经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术四例

目的 报道4例经桡动脉入路行颅内动脉狭窄支架成形术的缺血性卒中病例并总结其治疗经验。方法与结果 回顾分析2022年青岛大学附属医院采用经桡动脉入路行颅内动脉狭窄支架成形术的4例缺血性卒中患者的诊断与治疗过程,狭窄分别位于左颈内动脉起始部、右椎动脉起始部、左椎动脉V4段、左椎动脉V4段与基底动脉起始部交界处,经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术顺利,术后狭窄均再通,术中及术后无一例出现并发症。结论 经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术治疗缺血性卒中安全、有效。

VPA增强ORI诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：探讨VPA与冬凌草甲素（oridonin，ORI）联合诱导HL-60细凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8法选取ORI和VPA最佳协同作用剂量；VPA和ORI单独或联合作用于HL-60细胞后，Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察细胞核形态学变化；Western blot检测凋亡相关基因caspase-3剪切片段的蛋白表达；预先加入或不加入caspase抑制剂处理HL-60细胞，采用Annexin V／PI流式试剂盒检测两药联合后细胞凋亡的变化。结果：Hoechst33342染色后荧光显微镜下，ORI＋VPA组比单独用药纽核碎裂数目明显增多；ORI和VPA单独作用组caspase-3活性片段表达较对照组高但均不如ORI＋VPA组明显；ORI＋VPA组细胞凋亡率（16．7±2．0）％。与对照组（1．2±1．5）％相比，具有显著差异（P〈0．05）；预先加入caspase抑制剂组细胞几乎没有凋亡，与对照组相比，不具有显著差异（P〉0．05）。结论：VPA确实能增强冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡，且凋亡机制与caspase凋亡通路密切相关。

Bax/Bcl-2表达变化在HDAC抑制因子TSA诱导脑胶质瘤细胞凋亡中的作用机制研究

目的:探讨HDAC抑制因子TSA对脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的诱导作用,并分析其作用的分子机制.方法:采用CCK8法检测HDAC抑制因子TSA对U251细胞增殖的影响;U251细胞的凋亡率采用流式细胞仪进行检测;caspase-3、caspase-9、bcl-2和bax mRNA表达水平按照RT-PCR检测试剂盒的说明进行检测.Western blot检测bcl-2和bax蛋白表达.结果:HDAC抑制因子TSA对U251细胞具有明显的增殖抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性;药物作用后U251细胞以早期凋亡为主;bcl-2 mRNA表达水平呈下降,bax mRNA表达水平上升,下游活化Caspase-3和Caspase-9基因表达上升;TSA可上调bax蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,bcl-2/bax比值降低.结论:HDAC抑制因子TSA主要通过降低bcl-2/bax比值和活化caspase-3/-9诱导U251细胞发生凋亡,该药具有抗脑胶质瘤的潜在应用价值.

sox4不同结构域的真核表达质粒的构建和鉴定

目的：构建并鉴定sox4四段不同结构域的重组真核表达质粒。方法：以HL-60细胞的总RNA为模板，用RT—PCR方法扩增出sox4基因cDNA，将产物克隆进真核载体pCMV—Flag质粒内，构建含sox4不同结构域的重组真核表达质粒。将pCMV—Flag—sox4重组质粒转染293T细胞，Westernblot检测sox4蛋白表达。结果：核酸序列分析sox4已成功插入pCMV—Flag载体中，转染pCMV—Flag-sox4的293T细胞中检测到表达的sox4蛋白。结论：成功构建了含sox4基因的重组真核表达质粒。

老年卒中后抑郁患者丘脑扩散张量改变的临床分析

目的分析老年卒中后抑郁患者丘脑扩散张量改变特征。方法从2018年1月至2020年6月间,选取我院收治的27例老年卒中后抑郁患者为试验组,另选取27例老年卒中无抑郁患者为对照组。收集患者的临床资料,进行MRI检查和DTI分析,比较两组患者的丘脑体积和FA值,分析丘脑改变和抑郁评分之间的相关性。结果①两组患者的丘脑长度、宽度测量值无明显差异(P>0.05);试验组丘脑体积明显大于对照组,有统计学意义(P<0.05)。②对照组丘脑前核、内侧核、外侧核的患侧FA值均低于健侧,但差异不显著(P>0.05);试验组丘脑内侧核、外侧核的患侧FA值明显低于健侧,有统计学意义(P<0.05)。③Pearson’s关联系数分析显示,丘脑前核的FA值和抑郁评分之间没有显著相关性(P>0.05);丘脑体积、内侧核、外侧核的FA值和抑郁评分之间有显著负相关性(P<0.05)。结论老年卒中后抑郁患者的丘脑亚区体积和扩散张量改变,和抑郁评分具有相关性,可能是引发抑郁的原因。

