五倍子提取物抗鼻咽癌5-8F细胞的作用及机制

目的:探讨五倍子提取物鞣花酸抗鼻咽癌细胞的生物学活性及其分子机制。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,用2,4,6μg/mL鞣花酸处理48 h后,采用M实验分析细胞的增殖;Hoechst33258染色分析细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;Western印迹检测蛋白表达。结果:鞣花酸对5-8F细胞增殖有抑制作用,2,4,6μg/mL抑制率分别为(29.35±4.95)%,(53.32±4.44)%和(61.75±6.93)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);2,4,6μg/mL鞣花酸处理组S期细胞百分率分别为(25.47±0.74)%,(28.08±1.41)%和(35.49±0.66)%,与对照组(21.26±0.70)%比较,差异有统计学意义(P<0.01);随药物浓度增加,核固缩浓染的凋亡细胞明显增多,COX-2和stathmin蛋白表达下调。结论:五倍子提取物鞣花酸有抗鼻咽癌细胞的作用,其机制可能与COX-2和stathmin下调相关。

Survivin表达抑制影响鼻咽癌细胞的增殖与凋亡

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨Survivin在鼻咽癌中的生物学功能。方法采用脂质体将Survivin特异性SiRNA(small interfering RNA)转入鼻咽癌细胞株5-8F,培养48h后,收集细胞。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别检测Survivin mRNA和蛋白在细胞中表达。流式细胞仪检测细胞凋亡与周期,显微镜下计数检测细胞增殖抑制。结果SiRNA抑制5-8F细胞Survivin表达后,细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.01);S/G1比值显著高于对照组(P<0.01);细胞增殖抑制率也显著高于对照组(P<0.01);脂质体对照组与阴性SiRNA对照组比较,细胞凋亡、周期和增殖差异无显著性(P>0.05)。结论Survivin表达抑制,诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制其增殖。

罗汉果皂甙类成分代谢转化规律分析

目的:分析组织培养苗罗汉果皂甙类成分在果实成熟过程中的代谢转化规律,为罗汉果甜甙代谢关键酶的研究提供基础。方法:采用微波炉水煮法提取不同生长期罗汉果总甙,高相液相色谱(HPLC)分析各生长期罗汉果二糖甙(甙Ⅱ)、三糖甙(甙Ⅲ)和五糖甙(甙Ⅴ)的含量。结果:果龄10d的罗汉果中,能检测到甙Ⅱ(3 666.4μg/100mg)及甙Ⅲ(48.4μg/100mg),甙Ⅴ检测不到;果龄50d时,能检测到甙Ⅴ(95.1μg/100mg)和高含量的甙Ⅲ(1 213.8μg/100mg);随着果龄增长和果实逐渐成熟,低糖苦甙Ⅱ、甙Ⅲ含量逐渐减少,高糖甜甙Ⅴ含量逐渐升高。果龄70d时,苦甙Ⅱ、甙Ⅲ基本检测不到,而甜甙Ⅴ(1 331.4μg/100mg)含量达到高水平。结论:罗汉果高糖甜甙可能是从低糖苦甙代谢转化而来。

鼻咽癌中Survivin的表达与淋巴转移、临床分期的关系

目的研究凋亡抑制基因Survivin在鼻咽癌中的表达以及Survivin的表达与鼻咽癌淋巴转移、临床分期之间的相关性。方法应用免疫组化技术分析68例鼻咽癌组织和45例鼻咽慢性炎症组织中Survivin的表达。结果68例鼻咽癌组织中,Survivin表达阳性率为69·1%(47/68),45例鼻咽慢性炎症组织中,Survivin表达阳性率为15·6%(7/45),两者比较差异有统计学意义(P<0·01)。有淋巴转移的鼻咽癌组织,Survivin表达为71·7%(33/46),无淋巴转移的鼻咽癌组织Survivin表达为63·6%(14/22),两者比较差异无统计学意义(P>0·05)。早期(临床Ⅰ、Ⅱ期)鼻咽癌组织,Survivin表达为70·6%(12/17),晚期(临床Ⅲ、Ⅳ期)鼻咽癌组织,Survivin表达为68·6%(35/51),两者比较差异无统计学意义(P>0·05)。结论Survivin的表达改变发生在鼻咽癌的早期,它的表达水平升高可能在鼻咽组织癌变早期起重要作用;Survivin的表达与鼻咽癌的转移、临床分期可能无相关。

