学生大多存在心理压力,又不愿与人交谈,所以心理倾诉亭这样绝对保密又封闭的空间满足了有压力学生的需要。在学校设立心理倾诉亭可以帮助存在心理压力的学生通过倾诉释放压力,在一定程度上解决当代学生面临的心理问题。心理倾诉亭具有语音采集及信号处理(智能语音对话)功能,同时可以根据采集的语音状况自动转接心理咨询师。

不同胚期B6-Co小鼠眼睑组织中血清反应因子的表达变化

背景 C57BL/6角膜混浊表型的突变系（B6-Co）小鼠具有出生眼睑闭合不全（EOB）表型,是研究眼睑发育机制的良好动物模型.探讨血清反应因子（SRF）与B6-Co小鼠EOB表型形成的关系可为人类先天性眼睑发育缺陷产生机制的研究提供理论依据.目的 检测SRF在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达.方法 采用肌内注射戊巴比妥钠安乐死术,分别剖取B6-Co母鼠以及表型正常B6母鼠体内胚胎期（E）16.5 d、E17.5 d和E18.5 d小鼠各9只,分离眼睑组织,分别采用实时定量PCR法和Western blot法检测小鼠眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的相对表达水平.取各胎龄的B6-Co小鼠和B6小鼠制作组织冰冻切片,利用免疫荧光技术检测并比较2种小鼠SRF在眼睑组织中的定位和表达强度.结果 B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF mRNA的相对表达水平分别为0.41±0.06和0.24±0.17,明显低于B6小鼠的1.03±0.17和1.01±0.09,差异均有统计学意义（P=0.025、0.017）;B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF蛋白的表达水平分别为0.08±0.01和0.08±0.01,明显低于B6小鼠的0.12±0.03和0.13 ±0.02,差异均有统计学意义（P=0.036、0.024）;而2种小鼠间E18.5 d时眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的表达量差异均无统计学意义（P=0.387、0.774）.免疫荧光染色显示,SRF蛋白多表达于B6-Co小鼠和B6小鼠眼睑组织的角质层细胞,但B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞中SRF蛋白表达的荧光强度明显弱于B6小鼠.结论 SRF在B6-Co小鼠眼睑组织中的表达量明显下调,SRF可能参与眼睑发育缺陷的发生过程.

小鼠上皮细胞培养及其在EOB研究中的应用

小鼠眼睑发育需要表皮角质形成细胞的增殖、分化、凋亡及迁移的协调作用。表皮角质形成细胞是研究眼睑闭合不全机制重要的细胞模型。表皮角质形成细胞培养时,贴壁差,增殖力低,生活力弱,生长条件要求高,传代次数有限。对近年来表皮角质形成细胞的体外培养方法及其在遗传性眼睑闭合不全研究中的应用进行综述,以期为表皮角质形成细胞的长期培养和研究人类先天性眼睑发育缺陷机制提供参考。

B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4突变候选基因克隆及测序

目的对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoRE酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由c转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸（P）变成谷氨酰胺（Q）。结论Ddx4基因发生单碱基突变，表明该突变可能与B6－co小鼠的EOB表型相关，但是有待于进一步研究。