细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的：探讨细粒棘球绦虫（Eg）转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导BALB／c小鼠产生的免疫应答及其对Eg原头节攻击感染的保护性作用。方法：热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白，再用无菌双蒸水将叶蛋白提取液的浓度配制成20g／L。分别用100μL灌胃和10灿滴鼻免疫小鼠，每3d免疫1次，连续免疫2个月。同时设转空质粒（pBI121）苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白对照组。末次免疫后8周，用Eg原头节腹腔注射进行攻击感染（50个Eg原头节／每鼠），感染后24周剖杀小鼠，分离并称重细粒棘球蚴组织，计算囊重减少率；采眼球血，常规ELISA检测血清中IgG及其亚类和IgE水平；取脾，分离脾细胞，流式细胞术（FCM）检测脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的百分比；脾细胞体外经脾细胞悬液或加入殴粗抗原（EgAg）、伴刀豆球蛋白A（ConA）或脂多糖（LPS）刺激培养后，四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测免疫小鼠脾T淋巴细胞增殖情况，AnnexinV—FITC和碘化丙啶（PI）双染色法检测脾细胞的凋亡发生率，常规ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL—12、IL-10、IFN—γ和TNF—α水平。结果：与正常蛋白对照组相比，疫苗口服接种组小鼠检获包囊质量明显降低，囊重减少率为64．1％，脾细胞凋亡发生率明显降低，脾T细胞增殖水平、CD4^＋T细胞亚群的百分比和CD4^＋／CD8^＋比值显著升高，血清中IgG、IgG2b和IgE水平显著升高，脾细胞培养上清液中IFN-γ、1L-12和TNF—α水平显著增高，IL-10水平明显降低。结论：细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗口服接种可抑制免疫鼠脾细胞发生凋亡，诱导免疫鼠脾T细胞增殖，产生Th1型细胞免疫应答以对抗瞻原头节的攻击感染，CD4^＋T细胞亚群、IgG、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫应答。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,再用无菌双蒸水将叶蛋白提取液的浓度配制成20μg/μl。88只Balb/c小鼠随机分为2组,分别用100μl灌胃和10μl滴鼻免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2个月。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,眼球取血,常规酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IgG及其亚类和IgE水平;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪(flow cytometr,FCM)检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,体外经脾细胞悬液或加入Eg粗抗原(EgAg)、伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫鼠脾T淋巴细胞增殖情况,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果在末次免疫后4～6周,2组免疫小鼠的血清IgG及其亚类和IgE水平升高,脾T淋巴细胞增殖水平升高,CD4+和CD8+T细胞亚群百分比分别升高,脾细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别升高。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗在免疫早期(4～6周)可诱导免疫鼠脾T淋巴细胞增殖,产生Th1和Th2混合型免疫应答,CD4+和CD8+T细胞亚群在细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护性免疫机制中起重要作用。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠后脾T淋巴细胞亚群的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠后诱导的脾T淋巴细胞亚群的变化。方法热絮凝法提取转基因苜蓿疫苗叶蛋白,将其浓度配制成20μg/μL,132只BALB/c小鼠随机分为3组,用100μL（约含1μg融合抗原）灌胃接种和10μL（约含0.1μg融合抗原）滴鼻接种分别免疫小鼠,每3 d 1次,连续免疫2个月,同时设非转基因苜蓿叶蛋白滴鼻免疫对照组。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,流式细胞仪（FCM）检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果灌胃接种组小鼠脾CD4＋和CD8＋T细胞亚群分别在免疫后6-10周和4-12周升高,分别在免疫后6周和8周达高峰,百分比分别为0.294±0.002和0.168±0.027;滴鼻接种组小鼠脾CD4＋和CD8＋T细胞亚群分别在免疫后4-6周和4-10周升高,分别在免疫后6周和8周达高峰,百分比分别为0.318±0.051和0.197±0.008。结论CD4＋和CD8＋T细胞亚群在细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护性免疫机制中起重要作用。