间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽癌组织中的表达

背景与目的:间隙连接在细胞间的营养物质、离子和细胞调节因子的交换中起重要作用。间隙连接异常,细胞间的物质交换障碍,往往导致细胞分裂失控。在有些癌组织和癌细胞中存在间隙连接的功能异常,恢复这些癌细胞的间隙连接功能,它们表现出正常细胞的生物学表型。因此,探讨细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌中的表达,将有可能为临床诊断提供方法,为鼻咽癌的发病机理提供新思路。方法:采用免疫组化技术检测间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达。结果:①Cx43、Cx45在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中有表达差异,在鼻咽癌中,Cx43、Cx45阳性率为44.8%、46.6%,与鼻咽慢性炎症柱状上皮细胞阳性率的86.5%和100%比较,显著性下降(P<0.01)。②鼻咽慢性炎症组织比鼻咽癌组织含鳞状细胞的百分率低(P<0.01),分别为29.7%和56.9%。③Cx43、Cx45在鼻咽癌旁柱状上皮细胞中的表达低于癌旁鳞状上皮细胞(P<0.001),高于癌细胞(P<0.01)。结论:Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达异常,可能与鼻咽组织鳞化和癌变有关。

Survivin、Bcl-2的表达与鼻咽癌相关

背景与目的研究凋亡抑制基因Survivin、Bcl-2在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌的相关性。材料与方法应用免疫组化分析68例鼻咽癌组织、45例鼻咽慢性炎症组织中Survivin和Bcl-2的表达;RT-PCR分析24例鼻咽癌组织、18例鼻咽慢性炎症组织中Survivin和Bcl-2的表达。结果免疫组化分析表明,鼻咽癌组织中,Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别为69.1%(47/68)和79.4%(54/68),鼻咽慢性炎症组织中Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别15.6%(7/45)和13.3%(6/45),对两组标本中的Survivin、Bcl-2分别进行比较,差别均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR分析表明,鼻咽癌组织中,Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别为79.2%(19/24)和87.5%(21/24),鼻咽慢性炎症组织中Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别22.2%(4/18)和27.8%(5/18),对两组标本中Survivin、Bcl-2分别进行比较,差别均有统计学意义(P<0.01)。结论Survivin、Bcl-2的表达与鼻咽癌相关,两者的表达可能在鼻咽组织癌变过程中起重要作用。

人鼻咽上皮组织中间隙连接蛋白基因表达谱的研究

目的 :研究细胞间隙连接蛋白基因 (Cx)在正常人鼻咽上皮组织中的表达谱 ,在此基础上探索细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,为研究鼻咽组织癌变的原因和机理提供新思路。方法 :根据基因库中人间隙连接蛋白基因的mRNA序列 ,合成间隙连接蛋白基因家族中 1 3个基因的PCR引物 ,用RT -PCR的方法检测这些基因在鼻咽组织中的表达。结果 :1 8例正常人鼻咽组织中 ,检出Cx30、31 .1、37、40、43分别有 1 6、1 6、1 7、1 5、1 7例表达 ,Cx2 6、31、32、45分别有 1 0、1 1、9、9例表达 ,Cx36、46、46 .6、50分别有 1、0、1、3例表达。结论 :正常人鼻咽组织中 ,主要表达的间隙连接蛋白为Cx30、31 .1、37、40。

不同生长期罗汉果蛋白组图谱比较研究

目的:分析、比较30d和60d两个不同时期罗汉果蛋白质组图谱,寻找与罗汉果发育、成熟及罗汉果甜甙生成密切相关基因,为罗汉果的开发和品种改良提供基础。方法:采用双向电泳(2-DE)技术构建30d和60d罗汉果蛋白质组图谱,应用Im-ageMaster 2D图像分析软件对所得蛋白质组图谱进行分析。结果:30d和60d两个不同时期罗汉果蛋白质组图谱有明显差别,与30d罗汉果蛋白组图谱比较,随果实发育、成熟,60d罗汉果有29个新的蛋白产生,30个蛋白消失,16个蛋白表达3倍升高和15个蛋白表达50%下调。结论:罗汉果生长、发育和成熟的不同阶段受特定基因的表达调控。

