噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用研究进展

畜禽生产中抗生素的长期、大量不规范使用,导致细菌耐药性问题日益严重,给畜禽细菌性疾病的预防和治疗带来极大困难,甚至已经威胁到公共卫生安全。噬菌体裂解酶是噬菌体编码的一种肽聚糖水解酶,能够高效、特异地杀灭细菌且具有抗生物被膜活性,已经成为一种新型抗菌药物,逐渐被纳入细菌尤其是耐药菌感染的治疗策略。畜禽生产中,噬菌体裂解酶已经成功应用于金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性菌引起的畜禽细菌性疾病的防控与治疗中,其在大肠杆菌、沙门菌等革兰阴性菌上的应用尚处于体外研究阶段。笔者对噬菌体裂解酶的结构特点、作用机制及其在畜禽生产中的应用进行综述,探究噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用现状及前景,以期为噬菌体裂解酶更进一步地应用于防控和治疗细菌性疾病提供参考。

血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。

禽流感病毒基因组及其编码蛋白的结构与功能

禽流感病毒为单股负链RNA,分为8个独立的节段,分别编码聚合酶蛋白(PB1、PB2和PA)、血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1和M2)和非结构蛋白(NS1和NS2)等10种蛋白质,为了深入认识该病毒,对其基因组及各种编码蛋白的结构和功能进行了综述。

微生态制剂对肉鸡免疫器官发育的影响

将微生态制剂添加到饲料中饲喂肉鸡,检测肉鸡的免疫器官指数和免疫器官中T细胞百分数,探讨微生态制剂对肉鸡免疫器官发育的影响。结果表明,17日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比空白对照组高6.76%,10.69%,11.09%;49日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比对照组高11.07%,19.01%,14.52%,其中胸腺指数和脾脏指数差异显著,法氏囊指数差异极显著。另外,10日龄、17日龄时试验组鸡的胸腺T细胞百分数分别比对照组高13.01%和6.41%。试验组10日龄、17日龄时鸡的脾脏T细胞百分数分别比对照组高19.40%和9.71%,差异显著。

瘤胃微生物对纤维素的降解及其应用

瘤胃微生物主要包括细菌、真菌和原生动物。其中,瘤胃细菌和瘤胃真菌能分泌纤维素酶,对纤维素有较强的降解能力,主要介绍了瘤胃微生物对纤维素的降解作用及其广阔的应用前景。

副猪嗜血杆菌病研究进展

近年来,由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)所引起的猪群多发性浆膜炎和关节炎在中国各地屡有发生,对仔猪和青年猪造成严重危害,给养猪业带来了巨大的经济损失,目前,该病已成为全球范围内影响养猪业的典型细菌性疾病。副猪嗜血杆菌血清型复杂,分离培养困难。为了全面认识该病,对其病原学、病理变化、流行病学、致病因子、诊断方法、免疫防治等进行了综述。

微生态制剂对蛋鸡生产和免疫性能的影响

研究微生态制剂对蛋鸡的作用效果,为开发利用微生态制剂提供科学依据。将微生态制剂加入海兰白蛋鸡饲料中,通过记录鸡的采食量、产蛋量、蛋重、计算产蛋率、检测鸡血清中ND血凝抑制效价、统计肠道发病率、死亡率等探讨微生态制剂对蛋鸡生产性能和免疫功能的影响。结果表明:试验组的料蛋比比对照组降低了9.52%,差异极显著(P<0.01);产蛋率比对照组提高了5.35%,差异显著(P<0.05);平均蛋重提高了2.95%;350日龄及380日龄时试验组血清中新城疫血凝抑制抗体效价均高于对照组,分别高出对照组25.81%和25.42%;试验组的肠道病发病数、肠道发病率、死亡数和死淘率与对照组相比大大降低,肠道发病率和死淘率分别比对照组降低了66.67%和68.18%,差异显著(P<0.05)。

益生素对鸡免疫性能的影响

将益生素添加到鸡的饲料中,通过检查测鸡的免疫器官批数、血清中ND血凝抑制效价和红细胞花环率,探讨该制剂对鸡免疫性能的影响。结果表明:17日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比空白对照组高6.76%、10.69%、19.01%、14.52%,49日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比对照给高11.07%、19.01%、14.52%,其中胸腺指数和脾脏指数差异显著(p<0.05),法氏囊指数差异极显著(p<0.01);在17、26、35、49日龄时,试验组血清中ND血凝抑制抗体效价分别高出对照组8.65%、26.98%、19.83%和46.91%,差异显著(P<0.05);在21日龄,试验组的E-C3bR率和E-ICR率分别高出对照组16.24%和19.93%,均差异显著(P<0.05)。

