bFGF在局灶性脑缺血后内源性神经干细胞增殖过程中对Id2的影响

目的检测DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding 2,Id2)在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及bFGF的干预作用。探讨影响神经干细胞增殖分化的分子调控机制。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作大鼠脑缺血再灌注模型。用免疫组织化学法检测海马神经干细胞BrdU、Id2的表达及bFGF的干预作用。结果随着脑缺血再灌注第3天缺血海马神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7天达高峰,Id2反应产物脑缺血再灌注第3天较正常组增多,随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第7天表达最强,以后表达逐渐减少。注射bFGF后BrdU、Id2的表达明显增加。结论 bFGF促进神经干细胞的增殖及缺血脑组织Id2的表达,提示bFGF促进神经干细胞增殖作用可能由Id2信号介导。

碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增生的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人血管内皮细胞 (EC)增生的影响及其机制 ,明确 b FGF对烟曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影响。 方法 培养人脐静脉内皮细胞 (HU VEC) ,采用 MTT法测定 EC生长活性 ,免疫组织化学方法检测 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表达。 结果 b FGF有显著促进 EC增生的作用 ,可使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达增强 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达减少 ;b FGF逆转二者的抑制效应。 结论 b FGF能促进 EC增生 ,其机制可能是通过激活 NF- κB,使细胞由静止期进入增殖期 ,促进 DNA合成 ,细胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b

Wnt-1在大鼠气管干细胞早期增殖与分化过程中的表达

目的检测Wnt-1在大鼠气管上皮损伤修复中的表达及其变化,探讨影响气管干细胞早期增殖分化的分子调控机制。方法氟脲嘧啶(5-FU)作用大鼠离体气管,去除5-FU后分别于0、6、12、24及48 h用Westernblotting及免疫组织化学方法检测气管上皮中Wnt-1的表达。结果5-FU损伤后12 h,气管上皮脱落,仅残留少量G0期细胞表达Wnt-1;去除5-FU后6 h,上皮细胞数目增多,呈扁平状间断分布,Wnt-1表达最强;12 h后,上皮细胞呈立方状,并连接成片,Wnt-1表达逐渐减少;恢复48 h,气管上皮内出现假复层结构,仅见极少量Wnt-1阳性细胞。正常气管上皮Wnt-1表达极少。结论Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,说明其在气管干细胞早期增殖分化中起重要调控作用。

bFGF对局灶性脑缺血大鼠脑组织ERK表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后对胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元ERK的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2 h再灌注损伤24 h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和ERK的表达。结果 sham组鼠海马及大脑皮质偶见凋亡细胞,大脑皮质及海马神经元内少见ERK免疫反应阳性细胞;I/R组鼠海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后大脑皮质及海马神经元内ERK阳性表达明显高于假手组;bFGF组鼠海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内ERK表达较I/R组明显增加。结论 bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的ERK表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用。

TNP-470和碱性成纤维细胞生长因子在血管内皮细胞增生中的相互作用

目的:检测TNP-470对内皮细胞增生的影响及其与碱性成纤维细胞生长因子的相互作用,并探讨其可能机制。方法:实验于2005-05/2006-10在沈阳医学院完成。采用本室改进的Jaffe法进行人脐静脉内皮细胞原代培养,细胞生长达亚融合状态后,换成无血清培养液使其停止生长。实验分组:依据施加的实验因素不同,将培养的人脐静脉内皮细胞分为4组:对照组(DMEM无血清)、TNP-470组(10-4g/L)、碱性成纤维细胞生长因子组(500μg/L)、碱性成纤维细胞生长因子+TNP-470组。实验评估:采用四甲基偶氮唑盐比色分析测定各组内皮细胞吸光度,流式细胞计数仪检测内皮细胞周期各时相相对细胞数,免疫组织化学SABC法检测内皮细胞中核因子Kappa B p65和ki-67蛋白的表达阳性率。结果:①人脐静脉内皮细胞的生长活性:TNP-470显著抑制内皮细胞增生;碱性成纤维细胞生长因子显著刺激内皮细胞增生,与对照组相比,差异显著(0.119±0.002,0.168±0.004,0.138±0.003,P<0.05)。②内皮细胞周期各时相相对细胞数:TNP-470阻滞内皮细胞进入增殖期,使G0/G1期内皮细胞比例上升,S期+G2/M期比例下降;而碱性成纤维细胞生长因子具有很强的促内皮细胞分裂增殖活性,使G0/G1期内皮细胞比例减少,S期+G2/M期比例增加,与对照组相比,差异显著(P<0.05)。③各组人脐静脉内皮细胞中NF-κB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达阳性率:对照组人脐静脉内皮细胞中NF-κB p65蛋白呈棕褐色染色、ki-67极少表达;TNP-470可显著降低碱性成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞核内NF-κB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达,与碱性成纤维细胞生长因子组比较,差异显著[NF-κB p65蛋白:(16.200±1.344)%,(68.400±1.204)%;Ki-67蛋白:(1.500±0.813),(65.700±1.113)%,P<0.05]。结论:TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制内皮细胞分裂与增殖;TNP-470抑制成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞增生与其影响内皮细胞中NF-κB的表达有关。

