病原微生物实验室风险应对及关注问题的探讨

生物安全作为国家安全的重要组成部分,直接关系到广大人民群众的安全和社会的稳定,确保实验室生物安全已成为社会关注焦点,高度重视实验室生物安全的理念日益深入人心。《中华人民共和国生物安全法》的颁布实施,为生物安全领域相关活动的开展提供了法律依据。虽然在实验室生物安全领域陆续出台了各项法律、法规、部门规章、规范性文件、标准等生物安全监管依据,用于指导实验室生物安全工作,但由于相关法规规章、规范性文件的宏观性、普适性特点,不会对生物安全实验室的各项活动都进行具体规定,对实践中遇到的很多具体问题也未直接给出答案,往往导致不同实验室甚至同一实验室的不同实验人员在实验活动中采取不同甚至矛盾的处理方法,实验室认可及实验活动监督评审中的不同专家针对一个问题也经常出现不同的意见。

2022至2023年吉林省甲型H3N2流感病毒的分子特征分析

目的通过对2022至2023年甲型H3N2流感病毒HA和NA基因特征分析,为吉林省H3N2流感病毒防控提供科学依据。方法随机选取2022至2023年吉林省23株H3N2流感病毒,对HA和NA基因进行序列同源性、基因进化特征、基因位点氨基酸变异分析。结果HA、NA基因核苷酸序列种系进化树显示:23株甲型H3N2流感毒株全部属于3C.2a分支,其中4株为3C.2a1b.2a.1a分支,与2021至2022年推荐的疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020在一个分支上;19株为3C.2a1b.2a.2a分支,与2022至2023年推荐的疫苗株A/Darwin/6/2021在一个分支上。与WHO推荐的2022至2023年北半球疫苗株A/Darwin/6/2021、A/Darwin/9/2021相比,4株甲型H3N2流感病毒HA蛋白氨基酸序列均发生了9个氨基酸位点变异,分别为I48T、S156H、N159Y、I160T、Q164L、K171N、D186S、N190D、S198P;HA蛋白抗原决定簇的氨基酸5处发生替换,分别为S156H、N159Y、I160T、D186S、N190D。19株甲型H3N2流感病毒HA基因蛋白氨基酸序列均发生了7个氨基酸位点变异,分别为G/D53N、N96S、N122D、I140K、I192F、I223V、N378S,除A/吉林船营/1615/2023(H3)外,其他18株均发生了E50K氨基酸位点变异;HA蛋白抗原决定簇的氨基酸4处发生替换,A区(N122D)B区(I192F)C区(E50K、G/D53N)。结论与WHO推荐的2022至2023年北半球疫苗株A/Darwin/6/2021、A/Darwin/9/2021相比,19株甲型H3N2流感病毒在HA蛋白抗原决定簇的氨基酸4处发生替换,分别是N122D、I192F、E50K、G/D53N,HA发生了抗原漂移。23株H3N2流感病毒NA基因存在12个氨基酸位点变异,但在NA酶活性催化位点和辅助位点均未发生变异,但有3株H3N2流感病毒存在S331G变异,与耐药变异S331R发生在同一位点上,应引起重视。

长春市儿童急性下呼吸道感染的病原学分析

目的了解长春市儿童下呼吸感染病原学特征及其分布规律,为本地区儿童下呼吸道感染的临床治疗提供的参考依据。方法采用Realtime PCR方法对2018年12月至2019年11月份采集的73份儿童支气管肺泡灌洗液标本进行28种病原及亚型检测。结果儿童下呼吸道感染中非典型病原体以支原体为主,病毒病原以呼吸道腺病毒、EB病毒、副流感病毒以主,细菌病原感染以流感嗜血杆菌为主。不同的病原体表现不同的流行期。结论通过对长春市儿童下呼吸道感染进行多病原检测,掌握病原流行特点,不同季节的呼吸道病原谱不一致。

风电塔筒C75高强混凝土的制备及应用研究

该文结合当地原材料特性,探究了原材料及配合比参数对C75高强混凝土工作性能和力学性能的影响,并对优选配合比进行耐久性验证和工程应用。结果表明:通过材料优选和配合比优化设计,利用水洗机制砂、石灰岩碎石、I级粉煤灰和硅灰复掺取代25%水泥,配制出了具有优异工作性能、力学性能和耐久性能的C75高强混凝土,拆模后混凝土塔筒整体外观质量良好。

端粒酶活性检测方法的改进及dNTP浓度对端粒酶活性的影响

利用重新设计的引物和反应步骤 ,对检测端粒酶活性的 TRAP反应进行了改进。与原有方法相比 ,新方法在PCR扩增过程中不改变端粒酶产物的长度和比例 ,能更准确地反映端粒酶反应产物的性质。利用这个方法 ,考察了d NTP浓度对端粒酶的影响 ,发现不同的脱氧核苷酸对端粒酶活性的影响有差异。