微生态制剂对肉鸡免疫器官发育影响的研究

将微生态制剂添加到饲料中饲喂肉鸡,检测肉鸡的免疫器官指数和免疫器官中T细胞百分数,探讨微生态制剂对肉鸡免疫器官发育的影响。结果表明,17日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比空白对照组高6.76%、10.69%、11.09%,差异显著(P<0.05);49日龄时,试验组的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数分别比对照组高11.07%、19.01%、14.52%,其中胸腺指数和脾脏指数差异显著(P<0.05),法氏囊指数差异极显著(P<0.01)。另外,10、17日龄时试验组鸡的胸腺T细胞百分数分别比对照组高13.01%和6.41%;试验组10、17日龄时鸡的脾脏T细胞百分数分别比对照组高19.40%和9.71%,差异显著(P<0.05)。

肉杂鸡肺炎克雷伯菌耐药菌株的分离鉴定

2015年6月中旬,山东省莘县、高唐等地多个养殖场3日龄肉杂鸡出现张口、伸颈、呼吸困难等症状,剖检呼吸道无明显病变,心脏、肝脏周围及皮下有大量淡黄色胶冻样渗出物,肝脏有大量点状坏死,为确定病原,对发病鸡的喉拭子进行了流感抗原性检测;对病鸡的肺脏进行了病毒分离培养;对其肝脏、心脏进行了细菌的分离培养、生化鉴定及药敏试验。结果表明,肉杂鸡发病由金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的混合感染所致,针对无禽流感病毒和新城疫病毒的感染,采取了敏感药物治疗、消毒、加强饲养管理等综合措施,7 d后,发病情况逐渐好转,鸡群15日龄时趋于稳定。

微生态制剂对肉鸡体液免疫和细胞免疫的影响

将微生态制剂添加到肉鸡的饲料中,通过检测肉鸡血清中ND血凝抑制抗体效价、红细胞花环率及免疫器官中T细胞百分数等指标,探讨该制剂对肉鸡体液免疫和细胞免疫的影响。结果表明:在17、26、35、49日龄时,试验组血清中ND血凝抑制抗体效价分别比对照组高8.65%、26.98%、19.83%和46.91%,差异显著(P<0.05);在21日龄,试验组的E-C3bR率和E-ICR率分别比对照组高16.24%和19.93%,均差异显著(P<0.05);10、17日龄时,试验组胸腺T细胞百分数分别比对照组高13.01%(P<0.05)和6.41%(P<0.05),脾脏T细胞百分数分别比对照组高19.40%和9.17%,差异显著(P<0.05)。

H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR鉴定方法的应用

为了对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)进行快速鉴定,试验根据H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA基因分别设计引物,初步建立H9N2亚型禽流感病毒的RT-PCR检测方法;同时为了检验该检测方法的可靠性,对送检的264份疑似禽流感病鸡的病料进行处理,接种SPF鸡胚,分别采用RTPCR和血清学试验两种方法检测收集的尿囊液。结果表明:两种方法均检出有14个样品为H9N2亚型禽流感病毒阳性,符合率达100%。说明建立的RT-PCR检测方法可用于鉴定H9N2亚型禽流感病毒。

山东省鸡群H9亚型AIV的分离及其感染情况调查

为了解山东省鸡群H9亚型禽流感病毒(AIV)病死鸡的感染情况,在活禽市场采集健康鸡的泄殖腔拭子526份及疑似禽流感病鸡的泄殖腔拭子和病死鸡肾脏452份进行荧光定量RT-PCR检测。结果表明:健康鸡材料AIV PCR检测阳性率为3.24%;分离H9N2亚型AIV 11株,分离率为2.09%。病鸡病料PCR检测阳性率为8.41%;分离H9N2亚型AIV 24株,分离率为5.31%。病鸡病料PCR阳性率在春季、夏季、秋季、冬季分别为7.75%、3.57%、7.34%和12.03%,分离率分别为4.65%、1.79%、4.59%和7.59%;健康鸡棉拭子的PCR阳性率在春季、夏季、秋季、冬季分别为3.70%、0.98%、2.80%和4.79%,分离率分别为2.22%、0、2.10%、3.42%。4个代表毒株均为低致病性禽流感病毒。

