3,3′-二吲哚甲烷抑制胃癌细胞系增殖作用及分子机制

目的探讨十字花科蔬菜的天然植物化合物3,3′-二吲哚甲烷(3,3′-diindolelmethane,DIM)在胃癌防治中的作用及其分子机制,为膳食植物营养应用于肿瘤预防提供实验依据。方法采用不同浓度的DIM(0、20、40、60、80、100、120μmol/L)处理人胃癌细胞系BGC-82324 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞存活率,Western blot检测各组细胞钙蛋白酶(Calpain)、激活转录因子4(ATF4)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白的表达水平;钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化;使用激活转录因子4(ATF4)的小干扰RNA(siRNA)特异性敲减胃癌细胞系中的ATF4,并用Western blot检测ATF4和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞存活率;应用钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理胃癌细胞系BGC-823后,Western blot检测Calpain、ATF4和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力改变情况。结果MTT法、Western blot及钙离子荧光探针法检测结果表明,随着DIM浓度升高,BGC-823细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),Calpain、ATF4和CHOP蛋白的表达上调(P<0.05),细胞内钙离子荧光强度增强;转染ATF4 siRNA后,BGC-823细胞ATF4蛋白的表达降低(F=16.17,P<0.05),且与DIM+si-NC组相比,DIM+si-ATF4组细胞存活率增加(F=74.46,P<0.05);进一步通过BAPTA-AM螯合细胞内钙离子后,与DIM组相比,DIM+BAPTA-AM组Calpain、ATF4和CHOP蛋白的表达降低(F分别为24.58、34.93、24.45,P<0.05),细胞存活率增加(F=31.13,P<0.05)。结论DIM可增加细胞质钙离子浓度,上调Calpain、ATF4和CHOP蛋白的表达水平,从而诱导胃癌细胞系发生内质网应激,抑制胃癌细胞的增殖。

外周血固有淋巴样细胞(ILC)平衡失调维持免疫抑制状态促进肺腺癌发展

目的 探讨肺腺癌患者外周血中固有淋巴样细胞(ILC)平衡失调后对下游单核巨噬细胞、辅助性T(Th)细胞平衡状态的影响,明确ILC平衡失调后对肺腺癌免疫状态以及转归的影响。方法 收集20例肺腺癌患者及正常体检者外周血,通过流式细胞术分析外周血中ILC、单核巨噬细胞及T淋巴细胞的百分比,并采用实时荧光定量PCR检测外周血中各型免疫细胞特征性的细胞因子分泌水平。结果 与正常体检者相比,肺腺癌患者M2型单核巨噬细胞、1型固有淋巴样细胞(ILC1)与ILC2比例上调,M1型单核巨噬细胞、CD4^(+)T淋巴细胞与CD8^(+)T淋巴细胞比例下调;M1型单核巨噬细胞与ILC1相关细胞因子mRNA表达下调,而M2型单核巨噬细胞与ILC2相关细胞因子mRNA表达上调;CD4^(+)T细胞相关细胞因子T细胞表达的T盒(T-bet) mRNA表达下调;CD4^(+)T细胞相关细胞因子GATA结合蛋白3(GATA3) mRNA表达上调;CD8^(+)T细胞的程序性死亡蛋白1(PD-1)表达上调。结论 肺腺癌患者外周血中ILC平衡失调促使单核巨噬细胞与Th细胞平衡失调,三者共同维持了肺腺癌患者的免疫抑制状态,从而促进肺腺癌发展。

