种特异性PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

阪崎肠杆菌是一种目前认为以奶粉为传播媒介的食源性条件致病菌,通过α-1,4-葡萄糖苷酶基因和ompA基因分别设计引物ESF-ESR和ESSF-ESSR,进行单重和双重PCR方法研究,结果显示所有阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性,阴性对照均未扩增出目的片段;纯菌单重PCR灵敏度分别为102cfu/mL和101cfu/mL,双重PCR灵敏度为103cfu/mL;在有或无其他细菌存在时,人工污染阪崎肠杆菌模拟样品单重PCR检测灵敏度分别为103cfu/mL和102cfu/mL,双重PCR检测灵敏度为104cfu/mL;实际样品检测显示PCR方法与传统方法具有很好的一致性。结果表明:该PCR方法具有很好的种特异性和灵敏度,能够克服奶粉中杂菌对快速检测阪崎肠杆菌造成的干扰,减少以保守序列来设计引物导致假阳性结果的出现,可以较好地应用于奶粉中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。

PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。

中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征

胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质,也是结缔组织的主要蛋白成分。与陆生动物(如猪、牛等)比较,水生动物胶原蛋白具有优良的理化性质和生理活性功能,已引起人们的广泛关注。中华鳖是我国传统的名贵水产品,其裙边胶原蛋白含量丰富,具有极高的药用价值和营养价值。采用胃蛋白酶酶解法在酸性条件下提取中华鳖裙边胶原蛋白,研究酶添加量、底物浓度、提取时间对提取效果的影响,确定了制备裙边胶原蛋白的最适条件为:酶添加量4mg/mL,底物浓度4%,提取时间14h。粗提胶原蛋白通过盐析、透析等纯化步骤,再经SDS-PAGE电泳、热变性温度测定、紫外及傅立叶变换红外扫描等技术方法分析了胶原蛋白的生化特征,结果显示提取到的裙边胶原蛋白具有较高的纯度,含有两条α链和1条β链,属于典型的I型胶原蛋白。研究表明:中华鳖裙边胶原蛋白可以作为猪皮、牛皮胶原蛋白的有效替代品,这为今后进一步综合开发利用鳖类裙边胶原多肽提供了科学的理论依据。

斑点叉尾鱼骨胶原多肽螯合钙的制备及其特征

以斑点叉尾鱼骨酶解胶原多肽液和氯化钙为原料,螯合率为指标,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,并考察温度、pH、时间、多肽与钙的质量比对螯合率的影响。在单因素实验结果的基础上,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面分析法,确定最佳螯合工艺条件为温度60℃、pH 5.4、时间1.5 h、质量比2∶1,此条件下,螯合率达82.53%。紫外吸收和傅里叶变换红外光谱扫描的结果表明,骨胶原多肽与钙形成了螯合物,且其氨基酸组成符合典型的胶原样蛋白特征。

结冷胶和超高压对鱼糜凝胶性质的影响

为改良鱼糜凝胶性质,将结冷胶添加到白鲢鱼糜中,然后超高压处理,经过二段加热形成鱼糜凝胶,测定其凝胶强度、白度、pH值,研究超高压压力、保压时间和结冷胶添加量对白鲢鱼糜凝胶性质的影响。结果表明,压力大于300MPa,保压时间大于10min,结冷胶添加量大于0.8%时凝胶强度变化不显著。通过正交试验确定了最优工艺条件,即:压力300MPa,结冷胶质量分数1.0%,保压时间15min。各因素对鱼糜凝胶强度影响程度次序依次为:压力>保压时间>结冷胶质量分数。研究表明,结冷胶和超高压能够促进白鲢鱼糜形成良好的凝胶,在鱼糜加工中具有广泛的应用前景。