行为学训练对缺血性脑损伤大鼠脑组织X盒结合蛋白1表达的影响

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后对细胞核转录因子X盒结合蛋白1（XBP1）表达的影响,探讨穿梭箱行为学训练对脑缺血再灌注大鼠脑组织XBP1的调节作用及机制.方法：应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,训练组于造模1d后开始给予穿梭箱训练,采用免疫组织化学检测不同时间点大脑皮质内XBP1的表达.结果：正常对照组大鼠大脑皮质内XBP1少量表达,缺血再灌注后高于正常对照组,训练组大脑皮质内XBP1阳性表达较缺血再灌注组明显增多.结论：穿梭箱训练上调脑缺血诱导的XBP1表达,对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元的具有保护作用.

行为学干预对血管性痴呆大鼠脑组织保护及CXCR4、β-catenin表达的影响

目的探讨气味穿梭训练干预对血管性痴呆大鼠脑组织保护及CXC趋化因子受体(CXCR)4、β-连环蛋白(catenin)表达的影响。方法将实验大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、训练组。应用两血管阻断加硝普钠降压法制作血管性痴呆VD大鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色法镜下观察大鼠海马组织学改变、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织脑源性神经生长因子(BNDF)和神经生长因子(NGF)表达和Western印迹法检测海马组织CXCR4和β-catenin蛋白的表达及气味穿梭箱训练对大鼠神经功能的干预作用。结果与模型组相比较,气味穿梭箱训练可以明显改善缺血后脑组织神经元的凋亡情况,大鼠脑组织内BNDF和NGF的含量增加。在脑缺血再灌注7 d时海马组织神经元CXCR4的表达最多高。β-catenin表达相较假手术组明显增高,随模型组再灌注后时间的进一步延长β-catenin表达进一步增加,第14天表达保持高水平,直至第21天。经气味穿梭训练后大鼠海马组织中CXCR4和β-catenin蛋白的表达较缺血再灌注组均明显增加,结果具有统计学意义。结论气味穿梭训练促进血管性痴呆大鼠脑组织保护作用及缺血脑组织CXCR4和β-catenin蛋白的表达,提示气味穿梭训练对缺血性脑损伤的修复作用可能是通过CXCR4和β-catenin信号通路介导。

行为学训练对局灶性脑缺血大鼠脑组织STAT1蛋白表达的影响

研究大鼠脑缺血再灌注后对信号转导子和转录激动子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)表达的影响,探讨穿梭箱行为学训练和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元STAT1的调节作用及机制。方法将96只Wistar大鼠随机分为训练1 d、3 d、7 d、14 d组;bFGF 1 d、3 d、7 d、14 d组;缺血再灌注1 d、3 d、7 d、14 d组及正常对照1 d、3 d、7 d、14 d组,每组6只。应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,对不同组大鼠进行神经功能评分,训练组于造模1 d后开始给予穿梭箱训练,采用免疫组化检测不同时间点大脑皮质内STAT1的表达。结果正常对照组大鼠大脑皮质内STAT1少量的表达,造模后高于正常对照组,训练组及bFGF组大脑皮质内STAT1阳性表达较缺血再灌注组明显减少。结论穿梭箱训练及bFGF下调脑缺血诱导的STAT1表达,对脑缺血再灌注大脑皮质神经元的具有保护作用。

TBL教学法在留学生病理实验教学中的应用探索

文章旨在针对传统病理学实验教学法存在的问题,探讨以团队为基础的学习(team based learning,TBL)的教学法在留学生病理实验课中的应用效果。随机选取在本校学习的临床医学专业留学生60名为教学对象,采用TBL教学法进行病理实验课教学。课程结束后,通过问卷调查评价学习效果。与传统的以教师授课为中心的教学法(lecture based learning,LBL)相比,留学生更加认同TBL教学法对自身综合学习能力的积极影响。留学生病理学实验课采用TBL教学法,克服了LBL教学法单一乏味的弊端,对学生具有更大的吸引力。通过理论联系实际,有利于加深学生对所学知识的理解,培养综合分析问题和解决问题的能力,更好地发挥学生的主动性和创造性,且有助于提高学生的团队交流策略和能力,更加符合新时期医学教育理念,是一次积极有价值的探索和创新。