多重耐药性铜绿假单胞菌耐药基因及菌株聚类分析

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类、氨基糖苷类等抗菌药物耐药相关基因存在状况和菌株的亲缘性。方法药敏试验用PhoenixTM-100鉴定药敏系统检测,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因、氨基糖苷类抗菌药物修饰酶基因和消毒剂抗性基因,采用PCR检测并用DNA测序仪证实。结果190株铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为98.9%、59.5%、45.8%、77.4%、34.2%、38.4%、15.3%、6.8%;对环丙沙星、左氧氟沙星耐药率为15.3%、21.0%;21株铜绿假单胞菌中blaVEB、blaGES和blaCARB阳性率分别为9.5%、9.5%和57.1%,oprD2基因缺失率达95.2%;TEM、SHV、OXA、PERI、MP、VIM、SPM、GIM和DHA编码基因均阴性;aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ,在21株铜绿假单胞菌中的阳性率分别为9.5%、61.9%和66.7%,qacE△1-sul1基因的阳性率为66.7%。结论临床分离的铜绿假单胞菌已携带多种耐药基因,oprD2基因缺失可能是铜绿假单胞菌耐受亚胺培南重要原因,聚类分析表明存在克隆传播医院感染。

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究

目的调查鲍曼不动杆菌耐药特点及β-内酰胺酶基因类型.方法用Phoenix-100系统对细菌进行鉴定和药敏试验.用琼脂稀释法测定头孢噻肟等6种抗生素的最低抑菌浓度;用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并对耐药基因测序分析.结果247株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南耐药率仅为3.2%和4.1%,而对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦等其余14种抗生素耐药率为31.9%～67.2%.20株多重耐药性鲍曼不动杆菌中17株具TEM基因,任选3株经DNA测序为TEM-1型基因,与GeneBank(χ 54604)比较,共有4处同义突变.未检出SHV、OXA、CTX-M、PER和VEB型β-内酰胺酶基因.结论本地区鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药除与TEM型耐药基因有关外,可能还与其他耐药机制有关.

USP26负性调控RLR信号通路对肠道病毒71型复制的影响

目的研究泛素特异性蛋白酶26(ubiquitin-specific protease 26,USP26)通过调控RLR信号通路影响肠道病毒71型(EV71)感染的机制和功能,深入了解EV71感染及其逃逸免疫防御关系,为临床治疗EV71感染提供依据。方法利用RT-PCR和Western blot分别检测EV71感染横纹肌肉瘤细胞(RD)0、2、4、8、12、24 h后的USP26 mRNA、VP1 mRNA及其蛋白质的表达水平;在RD细胞中设置转染USP26-siRNA(实验组)和转染阴性对照siRNA(对照组),再用EV71感染RD细胞,收集感染8、12和24 h时的mRNA样本,RT-PCR检测VP1 mRNA的表达情况;收集感染8 h时的蛋白质样本,Western blot检测细胞中MDA5、p-IRF3、IRF3蛋白的表达水平并计算p-IRF3/IRF3的相对比值;利用空斑试验检测病毒滴度水平。结果Western blot和RT-PCR结果表明,EV71感染过程中USP26的表达上调(P<0.05);RD细胞转染后实验组EV71中VP1 mRNA的表达水平明显低于同一时间的对照组(P<0.05),感染8 h实验组中MDA5蛋白和p-IRF3蛋白的表达水平均显著高于对照组(P<0.05);两组IRF3总蛋白的表达水平差异无统计学意义;空斑试验中实验组EV71的病毒滴度显著低于对照组(P<0.05)。结论USP26可通过负性调控RLR信号通路参与抗病毒免疫反应,敲减USP26可抑制EV71在细胞中的复制。

Gelsolin分子在乳腺癌组织中表达的研究

目的 探讨乳腺癌组织中gelsolin分子表达与癌组织浸润转移的关系 ,以及其与C erbB 2、PCNA之间的相关性。方法 运用免疫组织化学二步法 (Envision法 )对 4 2例福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织进行回顾性研究 ,并且选择 15例乳腺纤维腺瘤患者作为对照。结果 Gelsolin、C erbB 2和PCNA在乳腺癌组织中表达阳性率分别为 2 8.6 %、5 9.5 %和 4 7.6 % ,与乳腺纤维腺瘤组相比 ,差异具显著性 (P <0 .0 0 1或P <0 .0 1)。Gelsolin、C erbB 2和PCNA与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5、P <0 .0 0 1和P <0 .0 1) ;gelsolin在乳腺癌的表达减少 ,而C erbB 2和PCNA表达明显增加 ,两者间差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 细胞恶变后 ,胞浆中的gelsolin分子表达明显减少 ,因此可根据其表达程度为乳腺癌的诊断、治疗及指导预后提供可靠依据。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。