细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿叶蛋白提取液诱导小鼠细胞因子的变化

目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)Eg95-EgA31融合基因苜蓿叶蛋白提取液免疫小鼠被Eg原头节攻击感染后体内棘球蚴囊重减少率及细胞因子的变化。方法热絮凝法提取转基因苜蓿叶蛋白,同时提取转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白和正常苜蓿叶蛋白作对照。32只雌性BALB/c小鼠随机均分4组,A和B组分别用转基因苜蓿叶蛋白提取液100μl灌胃和10μl滴鼻免疫小鼠,C组用转空质粒苜蓿叶蛋白提取液10μl滴鼻免疫小鼠,D组用正常苜蓿叶蛋白提取液100μl灌胃免疫小鼠。各组小鼠每3d免疫1次,连续免疫2个月。末次免疫后第8周,各组小鼠用Eg原头节腹腔注射攻击感染(50个/只),感染后第24周剖杀小鼠,分离并称重细粒棘球蚴囊,计算囊重减少率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)、伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激培养,收集脾细胞培养上清液,常规ELISA法检测脾细胞培养上清液中白介素-12(IL-12)、白介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果A、B、C和D组小鼠的棘球蚴囊重分别为(28.0±36.0)、(41.0±33.0)、(72.0±36.0)和(78.0±57.0)mg,A组低于D组(P<0.05),囊重减少率为64.1%。A组的IFN-γ、1L-12和TNF-α水平高于D组(P<0.01),分别为(925.0±88.6)、(22.5±2.7)和(82.5±11.7)pg/ml,IL-10水平低于D组(P<0.01),为(125.0±26.7)pg/ml;B组小鼠脾的IFN-γ和TNF-α水平高于D组(P<0.01),分别为(750.0±100.0)和(80.0±13.1)pg/ml,IL-12和IL-10水平与D组相比差异无统计学意义(P>0.05);C组小鼠脾细胞因子水平与D组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。当用EgAg、ConA或LPS刺激时,刺激组的细胞因子水平高于相应的未刺激组(P<0.05或P<0.01),ConA或LPS刺激组的细胞因子水平高于EgAg刺激组(P<0.05或P<0.01)。结论转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿叶蛋白提取液可诱导免疫鼠产生Th1型细胞免疫应答以对抗Eg原头节的攻击感染。

细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31在根癌农杆菌LBA4404中的表达效率研究

目的分析细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31在根癌农杆菌LBA4404株中的表达效率。方法用IPTG诱导根癌农杆菌0、1、3、5、7、9、11和13h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质。结果表达产物分子质量单位约为37.5ku,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达蛋白约占LBA4404菌体总蛋白的20%。结论细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31能在LBA4404中表达,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。

细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究

目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率。方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95重组质粒;电穿孔转化A(tLBA4404),抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。用IPTG分别诱导rAt0、1、3、5、7、9、11和13h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质。结果:471bpEg95基因克隆成功。经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95成功转入A(tLBA4404)。用Bio-Rad Quantity one分析系统分析,表达产物分子质量(Mr)约为16.5kD,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达效率为约占LBA4404菌体总蛋白的20%。结论:成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,且能在A(tLBA4404)中表达,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。

熊去氧胆酸联合S-腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积型药物性肝损伤的疗效分析

目的观察熊去氧胆酸(UDCA)联合S-腺苷蛋氨酸(SAMe)在治疗胆汁淤积型药物性肝损伤中的疗效。方法回顾性分析瑞金医院感染科2013年1月至2017年5月胆汁淤积型药物性肝损伤84例住院患者,在接受甘草酸制剂等的护肝治疗基础上46例患者采用UDCA15 mg/(kg·d)口服及SAMe(1.0g/d)静滴治疗4周,38例患者单用SAMe治疗,进行疗效对比,并随访24周。结果 4周后UDCA+SAMe组有效率97.83%,单用SAMe组84.21%,差异有统计学意义(P<0.05)。UDCA+SAMe组TBil(54.0±13.8)μmol/L、DBil(25.4±10.2)μmol/L、ALP(78.7±29.3)μmol/L、GGT(81.8±28.5)μmol/L,明显优于单用SAMe组TBil(P=0.00)、DBil(P=0.00)、ALP(P=0.00)、GGT(P=0.00),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗结束后24周内随访,单用SAMe组有2例因肝功能再次异常入院,其中1例抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗平滑肌抗体出现阳性,肝活检提示药物相关性自身免疫性肝炎,UDCA+SAMe组无一例出现此情况,两组差异无统计学意义。治疗中和治疗结束后均未见药物相关不良反应。结论 UDCA联合SAMe治疗胆汁淤积型药物性肝损伤的疗效优于单用SAMe,且安全性好,值得临床推广,UDCA可能对药物相关性自身免疫性肝炎具有一定预防作用,有待进一步研究证实。