指导医学大学生开展科研工作的实践与体会

我院近年来出台了鼓励学生开展科研的一系列政策,组织教师指导在校大学生申请大学生科研课题,利用课余时间进行科学实验,积极参与到激发大学生的科研热情和培养大学生的科研能力中去,实现对高校教学与科研的全面促进作用。

翻转课堂在医学病理学教学中的探索

翻转课堂作为一种新型的教学形式迅速风靡全球,它的内容较抽象,学生难以理解。传统的教学方法是以教师为主体,大部分内容都是由教师讲解的、学生是被动的接受知识,加重了学生课后消化吸收的负担。在剖析翻转课堂教学模式在医学病理学教学中的优势和需解决关键问题的基础上,对翻转课堂在医学病理学教学中的应用进行了初步探索,以期给病理学的教学带来了新的生机与启迪。

CBL教学法在病理学教学中的应用

CBL教学法是目前医学教育教学中最为实用、高效的方法之一,在病理学教学中运用该教学法,能够引导学生变被动学习为主动学习,提高学生的学习兴趣,增强学生获取知识与提出、分析、解决问题的能力。同时,也能促进教师业务水平的提升,有利于提升病理学教学质量。

留学生病理学教学实践与探索

本文通过留学生病理学的实践,对目前留学生病理学教学中存在的教材、教学准备以及教学方法等问题进行了探讨,以期进一步提高留学生教学的质量和效果.

行为学训练对缺血性脑损伤大鼠脑组织TNF-α和TNF-αmRNA表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和TNF-αmRNA表达的影响,探讨穿梭箱行为学训练对脑缺血再灌注大鼠脑组织TNF-α和TNF-αmRNA的调节作用及机制。方法将54只Wistar大鼠随机分为训练组;缺血再灌注组及正常对照组,每组18只。应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,训练组于造模ld后开始给予穿梭箱训练,采用免疫组化和RT-PCR法检测大脑皮质内TNF-α和TNF-αmRNA的表达。结果正常对照组大鼠大脑皮质内TNF-α和TNF-αmRNA少量的表达,缺血再灌注后高于正常对照组,训练组大脑皮质内TNF-α和TNF-αmRNA阳性表达较缺血再灌注组明显减少。结论穿梭箱训练下调脑缺血诱导的TNF-α和TNF-αmRNA表达,对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元的具有保护作用。

Wnt信号通路在大鼠气管干细胞增殖分化过程中的时空表达

背景:实验前期项目已协同有关人员创立了体外观察气管干细胞的模型,并解决了气管干细胞的定位、分离及性状分析。但在气管干细胞的增殖分化过程中,究竟有哪些基因参与及其各自作用、气管干细胞可产生功能细胞的分化程序至今仍不清楚。目的:利用氟尿嘧啶诱发离体气管上皮损伤,检测气管干细胞增殖分化损伤重建过程中Wnt信号途径成员的时空表达变化。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-06/2007-06在沈阳医学院中心实验室完成。材料:清洁级2周龄Wistar大鼠18只,用于制备离体气管环。氟尿嘧啶由天津人民制药厂生产。方法:将镜下观察纤毛摆动情况良好的气管环分为两组:损伤组将气管环置于含12.5mg/L氟尿嘧啶的HamsF-12液中,作用12h后去除氟尿嘧啶,换成新鲜的HamsF-12液继续培养,分别于3,6,12,24,48h取部分等量组织块。对照组用等体积HamsF-12液代替氟尿嘧啶,其余培养条件及取材时间同损伤组。主要观察指标:RT-PCR法检测气管上皮中Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc基因表达的变化。结果:氟尿嘧啶作用12h后,光镜下可见少数间隔分布、近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上,前期实验已证明其为气管干细胞。RT-PCR结果显示,对照组气管上皮无Wnt-1和T细胞因子mRNA的表达,β-连环蛋白与c-myc mRNA轻度表达。损伤组经氟尿嘧啶作用后,可检测到Wnt-1 mRNA的表达,β-连环蛋白mRNA一时性轻度下降;Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc mRNA分别于去除氟尿嘧啶后3,6,12h达到高峰;24h后三者mRNA表达水平均下调;至48hWnt-1 mRNA无表达,后三者mRNA少量表达。结论:在整个气管上皮重建过程中,Wnt1、β-连环蛋白、T细胞因子和c-myc mRNA的表达变化基本遵循相似的规律,提示Wnt信号通路作为一个整体参与气管干细胞增殖分化过程的调控。