兽医微生物学基础验证性和综合设计性实验两段式实验教学模式的构建

2014—2018年,聊城大学动物医学专业将兽医微生物学实验教学分为2个阶段,第1阶段主要开设基础验证性实验,培养学生的基本操作技能;第2阶段开设综合设计性实验,培养学生的科研意识和团队协作精神。经过几年的探索与改进,逐步构建了较为成熟的两段式实验教学模式。采用该教学模式,有利于高素质人才培养,并可为畜牧兽医行业输送高素质应用型和科研型人才。

H9N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法的建立

为H9N2亚型AIV进行快速、准确鉴定与诊断,根据H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因各设计1对引物,建立了一种对2个表面基因同时进行扩增的双重RT-PCR检测方法。HA、NA基因预期扩增的目的片段长度分别为700、423 bp。通过对H9N2亚型禽流感病毒不同稀释度的尿囊液进行检测,证实病毒尿囊液的最低检出量为1×10^(4.25) EID_(50)/100μL。采用该方法对H1～H15和N1～N9等亚型流感病毒及新城疫病毒等进行检测,结果只有H9N2亚型AIV出现2个特异性目的条带,与其他常见禽病病原无交叉反应;用建立的双重RT-PCR和病毒分离2种方法同时对送检样品进行检测,结果2种方法的符合率达99.77%,说明该检测方法特异性强、敏感性较高,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。

微生态制剂对蛋鸡免疫功能的影响

将微生态制剂加入海兰白蛋鸡饲料中,通过记录鸡的采食量、产蛋量、蛋重,计算产蛋率,检测鸡血清中ND血凝抑制效价,统计肠道发病率、死亡率等探讨微生态制剂对蛋鸡免疫功能的影响。结果表明:试验组的料蛋比比对照组降低了9.52%,差异极显著(P<0.01);产蛋率比对照组提高了5.35%,差异显著(P<0.05);350及380日龄时试验组血清中新城疫血凝抑制抗体效价分别高出对照组25.81%和25.42%;试验组的肠道病发病率和死淘率分别比对照组降低了66.67%和68.18%,差异显著(P<0.05)。

兽医微生物学设计性实验教学探索

兽医微生物学实验教学中,增设了2个设计性试验,学生根据试验要求查阅资料、制定试验方案、独立进行试验操作、结果判断与分析,使学生牢固掌握了病原微生物的诊断程序,提高了学生分析问题、解决问题的能力,是兽医微生物学试验教学改革的有益尝试。

SPF种蛋重量对H9亚型禽流感病毒分离培养的影响

[目的]探索SPF种蛋重量对病毒分离培养的影响。[方法]以蛋形正常稍重(62～72 g)的SPF种蛋为试验组,适宜重量(50～60g)SPF种蛋为对照组,进行H9亚型禽流感病毒的分离培养试验。[结果]试验组和对照组SPF种蛋的受精率无明显差异,而且尿囊液的HA和HI效价无明显差异。[结论]在实验室可选用稍重的SPF种蛋进行病毒分离培养,既可充分利用SPF种蛋资源,又可节省试验经费。

H9亚型禽流感病毒的分子生物学鉴定

H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是危害我国养禽业的主要病毒之一,造成了严重的经济损失。根据H9亚型AIV的HA基因设计了1对引物,建立了H9亚型禽流感病毒的RT-PCR鉴定方法。H9亚型AIV的HA基因预期扩增的目的片断长度为425 bp。对H9N2亚型禽流感病毒不同稀释度的尿囊液进行检测,证实病毒尿囊液的最低检出量为1×10^(4.25)EID_(50)/100μL。建立的RT-PCR检测方法对H9、H3、H4、H5亚型AIV及新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒等进行检测,结果仅有H9N2亚型AIV出现特异性目的条带,其他均未出现目的条带,与其他常见禽病病原无交叉反应;用建立的RT-PCR和病毒分离2种方法同时对10株H9N2亚型AIV和8个病鸡组织的鸡胚尿囊液样品进行检测,结果 2种检测方法的符合率达100%。说明该鉴定方法特异性强,敏感性较高。