Cx26基因重表达抑制人鼻咽癌细胞系HNE1的恶性增殖

间隙连接蛋白 (Cx)基因在胚胎发育、细胞生长、分化以及细胞内环境的稳定过程中起重要调节作用 .肿瘤发生与Cx基因的表达及功能异常密切相关 ,肿瘤细胞常存在Cx基因表达下调或缺失 .将人Cx2 6基因编码区cDNA序列 ,亚克隆于真核表达载体pcDNA3 1(+) ,采用脂质体转染 ,将重组表达载体pcDNA3 1(+) Cx2 6转入鼻咽癌细胞系HNE1,使Cx2 6基因在HNE1中重表达 ,探讨Cx2 6基因对鼻咽癌细胞系HNE1的生物学功能的影响 .研究结果表明 :Cx2 6基因的重表达 ,抑制HNE1细胞生长 ,细胞周期阻滞于G0 G1期 ,HNE1细胞的克隆形成能力下降 ,裸鼠致瘤能力减弱 .

苦参联合胎肝低分子抑瘤物抗白血病及其机制

目的 :探讨苦参 (SF)、胎肝低分子抑瘤物 (LMW NTS)联合用药对正常人骨髓粒 巨噬系造血祖细胞(CFU GM )和急性髓性白血病细胞的影响及其作用机制。方法 :采用CFU GM集落培养、细胞液体培养、Wrigh giemsa染色、3H TdR掺入实验、DNA片段凝胶电泳和RT PCR等方法 ,观察SF和LMW NTS联用对白血病的作用。结果 :SF和LMW NTS联用 ,明显提高抑制白血病细胞增殖的能力 ,促进白血病细胞的凋亡 ,诱导白血病细胞中原癌基因c Myc的下调 ,抑制正常造血祖细胞CFU GM的作用明显低于抑制白血病细胞的作用。结论 :联合用药抗白血病的效果 。

苦参抗急性髓性白血病

目的 :研究苦参对急性髓性白血病 HL- 6 0细胞系作用 ,探讨苦参抗白血病的作用及机理。方法 :采用细胞培养计数 ,3H- Td R掺入实验 ,NBT/ MTT比值实验研究苦参抗白血病的作用及机理。结果 :苦参浓度在 2 .0～ 8.0 mg/ ml范围内 ,苦参抑制 HL- 6 0细胞的 DNA合成 ,抑制白血病细胞增殖 ,并诱导 HL- 6 0细胞分化。结论

高校大型科研精密仪器向高层次人才开放与管理

随着学科建设与科学研究的发展,高校的办学规模不断扩大,办学条件日趋完善,仪器设备逐年增多,大型仪器设备成为高校人才培养、科研水平提高、技术开发及学科建设的重要条件。现以显微镜为例探讨医学院校科研型大型精密仪器向高层次人才培养开放及其管理。

Stathmin特异性siRNA表达质粒抑制stathmin的表达

目的:构建微管解聚蛋白stathmin基因的特异性siRNA质粒表达载体,以便研究stathmin在鼻咽癌中的生物学作用。方法:合成stathmin特异性DNA片段,退火形成的双链DNA片段克隆于质粒表达载体pGenesil-1.3;载体经扩增后,进行酶切和测序鉴定;采用QIAGEN公司脂质体(effectenetransfectionreagent)将鉴定后的重组质粒转入鼻咽癌CNE2细胞;RT-PCR与Westernblot检测stathmin基因表达。结果:酶切和测序分析表明,插入siRNA质粒表达载体中的DNA片段,其碱基序列和插入方向正确。表达分析证实特异性siRNA质粒表达载体能有效抑制鼻咽癌CNE2细胞中stathmin的表达。结论:构建的siRNA质粒表达载体对stathmin的表达有很好的抑制作用。

药用资源与药理三级实验室建设与探索

中医药三级实验室是开展中医药研究与教学的基地,是实现中医药现代化与产业化的基本保证。本文结合该校药用资源与药理三级实验室的建设与实践,探讨中医药科研三级实验室硬件与软件条件建设,提高中医药科研与教学水平。总结出实验室规划先行,合理装备与布局实验室,建立共享技术平台,实行实验室开放等措施能提高仪器设备在科研与教学工作中的效率,提高实验室投入产出效益。