大鼠气管干细胞增殖分化过程中Wnt／β-Catenin信号分子的表达

背景:干细胞和细胞外基质的互相作用需要Wnt信号途径的参与。在气管损伤后的修复过程中,不同的分子信号级联控制干细胞的迁移、增生与分化,Wnt信号途径是否参与其中?目的:检测并验证Wnt/β-Catenin信号途径在气管干细胞增殖分化中的作用。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2004-05/2006-07在沈阳医学院完成。材料:2周龄Wistar大鼠,雌雄不拘,作为离体气管来源。方法:实验组以含氟尿嘧啶的HamsF12培养液作用离体大鼠气管,作用12h后换成单纯Hams F12液,对照组只用Hams F12液培养。主要观察指标:去除氟尿嘧啶后于0,6,12,24,48h采用免疫组织化学SP染色及蛋白印迹法检测气管上皮中Wnt-1和β-Catenin的表达。结果:氟尿嘧啶作用12h后,大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,暴露出基底膜,仅剩余少数较分散的间隔分布的近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上。氟尿嘧啶去除6h后,气管基底膜上可见少量扁平样细胞。24h后基底膜上细胞数目增加,并逐渐分化呈立方状,连接成片。48h后气管上皮中出现假复层柱状上皮,并可见纤毛细胞。免疫组织化学及蛋白定量结果显示:正常及损伤后0h气管上皮极少量表达Wnt-1及β-Catenin,损伤后6hWnt-1及β-Catenin表达最强,其后随时间延长,表达逐渐减少。结论:Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,胞浆中游离状态的β-Catenin表达可能产生了促进气管干细胞的增殖并抑制其分化的作用。

IGF-1和LY294002在大鼠脑缺血再灌注损伤中的相互作用机制

目的 探究胰岛素样生长因子(IGF)-1和LY294002在大鼠脑缺血再灌注损伤中对磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和β-连环蛋白(catenin)的影响。方法 采用两血管阻断加硝普钠降压法制作大鼠血管性痴呆模型,将48只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、脑缺血再灌注+抑制剂LY294002后处理组(LY组)、脑缺血再灌注+IGF-1后处理组(IGF-1组)。应用HE染色检测大脑皮质和海马组织形态变化,穿梭箱测试各组大鼠的认知功能。应用免疫组织化学染色法分别检测各组大鼠皮质和海马PI3K和β-catenin表达情况。结果 相较于S组,I/R组脑组织损伤严重,组织学变化明显,PI3K和β-catenin表达明显增高(P<0.05);LY组PI3K和β-catenin的表达较I/R组表达明显减少(P<0.05)。IGF-1组组织学变化减轻,PI3K和β-catenin的表达量明显较I/R组和LY组增加(P<0.05)。结论 在脑缺血再灌注损伤中,IGF-1促进缺血皮质和海马神经元的存活,可以激活缺血性脑损伤中的PI3K/β-catenin信号通路,而LY294002作为PI3K/Akt信号通路抑制剂可以有效抑制IGF-1的这种作用。

行为学训练对大鼠内源性神经干细胞增殖分化及Wnt5a蛋白表达的影响

目的探讨行为学训练对Wnt5a蛋白表达和血管性痴呆(VD)大鼠神经再生的影响。方法实验随机把雄性Wistar大鼠分为:假手术组、模型组、训练组。采用VD大鼠动物模型,大鼠海马组织Nestin和Wnt5a蛋白运用苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学方法检测表达及应用行为学训练的对其干预。结果缺血大鼠海马神经元Nestin阳性细胞在脑缺血再灌注第7天明显增多,达高峰。脑缺血再灌注第7天Wnt5a反应产物较正常组增多,缺血再灌注时间第14天Wnt5a表达逐渐减少,持续低水平表达到第21天。Nestin和Wnt5a蛋白的表达经过行为学训练明显增加。结论行为学训练促进缺血脑组织Wnt5a蛋白的表达及神经干细胞的增殖分化,提示行为学训练可能经Wnt5a信号通路介导促进神经干细胞增殖分化作用。

病理解剖学教学中应用多媒体教学的几点体会

多媒体教学已经成为国内外医学院校提高教学质量的一种教学方式,也是教学改革的重要手段。通过多年来多媒体辅助病理解剖教学,获得了一些教学体会,为新世纪病理解剖学教学的改革提供一些经验与借鉴。

多媒体手段在解剖学教学中的利弊及其对策

人体解剖学是医学课程中的重要组成部分，随着医学教育改革的不断深入，解剖学面临许多新的课题，如教学模式的转变、素质教育的实施、教学方法和手段的革新等等。如何使解剖学教学适合新形势的需要，是摆在每一位解剖教学工作者面前的一项重要任务。多媒体技术与传统的教学手段相比最大优势在于其能使教学内容形象、直观、生动。