红系祖细胞在造血缺陷斑马鱼体内的移植

目的评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^(-/-)突变体斑马鱼体内的移植效果。方法收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,利用显微注射技术将gata1^+细胞移植到42hpf的cloche^(-/-)突变体斑马鱼心脏中,采用体视荧光显微镜追踪观察移植后的红系祖细胞在cloche^(-/-)突变体斑马鱼中的表达情况。结果成功分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,并在移植后2 h可观察到携带绿色荧光的gata1^+细胞逐渐增殖扩散且16 h持续有绿色荧光表达。结论红系祖细胞有重建造血的潜力,为进一步研究红系祖细胞移植后的功能鉴定提供实验依据。

汉防己甲素联合化疗药物在斑马鱼体内逆转多药耐药的研究

目的探讨汉防己甲素对斑马鱼胚胎早期发育及多药耐药基因abcb4表达的影响及其机制。方法通过药物毒性实验分析汉防己甲素药液处理后斑马鱼胚胎的死亡率、孵化率、心率和畸形率情况。取斑马鱼胚胎设置分组:空白对照组、阿霉素药液处理组、长春碱药液处理组、汉防己甲素药液处理组、汉防己甲素和阿霉素混合药液处理组及汉防己甲素和长春碱混合药液处理组,每组胚胎用药液处理至第5天后取50尾用于实验。通过实时荧光定量PCR检测abcb4基因的表达情况,罗丹明123实验检测胚胎的外排功能,分析耐药程度。结果低剂量汉防己甲素对斑马鱼胚胎毒性较低,高剂量汉防己甲素对胚胎孵化有抑制作用,并有致畸致死作用;实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比abcb4基因的mRNA在阿霉素和长春碱药液单独使用时表达增高,而在汉防己甲素联合阿霉素、长春碱使用时表达降低;罗丹明123实验结果显示,阿霉素和长春碱单独使用时斑马鱼体内产生耐药,而汉防己甲素联合阿霉素、长春碱使用时耐药程度降低。结论汉防己甲素对斑马鱼胚胎毒性较低,且汉防己甲素能逆转物阿霉素和长春碱的耐药作用,对提高治疗效果有重要意义。

斑马鱼白血病模型的研究进展

斑马鱼是一种脊椎动物有机体,因具有保守的造血过程和独特的实验优势,尤其适合用于研究人类白血病。目前,研究斑马鱼的最新技术包括转基因技术、基因组编辑技术和移植技术,通过这些技术现已构建了许多白血病模型。斑马鱼的通体透明与先进的谱系追踪和成像技术相结合,揭示了白血病发生、发展的许多细节。凭借这些优势,斑马鱼成为白血病研究中具有独特优势的模式生物之一,此外,基于斑马鱼的高通量药物筛选的进步有望加速新型白血病疗法的开发。

心血管发育相关基因mpx在斑马鱼早期胚胎发育中的表达

目的:探讨斑马鱼体内髓样特异性过氧化物酶(mpx)在胚胎发育过程中的表达模式。方法:按Trizol法提取斑马鱼总RNA后逆转录成cDNA,再以cDNA为模板RT-PCR扩增mpx基因片段;用基因重组技术构建pCS2^+-mpx重组质粒后将质粒酶切线性化,T3聚合酶制备mpx反义RNA探针,用全胚胎原位杂交检测mpx基因的表达。结果:成功构建了pCS2^+-mpx重组质粒,原位杂交结果显示在24 hpf,mpx基因在斑马鱼胚胎中间细胞团表达;从24 hpf开始,mpx基因在斑马鱼胚胎卵黄囊表面、心脏和轴向脉管系统中高表达,一直持续到72 hpf;尤其是在72 hpf,mpx基因在整个胚胎头部、卵黄囊表面、尾部中弥散表达。结论:mpx基因在斑马鱼心血管系统发育的时间和部位中都有表达,mpx基因可能参与调控斑马鱼心血管系统发育。

Wnt/β-catenin信号通路参与化疗药物诱导的转基因斑马鱼abcb4基因的表达和耐药

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春碱联合吉非替尼处理组。每组100枚胚胎分别进行药物处理至第5天,每组取第5天斑马鱼幼鱼50枚进行实验。采用罗丹明123实验检测野生型斑马鱼耐药程度,酶标仪检测转基因的斑马鱼荧光强度,活细胞工作站检测荧光分布位置。Western blot法检测转基因的斑马鱼β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的蛋白水平。结果罗丹明123实验证实经阿霉素和长春碱药物暴露后的斑马鱼体内产生耐药, EGFP荧光强度检测结果表明经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼荧光强度高,经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼体内β-catenin的累积升高伴随着EGFP和ABCB4蛋白的增加。结论斑马鱼体内Wnt/β-catenin信号通路参与斑马鱼abcb4基因的激活与耐药。

Toll样受体4基因敲除延迟皮肤创面愈合及促进早期瘢痕形成

目的探索Toll样受体4(TLR4)在小鼠皮肤缺损创面愈合及早期瘢痕形成的作用。方法将36只购自南京大学动物模式研究所的小鼠分为野生型组(WT)和TLR4基因敲除组(TLR4KO)切除部分背部全层皮肤建立模型,每组18只,观察小鼠创面愈合及瘢痕形成变化。实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测造模后7、14、21、28dTLR4,11d和33d白细胞介素(IL)-6、IL-10mRNA水平,苏木精-伊红(HE)和天狼星红染色评估33d创面及变化。组间比较采用t检验。结果在创面愈合过程中,TLR4KO创面闭合时间高于WT[(25.91±2.81)d比(19.55±2.42)d,t=5.690,P<0.01],TLR4K0 IL-10 mRNA指标低于WT(0.005比1.000,t=37.070,P<0.01),TLR4KOIL-6mRNA指标高于WT(2.650比1.000,t=19.290,P<0.01)。在瘢痕形成早期,TLR4K0表皮厚度高于WT[(45.83±1.61)μm比(22.79±2.07)μm,t=7.645,P<0.01],TLR4KOI型/Ⅲ型胶原比值高于WT(24.54±1.27比7.93±1.76,t=10.820,P<0.01),TLR4K0 IL-6mRNA指标高于WT(3.190比1.000,t=9.865,P<0.01),TLR4K0与WTIL-10mRNA指标差异无统计学意义(1.108比1.000,t=0.960,P>0.05)。结论TLR4功能完全丧失导致皮肤创面延迟愈合,进而导致TLR4基因敲除小鼠早期瘢痕明显,可能与炎性反应失调有关。

在信息技术课中把握好学生的好奇心培养自主探究的能力

好奇心每个人都有,教师应把握好学生的好奇心,把他们的思绪引入课堂、引入书本,并且能够正确地引导、长期地保持这种好奇心理。信息技术是一门全新的课程,由于上课的形式以及内容的与众不同,使得学生对这门课的好奇心十分强烈。如何充分利用学生的这种好奇心理,培养学生自主探究的能力是这门课教好的关键。