三种腰椎间盘突出症大鼠模型制备方法的比较与评价

背景:目前实验中有多种腰椎间盘突出症大鼠模型,但各自存在一定的优缺点,其中最常见的造模方法包括自体髓核移植和纤维环穿刺模型。目的:建立自体髓核移植模型(剪除棘突+乳突/剪除侧突+乳突)以及纤维环穿刺模型,比较及评估3种模型的特点。方法:将40只成年雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只,分别为假手术组、棘突组、侧突组及纤维环穿刺组,其中假手术组大鼠仅切开皮肤,暴露棘突后并缝合;棘突组大鼠剪除L5棘突和乳突并取2枚尾椎髓核放于椎间孔处;侧突组大鼠剪除L5侧突和乳突并取2枚尾椎髓核放于椎间孔处;纤维环穿刺组大鼠剪除乳突后,进行纤维环穿刺术,并行椎间盘注射白细胞介素1β。分别在造模前和造模后检测大鼠热缩足潜伏期,造模结束后2周进行腰椎MRI检测;苏木精-伊红染色和番红-固绿染色观察椎间盘病理改变;免疫荧光观察CD68阳性表达。结果与结论:①热痛阈检测结果显示:与假手术组相比,模型组大鼠在造模后痛觉敏感均降低,耐受时间均降低(P<0.05);②腰椎MRI影像显示:棘突组和纤维环穿刺组髓核组织突出明显,更符合常见腰椎间盘突出患者MRI影像;③苏木精-伊红染色观察:与假手术组比较,各模型组髓核组织存在不同程度退变,炎性细胞浸润和脊索细胞降解,出现空洞样改变,其中纤维环穿刺组病理改变最严重;④番红-固绿染色显示:与假手术组比较,3组模型的髓核组织边界模糊,存在广泛炎性反应,纤维环存在不同程度退变;⑤CD68+免疫荧光阳性结果显示:与假手术组相比,3组模型的CD68+表达更高、范围更广,其中纤维环穿刺组表达最高。结果说明3种方法均能有效建立腰椎间盘突出大鼠模型,其中剪除乳突后建立纤维环穿刺模型优于剪除棘突+乳突组自体髓核移植模型,前2种模型优于剪除侧突+乳突组自体髓核移植模型。

针刺对穴“迎香-合谷”对变应性鼻炎大鼠Th1、Th2细胞因子及转录因子T-bet/GATA-3的影响

目的:探讨“迎香-合谷”对穴对过敏性鼻炎大鼠Th1、Th2相关细胞因子及转录因子T-bet、GATA-3的影响。方法:大鼠随机分成空白组、模型组、对穴组3组。建立卵清蛋白(OVA)AR大鼠模型,观察大鼠一般情况并进行行为学评分,造模成功后第2天开始对对穴组行针刺干预,1次/d,20 min/次,共10 d。干预结束后观察大鼠一般行为、行为学评分及鼻黏膜组织形态学改变,鼻腔灌洗液涂片染色后镜检计数嗜酸性粒细胞(EOS),ELISA检测大鼠血清总IgE、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-5含量,Western blot法和免疫组化法(IHC)检测大鼠鼻黏膜组织特异性转录因子T-bet、GATA-3蛋白水平和阳性蛋白的表达情况。结果:造模后,除空白组外,模型组、对穴组大鼠行为学观察评分均大于5分,提示造模成功。针刺对穴“迎香-合谷”干预后,对穴组、西药组大鼠行为学评分较模型组明显下降(P<0.05)。镜检示模型组鼻黏膜结构明显破坏,纤毛排列不连续,参差不齐,局部充血肿胀,上皮细胞大量脱落坏死,杯状细胞增生,有明显炎症细胞浸润。对穴组鼻黏膜病理程度较模型组明显减轻。与模型组比较,经对穴针刺干预后大鼠血清中的IFN-γ、IL-2、IL-12明显升高(P<0.05),而IgE、IL-4、IL-5、IL-6明显降低(P<0.05),鼻黏膜GATA-3蛋白及阳性表达明显降低,T-bet明显升高(P<0.05)。结论:针刺对穴“迎香-合谷”能有效改善AR大鼠鼻部敏感症状、达到控制鼻部炎症的目的,其机制可能是针刺对穴干预后上调了T-bet的表达,降低GATA-3水平,并促进Th1型细胞因子的生成,抑制Th2细胞的合成与分泌,从而使Th1、Th2恢复免疫平衡状态。

胶体金免疫层析法快速检测果蔬中的三唑酮及其代谢物残留

目的建立胶体金免疫层析法快速检测蔬菜水果中三唑酮及其代谢物农药残留的分析方法。方法采用胶体金标记三唑酮单克隆抗体,利用胶体金的可视化及抗体与抗原的特异性结合,实现对果蔬中三唑酮农药残留的定性和半定量检测。结果本方法在层析液中三唑酮及其代谢物的总残留量检出限为2 ng/mL,对黄瓜和香蕉中三唑酮及其代谢物的总残留量检出限分别为0.05和0.85mg/kg,均低于国家标准食品中三唑酮农药最大残留限量(0.1~1 mg/kg),该试纸条对其他农药无交叉反应,重复性良好。结论该方法具有高灵敏度、高特异性,可快速准确地检测大批量样品中的三唑酮及其代谢物农药残留,能够满足应急超标事件的现场检测需求。

荧光猝灭法快速检测水样中的汞离子

快速、灵敏定量环境水样中的汞离子(Hg2+)对水质监测和人体健康有十分重要的意义。本研究利用富含胸腺嘧啶碱基(T)的DNA,发展了一种灵敏的荧光分析法,实现了Hg2+的快速检测。首先,在DNA两端各修饰一个发光基团(6’-FAM)和猝灭基团(BHQ1)。在Hg2+存在时,相对的两个T碱基与Hg2+通过金属配位形成T-Hg2+-T结构,从而使ss DNA形成ds DNA,DNA的结构变化会使发光基团和猝灭基团距离靠近,从而猝灭发光基团的荧光,实现对水样中Hg2+的定量分析。对Hg2+的检测浓度在10~100n M范围内呈线性相关,所用方法检出限为2.0n M(MDL=3σ/S)。

基于g-CNQDs的荧光共振能量转移法检测银离子

以尿素和柠檬酸钠为原料,采用低温固态法制备了催化相碳氮量子点(g-CNQDs),构建了基于g-CNQDs的荧光共振能量转移体系(FRET)。Ag^(+)通过与胞嘧啶(C)形成C-Ag^(+)-C复合物诱导3’-端修饰荧光素(FAM)的DNA序列(F-DNA)折叠成发夹型结构,导致g-CNQDs与FAM间荧光共振能量转移效率发生改变,实现Ag^(+)的高灵敏检测。优化了反应时间、缓冲液pH、g-CNQDs用量、F-DNA用量对FRET体系的影响。最佳条件下,Ag^(+)浓度在81.97 pmol/L~163.9 nmol/L范围内,g-CNQDs@F-DNA体系FRET效率与Ag^(+)浓度的对数呈良好线性关系,相关系数为0.9996,方法检出限为67.61 pmol/L。方法用于测定环境水样中Ag^(+)浓度,回收率为92.2%~103.5%。