结核性胸膜炎患者胸腔引流置管误入胃腔一例

胸腔置管引流术是结核性胸膜炎伴胸腔积液患者常用的治疗方法,患者容易接受,能减少反复胸腔穿刺给患者带来的痛苦及风险,还可以随时进行胸腔给药。一般胸腔置管引流术根据患者体位给予B超下定位,常见部位为腋后线第7~9肋间,因胸腔置管引流术误入胃腔的发生率极低,文献报道不多见^([1-2]),现报道1例胸腔置管引流误入胃腔病例。

细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗的培育及鉴定

目的培育并鉴定细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗。方法利用转pBI—Eg95质粒的根癌农杆菌LBA440d株介导的苜蓿子叶浸染法，将Eg95基因导入紫花苜蓿基因组，转Eg95基因苜蓿外植体在含有卡那霉素的选择培养基上经愈伤、出芽和生根阶段生长出小苗，最后移栽到装有营养土的花盆中，生长2～3个月，获得完整的转Eg95基因苜蓿疫苗。提取转Eg95基因苜蓿的DNA、RNA及叶蛋白，采用PCR、RT—PCR、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）及Westernblot法进行鉴定。结果PCR、RT—PCR法在471bp处均扩增出目的条带；SDS—PAGE及Westernblot法可见转E驴5基因苜蓿蛋白在相对分子质量约16．5×10^3处出现特异条带，与预期结果相符：Bio—Rad Quantityone系统分析表达效率约占提取总苜蓿叶蛋白的0．06％。结论成功培育出细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫（喀）转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫Balb／c小鼠后脾细胞因子的变化。方法88只Balb／c小鼠按体质量随机分为两组，用转基因苜蓿叶蛋白提取液（20g／L）100μl口服灌胃和10μl鼻腔黏膜接种分别免疫小鼠，每3天1次，连续2个月。在末次免疫后0（对照）、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20周各组剖杀4只小鼠，取脾，分离脾细胞，体外经瞻粗抗原（EgAg）或刀豆蛋白A（ConA）刺激培养48h，诱生白细胞介素（IL）-12、γ-干扰素（IFN-γ）和IL-10；经EgAg或脂多糖（LPS）刺激培养72h，诱生肿瘤坏死因子仅（TNF-α）。收集脾细胞培养上清液，常规ELISA法检测IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平。结果口服灌胃组的IL-12、IFN-γ、TNF—α．和IL-10水平分别在免疫后4～6、2～8、2～6、4～12周升高，分别在免疫后4、2、2、8周达最高水平，其值分别为（25．0±5．8）、（575．0±28．9）、（50．0±11．5）、（42．5±2．9）ng／L，与0周[（11．3±2．5）、（125．0±28．9）、（11．3±2．5）、（12．5±2．9）ng／L]比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）；鼻腔黏膜接种组的IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后4—6、2～10、4～10、6—16周升高，分别在免疫后6、4、6、6周达最高水平，其值分别为（25．0±5．8）、（725．0±28．9）、（27．5±2．9）、（60．0±11．5）ng／L，与0周[（11．3±2．5）、（125．0±28．9）、（11．3±2．5）、（12．5±2．9）ng／L]比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。EgAg、ConA、LPS刺激组的细胞因子水平高于相应的脾细胞悬液组（P〈0．05或〈0．01），ConA或LPS刺激组的细胞因子水平高于相应的EgAg刺激组（P〈0．05或〈0．01）。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗在免疫早期（2～10周）可诱导小鼠产生Th1和Th2混合型免疫应答。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠脾细胞亚群的变化