鲢鱼冷冻鱼糜抗冻剂的复配研究

选取功能性食品抗冻剂海藻糖和乳糖醇,并与传统商业抗冻剂混合,以得到"低甜、低热"且经济适用的复合抗冻剂。以白度、保水性、凝胶强度和盐溶性蛋白为指标,通过L9(34)正交试验探寻新的冷冻鱼糜复合抗冻剂配方。结果表明最佳配方为:海藻糖4%、乳糖醇3%、蔗糖1%、山梨醇2%,新的复合抗冻剂比商业抗冻剂甜度低,且能达到理想的抗冻效果。

卡拉胶和超高压对鱼糜凝胶性质的影响

以白鲢鱼糜为研究对象,将卡拉胶添加其中,经超高压处理后,再经二段加热处理形成鱼糜凝胶,测定其凝胶强度、白度值、pH值,研究压力、保压时间和卡拉胶质量分数对白鲢鱼糜凝胶性质的影响。单因素实验表明,当压力大于300 MPa时凝胶强度显著下降;保压时间大于10 min,卡拉胶质量分数大于0.8%时凝胶强度变化不显著。通过正交实验确定了优化工艺条件为:压力300 MPa、保压时间10 min、卡拉胶质量分数0.8%。各因素对白鲢鱼糜凝胶强度影响程度由大至小依次为压力、保压时间、卡拉胶质量分数。研究结果表明,超高压处理协同添加卡拉胶能够促进白鲢鱼糜形成良好的凝胶。

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能。以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0%、酶解时间3 h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08%。酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力。总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景。

鮰鱼皮明胶抗氧化肽的制备工艺研究

通过测定鮰鱼皮明胶蛋白酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,筛选得出胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解物具有较高的清除羟自由基(·OH)的活性;用正交试验L9(34)对胰蛋白酶的水解条件进行优化,确定最佳的水解条件为温度40℃、pH7.5、酶与底物质量浓度比(E/S)3.5%、底物质量浓度2.5g/100mL、酶解时间3h。此外,本研究还采用胰蛋白酶和胃蛋白酶进行了复合酶解试验,确定复合酶解的最佳水解条件为先用胰蛋白酶酶解3h,然后用胃蛋白酶酶解3h,此时得到的酶解液自由基清除率最高,达到47.38%。

水酶法提取斑点叉尾鮰内脏油的工艺研究

为提高鱼类加工废弃物的综合利用率,以斑点叉尾鮰内脏为原料,采用水酶法制备鱼油。结果表明:水酶法提取鱼油的最佳工艺条件为初始pH7.5、料液比1:1、加酶量3500U/g、酶解温度55℃、酶解时间0.5h,该条件下鱼油的提取率达到80.94%;提取到的鱼油(即粗鱼油)外观呈黄褐色,具有鱼腥味和轻微的酸败味,其过氧化值较低,而酸值相对较高;粗鱼油中的饱和脂肪酸相对含量为19.42%,单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸分别为61.76%和16.83%,∑n-3/∑n-6的脂肪酸比值达到3.63。表明斑点叉尾鮰内脏是生产鱼油的良好来源。

漂洗工艺对鲢鱼鱼糜凝胶强度和色泽的影响

探讨清水漂洗次数、盐水漂洗次数和漂洗温度对鲢鱼鱼糜凝胶强度和白度的影响。结果表明:清水漂洗和盐水漂洗可以显著的提高鲢鱼鱼糜的凝胶强度和白度,采用清水漂洗2次再用盐水漂洗1次的漂洗处理,得到的鲢鱼鱼糜凝胶强度和色泽较好。漂洗温度对鲢鱼鱼糜的凝胶强度和白度无显著影响,但为保持鱼肉的新鲜,漂洗温度不宜过高。