异补骨脂素对HL-60细胞增殖和凋亡影响及其机制探讨

目的异补骨脂素可抑制多种肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡,但是异补骨脂素对白血病细胞是否亦具有同样的作用却不明确。本研究旨在探讨异补骨脂素对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度异补骨脂素(10、20、40、80和160μg/mL)作用于HL-60细胞24和48h后对HL-60细胞的增殖抑制作用;光镜观察细胞形态学变化;Annexin V/PI双染后采用流式细胞术检测细胞凋亡的改变;流式细胞术检测细胞周期的变化;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Bcl-2家族Bcl-2和Bax的mRNA水平和蛋白水平表达变化。结果异补骨脂素对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性。10、20、40、80和160μg/mL异补骨脂素处理24h后,HL-60细胞的抑制率分别为(5.5±4.5)%、(13.7±3.1)%、(20.4±1.9)%、(35.3±5.5)%和(51.7±2.1)%,F=1 465.33,P<0.001;48h后对HL-60细胞的抑制率分别为(21.7±3.2)%、(34.6±5.6)%、(43.3±1.2)%、(61.4±8.76)%和(84.7±4.4)%,F=146.33,P<0.05,差异均有统计学意义。经异补骨脂素处理的HL-60细胞体积明显变小、且有凋亡小体产生,呈现典型的凋亡形态学改变;40μg/mL异补骨脂素处理HL-60细胞24h后细胞早期凋亡率为(16.6±2.7)%,与对照组的(2.8±1.5)%相比,差异有统计学意义,P<0.05;异补骨脂素不引起细胞周期阻滞,G0/G1期前出现典型亚二倍体凋亡峰。RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,异补骨脂素可上调Bax、下调Bcl-2的mRNA水平和蛋白水平表达。结论异补骨脂素可抑制人急性髓系白血病HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制与促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白表达相关。

黄芩苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡影响机制研究

目的观察黄芩苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法不同浓度(5、10、20、40、80和160μg/mL)的黄芩苷作用于人宫颈癌HeLa细胞24、48和72h后,采用CCK-8法检测黄芩苷对HeLa细胞增殖的影响;40μg/mL黄芩苷作用于HeLa细胞24h后,采用普通光学显微镜观察细胞形态学变化,Hoechst 33342染色后在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态学改变;AnnexinⅤ/PI双染后采用流式细胞术检测细胞凋亡的改变;蛋白质印迹法检测Caspase家族中Caspase-3、-8、-9蛋白表达变化。结果黄芩苷可明显抑制HeLa细胞增殖,随时间延长及剂量增加,细胞增殖抑制率也明显升高,P<0.05;经40μg/mL黄芩苷处理24h的HeLa细胞明显变小、变圆、且有凋亡小体产生,细胞核固缩、碎裂,呈现典型的凋亡形态学改变;40μg/mL黄芩苷处理HeLa细胞24、48h后细胞早期凋亡率分别为(10.5±1.5)%、(21.8±2.4)%,与对照组的(1.3±0.9)%相比,差异均有统计学意义,P<0.05;蛋白质印迹检测法结果表明,黄芩苷处理后Caspase-3蛋白由0.09上调至0.65,Caspase-8蛋白由0.04上调至1.22,Caspase-9蛋白由0.12上调至1.10,提示剪切片段蛋白的表达呈上调趋势。结论黄芩苷可抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase相关。

千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡机制研究

目的探讨Bcl-2/Bax信号通路在千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡中的作用及其分子机制研究。方法HL-60细胞培养体系中分别加入大、中、小剂量千金子甾醇溶液,甾醇溶液作用细胞24h后,采用CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2/Bax、Caspase-9和Caspase-3mRNA转录水平,ELISA法检测Caspase-9和Caspase-3蛋白活性。结果 CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,千金子甾醇能明显抑制HL-60细胞增殖(F=42.97,P<0.001),各个浓度之间进行比较,差异有统计学意义,P<0.05。流式细胞术检测细胞凋亡率显著增加(F=56.74,P<0.001),经10、20和40μg/mL千金子甾醇处理24h后,HL-60细胞早期凋亡率分别为(23.4±3.1)%、(35.7±4.3)%和(53.2±3.9)%,细胞呈典型凋亡形态学改变。千金子甾醇作用后,Bax mRNA转录水平显著升高,Bcl-2mRNA转录水平显著降低,且呈化合物剂量依赖性(F=53.45,P<0.001),Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平升高,且呈化合物剂量依赖性(F=34.21,P<0.001),千金子甾醇对HL-60细胞作用24h后Caspase-9和Caspase-3蛋白活性显著升高(F=54.33,P<0.001),且随着千金子甾醇浓度增加蛋白活性逐渐升高。结论千金子甾醇通过调节Bcl-2/Bax凋亡信号通路,诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈明显剂量依赖性。