目的 探讨细粒棘球绦虫（Eg）转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的变化.方法 热絮凝法提取转基因苜蓿叶蛋白,用无菌双蒸水将叶蛋白提取液配成20 g/L,同时提取转空质粒（pBI121）苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白作对照.32只雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为4组,每组8只.口服灌胃组：灌胃接种100 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液 鼻腔黏膜接种组：滴鼻接种10 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液 空质粒对照组：滴鼻接种10μl转空质粒苜蓿叶蛋白提取液 正常蛋白对照组：灌胃接种100μl正常苜蓿叶蛋白提取液.小鼠每3天免疫1次,连续免疫2个月.末次免疫后第8周,各组小鼠用Eg原头节腹腔注射攻击感染（50个/只）,感染后第24周剖杀小鼠,分离脾细胞,用流式细胞仪检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群百分比.结果 口服灌胃组小鼠脾CD4＋T细胞亚群百分比（0.286±0.009）、CD8＋ T细胞亚群百分比（0.102±0.004）和CD4＋/CD8＋比值（2.814±0.014）均显著高于正常蛋白对照组（0.166±0.018、0.083±0.006、2.019±0.369,P〈0.01或〈0.05） 鼻腔黏膜接种组小鼠脾CD4＋T细胞亚群百分比（0.269±0.016）和CD4＋/CD8＋比值（2.955±0.986）与正常蛋白对照组比较明显升高（P均〈0.01） 口服灌胃组小鼠脾CD4＋T细胞亚群百分比高于鼻腔黏膜接种组（P〈0.05） 空质粒对照组小鼠脾CD4＋、CD8＋T细胞百分比和CD4＋/CD8＋比值（0.169±0.018、0.093±0.019、1.852±0.188）与正常蛋白对照组比较,差异无统计学意义（P均〉0.05）.结论 CD4＋T细胞亚群可能与细粒棘球绦虫转Eg95-Eg31融合基因苜蓿疫苗诱导的小鼠抗Eg原头节攻击感染的保护力有关.疫苗灌胃接种可能是一种较好的免疫途径.

转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠IgG及其亚类和IgE的动态观察

目的动态观察转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB／c小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法热絮凝法提取转Eg95-EgA31基因苜蓿疫苗叶蛋白，配成浓度为20μg／μl。88只BALB／c小鼠随机分为2组，分别用100μl（约含1μg融合抗原）口服灌胃和10μl（约含0．1μg融合抗原）滴鼻接种分别免疫小鼠，每3d1次，连续免疫2个月。末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠，眼球取血，ELISA法检测血清IgG及其亚类和IgE水平。结果口服灌胃组小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在末次免疫后2～14、2～14、4～20、6～12、6～12和4～16周升高，分别在末次免疫后4、4、6、8、8和10周达最高水平；滴鼻接种组小鼠的血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在末次免疫后2～14、2～18、4～10、6～14、8和6～12周升高，分别在末次免疫后4、4、6、12、8和6周达最高水平。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗在免疫早期（2～12周）可诱导小鼠产生Th1和Th2混合型免疫应答。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠后脾T淋巴细胞增殖的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠后脾T淋巴细胞的增殖情况。方法热絮凝法提取转基因苜蓿疫苗叶蛋白,配成浓度为20μg/μL。88只BALB/c小鼠随机分为两组,用100μl(约含1μg融合抗原)口服灌胃和10μl(约含0.1 μg融合抗原)鼻腔黏膜接种分别免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2月。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,体外经Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾T淋巴细胞增殖情况。结果口服灌胃组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4～10周升高,在末次免疫后6周达最高水平;鼻腔黏膜接种组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4～12周升高,在末次免疫后6周达最高水平;鼻腔黏膜接种组脾T淋巴细胞增殖水平高于口服灌胃组。EgAg或ConA刺激组脾T淋巴细胞增殖水平高于相应原液组,且ConA刺激组高于相应EgAg刺激组(P<0.01或P<0.05)。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗能诱导免疫鼠产生脾T淋巴细胞增殖反应,鼻腔黏膜接种途径优于口服灌胃途径。

棘球蚴病重组BCG疫苗的研究进展

卡介苗(BCG)因其应用的安全性及免疫佐剂作用,以其为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视。本文综述了近年来棘球蚴病重组BCG疫苗的研究进展。

重组寄生虫-BCG疫苗研究进展

卡介苗(BCG)由于其广泛应用的安全性及其免疫佐剂作用,以其为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视。本文简要概述了近年来硕大利什曼原虫、疟原虫、弓行虫、肝片吸虫等寄生虫重组BCG疫苗的构建及免疫机制的研究进展。