顶空气相色谱法测定磷酸替米考星中乙酸丁酯溶剂残留量

为建立测定磷酸替米考星中乙酸丁酯溶剂残留量的方法,采用顶空毛细管气相色谱法,以N,N-二甲基乙酰胺为溶剂,平衡时间为25 min,采用DB624型色谱柱(30.00 m×0.53 mm×3.00μm),以N2为载气,进样口温度为180℃,程序升温,进样分流比为5∶1,氢火焰离子化检测器(FID),检测器温度250℃。结果表明,乙酸丁酯浓度在25.36~304.37μg/mL线性关系良好(r=0.999 8),检测限(S/N为3∶1)和定量限(S/N为10∶1)分别为5.21μg/mL和52.07μg/mL,精密度、重复性以及耐用性的RSD均小于5%,乙酸丁酯3个浓度水平(80%、100%、120%)的回收率(n=3)在105.7%~109.9%,平均回收率(n=9)为108.4%。该方法简单、操作方便、专属性强、重现性好、灵敏度高,能够准确地测定磷酸替米考星原料中残留的乙酸丁酯。

吉林省普马拉病毒的RT-PCR检测与序列分析

目的建立检测普马拉病毒的RT—PCR方法，确认吉林省存在普马拉病毒，并对病毒的基因片段进行分析。方法采用RT—PCR方法，对吉林省抚松地区棕背（[鼠平]）鼠肺标本进行检测。对S片段核蛋白基因编码序列进行序列比较分析，绘制系统发生树。结果研究表明在吉林省抚松地区存在普马拉病毒，采集于2005年和2006年的标本阳性率分别为7．34％和14．29％，呈逐年上升趋势。序列分析表明与其他普马拉病毒核苷酸序列同源性只有81．1％～83．3％。系统发生分析揭示，该病毒与在日本、韩国分离的普马拉病毒亲缘关系相对接近，并且在进化过程中处于更古老的节点。结论在吉林省抚松地区可能存在普马拉病毒的一个新亚型。

全程护理干预措施对高龄初产妇不良情绪以及分娩方式的影响观察

目的评价全程护理干预措施在对高龄初产妇负性情绪以及分娩方式的影响。方法选择2014年1月—2015年6月在我院进行分娩的高龄初产妇168例作为研究对象,其中82例定期在我院进行产前检查并进行全程护理干预作为研究组,86例仅在我院分娩作为对照组。比较2组的分娩方式,并采用焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评价产前产后心理状况。结果研究组自然分娩率明显高于对照组(84.15%VS54.65%),剖宫产率明显低于对照组(15.85 VS 45.35%),差异有统计学意义(P<0.05);研究组产后SAS以及SDS评分均显著低于产前和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论全程护理干预措施应用于高龄初产妇,可以明显改善产妇的不良情绪,提高自然分娩率,降低剖宫产率。

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子，ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理，得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７，其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力，如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ，羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，与８５４－β２相比，分别提高５．９倍，７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０，２８～３０℃，９６小时，最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３，１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。

米索前列醇用于产后出血的临床观察

目的 探讨口服米索前列醇防治产后出血的可行性和安全性。方法 161例正常足月妊娠阴道分娩者 分为两组,研究组86例,在胎盘娩出后口服国产米索前列醇600μg;对照组75例,在胎盘娩出后宫体注射缩宫索 20 IU,观察产后2 h内的出血量及产后出血发生率。结果 产后2h内的出血量及产后出血发生率,研究组及对照 组分别为287.98 ml及2.33％和346.28 ml及8％。差异有显著意义(P<0.05)。结论 口服米索前列醇防治产后 出血是一种安全、有效的方法且效果优于缩宫素。

志贺毒素B(ShT-B)在E.coli中的融合表达及特异性抗体制备

用KpnⅠ、Hind Ⅲ酶切克隆载体pGEM-ShTB3，然后亚克隆入带有二氢叶酸还原酶(DHFR)的融合表达栽体pQE40，构建重组质粒pQE40-ShTB,转化到E。coli M15中，经IPTG诱导，实现了ShTB-DHFR融合蛋白的高表达，表达量约占菌体总蛋白的21．9％，为包涵体形式，在变性条件下，包涵体蛋白经螯合镍离子的次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和柱一步纯化，得到了纯度为90．5％的重组ShT-B．以纯化的shTB-DHFR融合蛋白免疫昆明鼠，并结合腹腔注射S180细胞，成功制备了抗ShTB腹水多克隆抗体，效价达1：1×10^6间接ELISA和Westem印迹结果表明，抗ShT-B多抗与重组蛋白和天然ShT均有特异性结合,本试验结果为毒素检测方法的研究奠定了基础。

志贺毒素A/B(ShT-A/B)亚单位基因的克隆与序列分析

应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺茵(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,分别扩增出约895bp和225bp的成熟ShT-A,B基因片段,直接克隆至pGEM-T载体中,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-ShTA_2和pGEM-ShTB_3。测序结果表明,插入的片段是ShT-A,ShT-B,且与GenBank中ShT-A,B核酸序列完全一致,从而为重组ShT-A,B的表达研究奠定了基础。