黄缘盒龟多肽对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠抗氧化能力的影响

为研究黄缘盒龟多肽对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠抗氧化能力的影响,本试验采用连续皮下注射D-半乳糖(200mg/(kg·d))建立小鼠亚急性衰老模型,造模6周。建模同时灌胃给予黄缘盒龟多肽50、100、200 mg/(kg·d),以肌肽(50 mg/(kg·d))为阳性对照物质。6周后对小鼠血清、肝组织和脑组织中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力进行测定。研究表明,黄缘盒龟多肽的抗氧化效果与黄缘盒龟多肽的给药剂量呈正相关关系。与模型对照组相比,黄缘盒龟多肽能极显著提高血清中SOD活力41.71%和降低血清中MDA含量28.80%(p<0.01);也能显著提高血清中T-AOC水平31.08%、脑中SOD活力22.08%及血清和肝组织中GSH-Px活力22.94%和14.53%(p<0.05);同时使肝组织和脑组织中MDA含量显著降低22.03%和11.88%(p<0.05)。因此,黄缘盒龟多肽可以提高D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的抗氧化能力,具明显的抗衰老作用。

阪崎肠杆菌的生物学特性及其检测技术

阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)是寄生于人和动物肠道的条件性肠道致病菌,能引起新生儿脑膜炎,致死性小肠结肠炎以及菌血症等,具有产生α-葡萄糖苷酶和吐温80脂酶、不发酵三梨醇以及无磷酸胺酶活性等生理生化特征,并且对干燥、渗透压和抗生素等有很强的抗性。该菌自然来源非常广泛,在水、土壤、植物根茎、动物肠道甚至加工食品都可存在,其中婴儿配方奶粉是婴儿感染阪崎肠杆菌的主要渠道。近年来基于α-葡萄糖苷酶反应的特异性生化检测和PCR扩增的分子检测技术已取得重要进展,但是目前还缺乏一种稳定检测该菌的分子分型检测技术。

银鲫肠道内抑制嗜水气单胞菌的潜在益生菌筛选及其特性研究

从养殖的银鲫(Carassius auratus gibelio)肠道中分离纯化得到60株具有不同特征的菌株,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)为指示菌,点种法初筛得到12株菌株,再通过牛津杯实验筛选出4株对嗜水气单胞菌有明显抑制作用(抑菌圈直径在14 mm以上)的益生菌疑似株,并进行了耐热试验、耐酸试验和人工肠液耐受试验,筛选出最符合益生菌功能特性的菌株YJ-9。该菌株在90℃高温水浴30 min后相对存活率为1.51%,在pH3的液体培养基中4 h内相对存活率为8.37%,活菌数都保持在106 CFU/mL以上,并且可以在人工模拟肠液中缓慢生长。在急性毒力实验中,10倍于实验剂量的菌株YJ-9对银鲫无毒,动物保护实验证明菌株YJ-9能有效增强银鲫对嗜水气单胞菌的免疫抵抗力,相对保护率达到80%。研究结果表明,菌株YJ-9可以作为一个新的饲用微生态制剂候选菌种。

白鲢鱼糜漂洗液中蛋白质的回收再利用

采用褐藻胶作为蛋白絮凝剂回收白鲢鱼糜漂洗液中的蛋白质,研究将回收蛋白添加到原鱼糜中加以利用的可能性。结果表明,以2%褐藻胶作为凝聚剂,蛋白质的回收率超过85%。回收蛋白质添加于鱼糜中的比例控制在5%以内,适宜添加量为1%～3%,在此范围内添加回收蛋白,制得的鱼肠其凝胶强度下降较小、白度显著升高。通过对鱼糜漂洗液中蛋白质的回收再利用,不仅可以降低环境污染,而且有助于推进废弃蛋白资源的综合利用。