多重耐药性鲍曼不动杆菌耐药基因及菌株聚类分析

目的了解临床分离到的鲍曼不动杆菌耐药相关基因存在状况和菌株间的亲缘性。方法药敏试验用PhoenixTM100系统检测。用PCR扩增β-内酰胺酶基因、氨基糖甙类药物修饰酶基因、DNA拓扑异构酶基因等,并用DNA测序仪证实。结果247株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南耐药率最低,仅为3.2%、4.1%。20株多重耐药性鲍曼不动杆菌中,17株具TEM型β-内酰胺酶基因,氨基糖甙类药物修饰酶基因aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ基因检出率分别为80%、15%、30%、70%、15%、55%、80%。20株对环丙沙星耐药的鲍曼不动杆菌gyrA密码子均由TCA→TTA,氨基酸由Ser83→Leu,而85%菌株（17/20）的ParC氨基酸序列发生Ser80→Leu替代。聚类分析显示存在2株克隆株,其耐药表型基本一致。结论本院鲍曼不动杆菌携带多种β-内酰胺酶、氨基糖甙类修饰酶等耐药基因,喹诺酮耐药决定区基因突变是细菌耐受喹诺酮类药物重要原因。聚类分析表明,本院的鲍曼不动杆菌存在克隆传播。

产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌相关耐药基因研究

目的了解常州地区肺炎克雷伯菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因。方法用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)。采用聚合酶链反应(PCR)检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌16种相关耐药基因,并用DNA测序仪测序。结果120株肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率为44.2%(53株)。从53株肺炎克雷伯菌中检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA 8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75.5%、22.6%、18.9%、7.5%、11.3%、5.7%、3.8%和41.5%,其中2株菌同时检出6种β-内酰胺酶基因。基因测序证实为TEM-1、TEM-11、SHV-13、SHV-28、CTX-M-22、CTX-M-55、OXA-1和OKP-6等。结论本地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,是其对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一。

氟喹诺酮类药物对大肠埃希氏菌杀菌作用量效关系的研究

目的研究环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星３种氟喹诺酮类药物对大肠埃希氏菌４４１０２的抗菌效能和杀菌机理，并且观察了细菌在各种药物浓度下的形态变化。方法采用液体稀释法测定了３种药物在各种不同浓度下的杀菌活性及时间—杀菌曲线。结果３种药物对大肠埃希氏菌４４１０２的杀菌作用随药物剂量的增加而呈双相变化，环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的最强杀菌浓度分别为０．２ｍｇ／Ｌ、１．０ｍｇ／Ｌ和１．５ｍｇ／Ｌ，利福平（１５０ｍｇ／Ｌ）和氯霉素（２０ｍｇ／Ｌ）对３种药物有着不同程度的拮抗作用。１／２ＭＩＣ时细菌菌体明显变长，而高浓度时（１０００ｍｇ／Ｌ）菌体变化不大。结论氟喹诺酮类药物主要通过抑制细菌ＤＮＡ合成而发挥抗菌作用，在较高浓度时杀菌作用减弱。

临床微生物学检验专业实习带教实践探索

近年来,急性呼吸窘迫综合征、高致病性禽流感、埃博拉出血热等新发和突发传染病不断涌现,多重耐药菌、泛耐药菌等持续增加,这些问题的出现给临床诊断和治疗带来了极大的困扰,同时对临床微生物学教学工作提出了更高的要求。为此,该文对实习教学工作进行了一些改革与探讨,旨在为医疗机构培养出更多高素质的临床微生物学检验人才。