健康教育促进新生儿听力普遍筛查

新生儿听力普遍筛查是一项系统化社会优生工程,它包括:筛查、确认干预、跟踪随访、质量评估5个环节。保证"初筛"的百分率是各项指标中的重点。唤起全社会的广泛关注。

分子生物学技术在动物营养学中的应用与发展前景

分子生物学理论与技术的发展和应用已渗透到生命科学的各各领域,动物营养学的发展需要在分子水平上分析及解释营养素对动物机体的生理、病理变化调控,如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等。本文综述了分子生物学在动物营养学中的应用:利用分子生物学技术改造或生产动物性营养物质;从基因水平上研究如何提高动物生产性能及肉用性能:如肉质与瘦肉率等;在分子水平上研究营养与基因表达、调控的关系,以从根本上阐明营养对机体的作用机制;利用基因工程技术开发饲料资源。

2019-2020年吉林省流感病原学监测分析

目的通过2019-2020年流感监测结果对吉林省流感的流行趋势、病原学变化特点进行分析及总结,为本省流感防控提供科学依据。方法采集13家哨点医院流感样病例(ILI)的咽拭子标本,用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)方法进行病毒核酸检测。结果国家级哨点医院门急诊总就诊病例为2054883人,其中流感样病例60728人,占2.83%。吉林市ILI占比最高,为5.77%,各市州ILI比例差异有统计学意义(χ^2=10391.405,P<0.001)。ILI峰值出现在2020年第6-8周,ILI占比为15.78%,12.91%,12.66%。流感样病例年龄段主要集中在15岁以下儿童,占59.47%,其中0-4岁组占37.11%,5-14岁组占22.36%。不同地区ILI年龄构成比差异有统计学差异(χ^2=12554.373,P<0.001)。全省各市州共采集流感样病例患者咽拭子标本8932份,检测阳性数为1206份,分别为H1N1pdm亚型188份,季节性H3N2亚型916份,B型流感Victoria系102份,总阳性率为13.50%。结论流感病毒多发于冬春季,ILI主要集中在15岁以下儿童,H1N1pdm、季节性H3N2、B型Victoria系三种亚型交替流行。

端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达

为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。

2016-2020年吉林省流感病原学监测分析

目的了解2016-2020年吉林省流感病毒的流行趋势、病原学变化特点,为本省流感防控提供科学依据。方法对吉林省13家流感监测哨点医院报告的流感样病例(ILI)进行统计学分析,对采集的流感样病例标本进行实验室检测和病原学监测分析。结果 2016-2020年度ILI就诊比例呈逐年上升的趋势,4个监测年度报告的ILI比例差异有统计学意义(χ^(2)=7 681.309,P<0.05)。2016-2020年度流感样病例年龄段主要集中在15岁以下儿童,不同监测年度ILI年龄构成比差异有统计学差异(χ^(2)=636.663,P<0.05)。4个监测年度共采集流感样病例患者咽拭子标本35 504份,检测阳性标本5042份,阳性率为14.20%。除2018-2019年以B型流感病毒为流行优势株外,其它三个监测年度都以A型流感病毒为流行优势株,H3N2亚型和H1N1pdm亚型交替流行。结论 2016-2020年吉林省ILI就诊比例的流行高峰发生在冬春季,15岁以下年龄组为主要的易感人群,应加强相应的防控措施并积极推广流感疫苗的接种。

吉林省珲春市3株肾综合征出血热汉城型病毒的分离与鉴定

目的对2006年吉林省珲春市采集的鼠肺标本进行病毒分离与鉴定。方法采集鼠肺组织活体标本132份,用免疫荧光法筛检出阳性标本20份,用Vero E6细胞培养分离病毒,对病毒分离株进行血清学(ELISA和IFA方法)、分子生物学(RT-PCR)鉴定。结果本实验共筛检出阳性标本20份,分离到3株病毒,分离率为15%,分别命名为H156、H158、H162。结论在珲春市采集的褐家鼠标本中分离到3株病毒,经血清学和分子生物学鉴定为汉坦病毒汉城型,这是在珲春市首次分离到汉城型病毒。

吉林省2018-2020年甲型H3N2亚型流感病毒耐药基因分析

目的掌握2018-2020年吉林省内H3N2亚型流感流行株对金刚烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供参考依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株34株,对M2和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果2018-2020年吉林省分离到流感毒株981株,其中甲型流感病毒毒株934株,乙型流感毒株47株。在分离到的甲型流感病毒毒株中,57.49%为H1N1pdm亚型毒株,39.61%为H3N2亚型毒株。对34株H3N2亚型流感病毒测序结果显示M2基因S31N耐药位点上发生了突变;在NA耐药相关基因位点E119V、Q136K、D151A、I222V、H274Y、R292K、N294S均未发生突变。结论吉林省2018-2020年以甲型流感流行为主。34株甲型H3N2亚型流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药,但仍对神经氨酸酶抑制剂敏感。