白鲢鱼糜低钠复合盐配方响应面法优化

为降低白鲢鱼糜制品中的钠盐含量,在斩拌过程中添加氯化钠、氯化钾和氯化钙3种盐类,以凝胶强度、持水性和白度为评价指标,研究三者对鱼糜凝胶特性的影响。在单因素试验的基础上,采用Box-Benhnken试验设计和响应面分析法得到低钠盐优化配方。结果表明,白鲢鱼糜低钠盐的最优配方为:氯化钠质量分数1.0%、氯化钾质量分数1.0%、氯化钙质量分数0.5%,其中钠盐添加量的质量分数降低至1.0%,且复合盐总添加量的质量分数仅为2.5%。此条件下,白鲢鱼糜凝胶强度达到196.50 g.cm,持水性为76.37%,白度为75.44。

比较两种絮凝剂对白鲢鱼糜漂洗液中水溶性蛋白的回收效果

研究褐藻胶和三氯化铁对白鲢鱼糜漂洗液中水溶性蛋白的絮凝功能,并比较它们的絮凝效果。鱼糜漂洗液含水溶性蛋白6.14 g/L,使用褐藻胶,其蛋白回收率可达到70%以上,而三氯化铁只能达到40%。采用响应面法(RSM),选择絮凝功能相对较好的褐藻胶进一步再做两因素组合试验,得到最佳工艺条件为每250 mL漂洗液需添加浓度为1.0%的褐藻胶10 mL。经测定,絮凝物(干基)含蛋白61.39%,脂肪2.90%,灰分21.58%。通过对鱼糜漂洗液中水溶性蛋白的回收,不仅可以降低环境污染,而且有助于推进废弃蛋白资源的综合利用。

基于虾类食品的保鲜保藏技术研究进展

随着世界渔业的迅速发展,虾类食品的消费与贸易在国际水产品市场上占据着日益重要的地位。我国是世界上最大的虾类食品生产国,也是主要的虾类食品出口国,但与发达国家相比,目前我国的虾类食品生产和加工技术水平仍然较低,尤其是在虾类食品的保鲜、保藏技术方面。因此有必要对虾类食品的各种杀菌技术及其应用进行研究,并总结有效的保鲜、保藏方法。本文综述了传统保藏、化学和生物技术、低温保鲜、加热处理、气调保藏、物理杀菌技术等基于虾类食品的保鲜、保藏技术研究进展,为虾类食品的货架期延长提供一定的理论参考和实践依据。

斑点叉尾鮰鱼骨脱脂及其制备CMC活性钙的工艺优化

以斑点叉尾鮰鱼骨为实验材料,对脱脂鮰鱼骨粉制备工艺,脱脂骨粉在不同的温度、时间、柠檬酸和苹果酸的酸比例、酸质量浓度、骨粉粒度条件下转化成活性钙的效果进行研究。结果表明,鮰鱼骨脱脂的最佳工艺方案为5g/100mL NaOH溶液浸泡6h,脱脂后的鱼骨粉总钙含量为30.38%。实验采用柠檬酸和苹果酸活化脱脂鮰鱼骨粉制取CMC活性钙,其最佳工艺条件为柠檬酸和苹果酸的比例1:2、酸质量浓度15g/100mL、骨粉粒度120目、温度100℃、提取时间60min。此时,钙提取率可达87.13%。

巴氏灭菌即食小龙虾特定腐败菌的16S rRNA鉴定

为研究巴氏灭菌即食小龙虾食品(采用铝箔袋真空包装)的腐败菌菌相组成,采用传统分离纯化、菌落外形观察及细菌形态学镜检,并结合16S rRNA分子生物学手段和限制性内切酶消化分析的方法,选用处于货架期末(已胀袋)的小龙虾样品进行了鉴定试验。结果共从样品中分离到82株典型可培养菌,其中优势菌为苏云金芽孢杆菌(70株,占85.37%)和粘质沙雷氏菌(7株,占8.54%),另有非优势菌5株(6.09%)。研究表明,产芽孢杆菌是该小龙虾食品的优势腐败菌,常规巴氏灭菌很难将其彻底杀灭,应采用其他更有效的灭菌方法或者使用有较强针对性的防腐剂,从而延长该类食品的货架期。