PMA诱导K562细胞向单核细胞分化机制探讨

目的:探讨佛波酯(phorbol-12-myristate-13-ace-tate,PMA)诱导K562细胞向单核/巨噬细胞分化的作用机制。方法:采用CCK8法检测0、6.25、12.5、25、50、100和200nmol/L PMA对K562细胞增殖的影响,应用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达变化,采用RT-PCR分析TGF-β1及其下游基因SMAD3和SMAD4在基因水平的表达趋势,并采用蛋白质印迹法检测TGF-β1在蛋白水平的表达变化。结果:K562细胞经6.25nmol/L PMA处理后72h增殖抑制率为(22.03±2.7)%,12.5nmol/L为(31.04±4.3)%,25nmol/L为(35.03±3.5)%,50nmol/L为(47.01±4.1)%,100nmol/L为(55.06±5.2)%,200nmol/L为(76.72±5.4)%,差异有统计学意义,F=2.24,P<0.05。PMA能抑制K562细胞的增殖并能促进其分化,作用效果随剂量的加大逐渐增强;细胞形态学上趋向于成熟分化;细胞表面分子CD11b和CD14的表达量升高。在mRNA水平,TGF-β/SMAD信号通路因子TGF-β1的表达量随时间的延长逐渐升高其下游因子SMAD3和SMAD4的表达也呈上升趋势;在蛋白水平,TGF-β1的表达亦呈上升趋势。结论:PMA可通过促进TGF-β/SMAD信号的传导诱导白血病细胞株K562细胞向单核/巨噬细胞分化。

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化分子机制探讨

目的探讨全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中PADI4的变化与作用机制。方法 ATRA诱导HL-60细胞24、48、72和96h后,采用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;采用RT-PCR分析PADI4在基因水平的表达趋势,蛋白质印迹法检测PADI4在蛋白水平的表达变化;RNAi技术干扰PADI4后流式细胞仪检测CD11b变化,蛋白质印迹法检测PADI4、p42/44、p65、p105和p55等蛋白水平变化。结果 HL-60细胞经ATRA诱导后与对照组相比,Wright-Gimesa染色显示核质比明显减小,核有凹陷及分叶,杆状核、分叶核现象明显增多。流式细胞术检测结果显示,细胞表面分子CD11b表达由2.1%升高到48.9%,升高了346.8%,t=411.51,P<0.01;RT-PCR结果显示,PADI4在mRNA水平表达随时间延长逐渐升高,F=318.046,P<0.001,r=0.595;PADI4与内参基因GAPDH灰度值的比值从0.122±0.033升高到0.464±0.077,差异有统计学意义,F=16.002,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,PADI4在蛋白水平表达随时间延长逐渐升高,F=16.002,P<0.001,r=0.873;PADI4与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.077±0.045升高到0.263±0.095,差异有统计学意义,F=221.8,P<0.000 1。蛋白质印迹法检测结果显示,P-p44/42与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.470±0.023下降到0.320±0.012,差异有统计学意义,F=92.942,P<0.001。结论 ATRA诱导HL-60细胞定向粒系分化的过程中,PADI4促进HL-60细胞向粒系分化,而且PADI4可能是通过促进MAPK信号通路中的p42/44磷酸化而发挥作用。

浅析外来文化对汉代“百戏”的影响

'百戏'是汉代一种独特的文化,可通俗地理解为杂技,但却不是现代意义上的杂技。在汉代中外文化交流频繁的时代背景下,'百戏'以它独特的方式向人们诉说着它在中外文化交流中所处的地位。在文中,笔者通过搜集有关汉代'百戏'的画像石、画像砖等图像资料,对其中所表现出的外来文化因素进行相关研究。

TSA上调miR-4298靶向抑制PADI4表达在诱导U251细胞凋亡中的作用

目的探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法实验分为TSA组(0.2μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响;流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平;反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化;Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响;PADI4转染U251细胞,观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组,即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果U251细胞经0.2μmol/L的TSA作用4 d后,对照组的吸光度(A)值为1.168±0.148,高于TSA组的0.737±0.007,差异有统计学意义(t=4.948,P=0.008)。与对照组相比,经0.2μmol/L TSA处理48 h后,U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49%vs.4.99%±0.13%,t=11.190,P<0.001)。与药物作用前相比,TSA作用48 h后,PADI4基因表达(0.386±0.020 vs.0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs.0.777±0.031)均有所降低,差异均有统计学意义(t=30.400,P<0.001;t=16.770,)P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs.1.003±0.136;t=8.487,P=0.001),并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关(r=-0.877,P=0.002)。Luciferase实验证实,miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比,miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低,差异均有统计学意义(均P<0.001);其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比,miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加,差异有统计学意义(P=0.005;P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比,miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高,差异有统计学意义(P<0.001;P=0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比,miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加,差异有统计学意义(均P<0.001)。救援实验中,miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平(P<0.001),miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平(P=0.002)。结论miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程,miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。

中西医结合治疗脑梗塞临床效果探析

结合中西医结合疗法对脑梗塞患者临床效果的分析和研究,总结治疗体会。方法 随机选取2019年12月-2021年12月来我院就诊的300例脑梗塞病人分为两组,试验组150例采用中西医结合疗法(采用中药活血化浊汤联合西药氯吡格雷与阿司匹林进行治疗),对照组150例采用单用西医疗法(采用氯吡格雷和阿司匹林进行治疗)。结果:试验组患者治疗成效明显高于对照组(P<0.05)。结论 针对脑梗塞患者,中西医结合疗法(采用中药活血化浊汤联合西药氯吡格雷与阿司匹林进行治疗),能够明显的提升治疗成效,故而,要对此联合治疗模式进行积极的推广,从而帮助患者早日康复。