住院患者梅毒血清学试验实验室评价

目的评价4种常用梅毒血清学试验的可靠性。方法用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)筛查9100例住院患者血清标本,阳性血清再用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、免疫印迹法(WB)分析。结果用TRUST检测9100例低危住院患者血清样本,阳性93例,检出率为1.02%,WB阳性并结合临床确诊70例,假阳性率达24.7%。TP-ELISA试验阳性115例,阳性率为1.26%。TPPA复检112例阳性,与TP-ELISA一致率为97.4%,WB结合临床确诊108例阳性。TRUST阳性、TPPA阴性患者18例,均来自60岁以上老人、自身免疫疾病等患者。71～82岁老年组中TPPA阳性比例偏高(2.54%),WB结合临床确诊4例阴性,假阳性率达19.0%。结论TPPA是住院病人确诊梅毒较为可靠的方法,但在老年患者中存在假阳性,可使用免疫印迹法并结合临床确诊。

环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

目的建立环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测临床标本中金黄色葡萄球菌(SA)的方法。方法基于金黄色葡萄球菌femA基因部分序列设计一套(共4条)特异性引物,包括特异性识别靶序列上6个不同区域的两条内引物和两条外引物。通过条件优化,建立检测SA的LAMP方法。用该法检测临床分离的40株SA、12种其他革兰阳性球菌和8种革兰阴性杆菌,对方法特异性进行评价。SA标准菌株ATCC 25923进行10n稀释后测定方法的灵敏度。用LAMP方法及普通培养法检测临床60份咽拭子标本,评价方法的准确性。结果 LAMP技术最佳反应温度为65℃,临床分离的40株SA检测阳性率达100%;其他菌株均无非特异性反应;最低检测限14 CFU/test。以培养法为标准,LAMP试验检测60份咽拭子标本的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值为87.5%、100%、100%和98.1%。结论 LAMP技术操作简便、快速、灵敏度高、特异性强,可于60 min内快速筛查咽拭子标本中SA。

CD40分子在乳腺癌组织中表达的研究

目的 探讨乳腺癌组织中CD40分子表达与癌组织浸润转移的关系 ,以及其与ER、PCNA之间的相关性。方法 运用免疫组织化二步法 (Envision法 )对 42例福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织进行回顾性研究 ,并且选择 1 5例纤维腺瘤患者作为对照。结果 CD40、ER和PCNA在乳腺癌组织中表达阳性率分别为 35 .7%、54 .8%和 47.6 % ,与纤维腺瘤组相比 ,具显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ;ER、PCNA与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5或P <0 .0 0 1 ) ,CD40与淋巴结转移无相关性 (P >0 .0 5) ;CD40在乳腺癌的表达与ER、PCNA并不存在显著相关性 (P >0 .0 5)。结论 细胞发生恶变后 ,其分子表达常常发生改变 ,从而导致细胞的生物学行为异常。CD40分子在乳腺癌组织中的异常表达可为乳腺癌的诊断。

临床微生物快速诊断技术研究进展

传统的病原微生物检测技术操作繁琐、周期较长,且特异性不高,难以满足临床诊疗的需求。随着科学技术进步,人们开发了多种快速、准确、可靠的病原微生物检测方法。本文除回顾传统的培养鉴定技术及免疫学方法的发展外,也重点介绍了分子生物学、生物传感器、生物芯片、质谱等一些最新的检测技术,并作简要评述。

细菌L型的分离培养探讨

细菌Ｌ型的分离培养探讨史伟峰，周克勒（常州市第一人民医院检验科，２１３００３）细菌Ｌ型由于细胞壁的缺陷，许多特性与原菌不同，在普通培养基上不能生长，因此常造成临床上的漏检与误诊。本文报道从４例血液、２例胸腹水、１５例尿标本中分离到的２１株Ｌ型细菌。１...

CD138分子生物学特性与肿瘤关系的研究进展

CD1 38 (Syndecan 1 )是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成员 ,通过其硫酸乙酰肝素链共价结合多种胞外配体。CD1 38是一种细胞粘附分子 ,具促进细胞增殖、细胞 基质及细胞 细胞粘附等多种功能 ,其表达受高度调节并具细胞类型和发育阶段的特异性。CD1 38在某些肿瘤细胞的表达明显缺失 ,导致细胞丧失生长接触抑制的功能 ,使得瘤细胞大量增殖 ,并具极强的侵袭活性。