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护力观察

目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠后对Eg原头节攻击感染的保护性作用。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,配成浓度为20μg/μl。分别用100μl(约含1μg融合抗原)口服灌胃和10μl(约含0.1μg融合抗原)滴鼻接种免疫BALB/c小鼠,每3d免疫1次,连续免疫2月,同时设转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白对照组。末次免疫后8周,用Eg原头节进行攻击感染(腹腔注射50个Eg原头节/每只小鼠),感染后24周剖杀各组小鼠,检获包囊质量,计算囊重减少率;采眼球血,常规酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果疫苗口服灌胃接种组小鼠检获包囊质量明显降低,囊重减少率为64.1%,与正常蛋白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),血清中IgG、IgG2b和IgE水平显著高于正常苜蓿叶蛋白对照组,其值分别为0.175±0.013、0.096±0.028和0.096±0.028。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗口服接种能使免疫鼠获得保护力以抵抗Eg原头节攻击感染,IgG、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。

转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠脾T淋巴细胞增殖的研究

目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠用Eg原头节攻击后脾T淋巴细胞增殖的变化。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,配成浓度为20μg/μl。分别用100μl(约含1μg融合抗原)口服灌胃和10μl(约含0.1μg融合抗原)滴鼻接种免疫BALB/c小鼠,每3 d 1次,连续免疫2个月。同时设转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白对照组。末次免疫后8周,每只小鼠用50个Eg原头节腹腔注射感染。感染后24周杀鼠,检获包囊并称重,计算囊重减少率;分离脾细胞,体外经Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾T淋巴细胞增殖情况。结果与正常蛋白对照组相比,疫苗口服灌胃组小鼠检获包囊质量明显降低,囊重减少率为64.1%。两免疫组小鼠的脾T细胞增殖水平显著高于正常蛋白对照组(P<0.01);口服灌胃组小鼠的脾T细胞增殖水平高于滴鼻接种组(P<0.01)。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗接种可诱导小鼠脾脏T淋巴细胞增殖,口服接种是一种较好的免疫途径。

血吸虫重组BCG疫苗的研究进展

卡介苗（BCG）由于其安全性及免疫佐剂作用而被广泛应用，以其为载体的重组疫苗研究日益受到研究者的重视。血吸虫重组BCG疫苗是一种新型疫苗。该文简要概述了近年来曼氏血吸虫、埃及血吸虫、日本血吸虫重组BCG疫苗的构建及免疫机制的研究进展。

转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿的培育及鉴定

目的培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据。方法将构建好的pBI-Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,利用重组根瘤农杆菌(rAt)侵染苜蓿(alfalfa)叶片,卡那霉素抗性筛选伤愈组织体胚,培育转基因苜蓿,用SDS-PAGE、Western-blot、PCR和RT-PCR鉴定转基因苜蓿。结果SDS-PAGE和Western-blot证实Eg95-EgA31融合基因在苜蓿中得到表达,表达产物分子质量约为37500Mr,表达效率约占苜蓿叶总蛋白的0.05%,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别。PCR和RT-PCR均扩增出1016 bp Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功培育了转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因苜蓿疫苗奠定了基础。

肺结核合并乙型肝炎病毒感染患者抗病毒与护肝治疗的疗效分析

目的分析在肺结核合并乙型肝炎病毒感染患者治疗中给予抗病毒及护肝治疗的临床疗效,为临床诊治提供参考。方法选取2011年2月-2013年2月医院收治的肺结核合并乙型肝炎病毒感染患者148例,随机分为治疗组73例、对照组75例;对照组患者给予抗病毒及抗结核治疗,治疗组患者在对照组的基础上给予甘草酸二铵治疗,对比两组患者的临床疗效、炎症反应及肝功能指标;采用SPSS17.0对数据进行统计分析。结果治疗组总有效率为97.26%,对照组总有效率为84.00%,治疗组总有效率显著升高,差异有统计学意义(χ2=5.478,P<0.05);与对照组比较,治疗组患者在15d及30d时的ALT、AST及T-Bil水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者HBsAg转阴率、HBeAg转阴率和HBV-DNA转阴率对比差异无统计学意义。结论对于肺结核合并乙型肝炎病毒感染患者,在抗病毒及抗结核的基础上加以甘草酸二铵进行肝脏保护,能够显著缓解抗结核药物对肝脏的损害,临床效果显著,值得推广应用。