人CD44新剪接变异体克隆及分析

目的:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)分析CD44在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞株中表达,来寻找新的人CD44剪接变异体。方法:在CD44基因起始和终止密码子两端及变异剪接外显子v10中和剪接位点处设计特异性引物,以鼻咽癌组织、细胞株5-8F和HNE1 cDNA为模板进行RT-PCR扩增,产物测序。然后,应用生物信息学对克隆序列进行分析。结果:新克隆的CD44剪接变异体有1634bp,包含一个完整的阅读框,起始密码子在序列的12位,终止密码子在序列的1301位,可变剪接区只有变异型剪接外显子10,预测编码429氨基酸。GenBank登陆号:EF581837。结论:一个新的、预测编码429个氨基酸的CD44剪接变异体存在于研究的人鼻咽癌组织和细胞株中,它的功能有待于进一步研究。

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx2 6作为目的基因 ,通过T -A载体介导 ,构建真核表达重组载体pcDNA3 1(+) /Cx2 6 ,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx2 6间隙连接蛋白。

ICAM-1、Bcl-2在鼻咽癌中的表达及意义

【目的】探讨细胞间粘附分子 1(ICAM 1)和细胞凋亡抑制基因Bcl 2在鼻咽癌组织中的表达及意义。【方法】应用免疫组化S P法 ,对 37例鼻咽低分化鳞癌和 30例鼻咽慢性炎性黏膜活检组织进行ICAM 1、Bcl 2表达蛋白产物检测。【结果】①ICAM 1在鼻咽癌组织阳性表达率 6 7.6 % ,明显高于鼻咽慢性炎性黏膜组织 6 .7% (P <0 .0 1)。②Bcl 2在鼻咽癌组织阳性表达率 83.8% ,明显高于鼻咽慢性炎性黏膜组织 10 .0 %(P<0 .0 1)。③ICAM 1、Bcl 2在鼻咽癌中的表达呈正相关。【结论】ICAM 1、Bcl 2在鼻咽癌组织中表达可能在鼻咽癌细胞的凋亡、侵袭和转移过程中起重要作用 ,两者同时高表达可能协同促进鼻咽癌的侵袭和转移。

细胞间隙连接蛋白在多种类型癌组织中的原位表达研究

背景与目的:恶性肿瘤细胞常有间隙连接蛋白(Connexin,Cx)的异常定位和表达,本研究目的是检测Cx基因家族中的Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因在多种类型癌组织微阵列中的原位表达,期望建立Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因在多种类型癌组织中的蛋白表达谱,探讨其在肿瘤发生、发展中的作用。方法:利用自制的组织微阵列制作仪制作含多种类型癌标本的组织微阵列,免疫组化法检测Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因在292例癌组织及89例癌旁组织中的表达。结果:(1)成功地制作出100点、200点和360点3种不同规格的组织微阵列蜡块和切片;(2)获得Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因在20种癌组织中的原位表达谱,Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因在肠癌、肝癌、胃癌、肺癌及甲状腺癌组织中的表达明显低于其相应的癌旁组织。结论:Cx26、Cx32、Cx43和Cx45基因的失表达对多种癌的发生有重要作用。多肿瘤的组织微阵列为肿瘤基因表达谱如Cx基因的研究提供一种高通量工具。

用双向电泳和质谱技术检测NGX6转染后人鼻咽癌细胞表达差异的蛋白质(英文)

NGX6是克隆的鼻咽癌相关基因 ,它的功能与作用机制目前尚不十分清楚 .通过脂质体转染把NGX6导入鼻咽癌细胞株中 ,采用双向凝胶电泳分离细胞内所有蛋白质 ,通过软件分析 ,找到与未处理细胞表达差异的蛋白质 ,通过质谱分析和生物信息学资料处理 .鉴定出七种表达上调的蛋白质 ,其中包括Fas蛋白 ,锌指蛋白(ZNF) ,主要组织相容性抗原Ⅱ (MHCⅡ )等 .Fas蛋白参与细胞凋亡的信号传导途径 ,它的上调可以促进细胞凋亡 ;ZNF蛋白参与基因的转录调控 ,它的上调也可影响细胞异常增殖的信号传导通路 ;MHCⅡ可以促进机体对肿瘤细胞的免疫应答 .这些结果说明NGX6可能通过多种途径抑制鼻咽癌细胞的生长 ,为研究NGX6的作用机制提供了很好的实验资料 ,对鼻咽癌的基因治疗奠定了一定的研究基础 。

PDGF-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细胞株HRPE细胞,MTT法检测对HRPE细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测HRPE细胞的周期和凋亡率。结果:PDGFR-αASODN转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:沉默PDGFR-α基因表达可显著抑制HRPE细胞的增殖,并能诱导其凋亡。