阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测

目的：去阻遏持续高产ＡｍｐＣ酶，或产生超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ），或同时高表达这两类酶，是阴沟肠杆菌对多种β－内酰胺类抗生素耐药的主要机制。方法：建立了一种改良的酶提取物三维试验法，在常规ＮＣＣＬＳ纸片扩散法基础上接种大肠杆菌ＡＴＣＣ ２５９２２，在头孢西叮药敏纸片周围放射性切出琼脂小槽，待测菌的粗酶提取物在槽内扩散，与头孢西叮纸片扩散相交。结果：由于ＡｍｐＣ酶水解头孢西叮，出现抑菌圈内生长细菌，这一现象能被加入槽内的邻氯西林抑制，而ＥＳＢＬｓ不能水解头孢西叮，无此现象。因邻氯西林不能抑制ＥＳＢＬｓ活性，同样用头孢由松取代头抱西叮纸片，用邻氯西林抑制槽内ＡｍｐＣ酶，可测出 ＥＳＢＬｓ。使用该法检测分别产 ＡｍｐＣ酶、 ＥＳＢＬｓ的标准株和 ２４株临床分离多重耐药的阴沟肠杆菌。结果各种标准株检测无误，２４株阴沟肠杆菌中，１４株去阻遏持续高产ＡｍｐＣ酶试验阳性，４株产ＥＳＢＬｓ试验阳性，５株此两类酶检测均阳性，１株此两类酶检测均阴性，原因待分析。结论：对于阴沟肠杆菌，这种改良的酶提取物三维试验法能较好地鉴别持续高产 ＡｍｐＣ酶和 ＥＳＢＬ的阴沟肠杆菌，并适用于临床常规检验。

阴沟肠杆菌6株中产超广谱β内酰胺酶的基因型

目的 :研究阴沟肠杆菌 6株的超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 :分别使用对TEM型、SHV型和CTX M型基因特异的引物 ,PCR扩增 6株阴沟肠杆菌接合子Esbl基因 ,对PCR产物直接测序分析其基因型。结果 :3株阴沟肠杆菌的接合子均含有CTX M 3型酶 ,同时含有TEM型酶。另 3株阴沟肠杆菌接合子均含有一种等电点为 8.3未知的 β内酰胺酶 ,同时含有一种 pI为 5 .4或 5 .5未知的 β内酰胺酶。 结论 :临床分离的阴沟肠杆菌可产CTX M 3型酶 ,对头孢菌素类产生耐药性。

阴沟肠杆菌ampD基因突变与去阻遏持续高产AmpC酶

目的 :研究临床分离的阴沟肠杆菌ampD基因突变与去阻遏持续高产AmpC酶的关系。 方法 :分别检测 4株临床分离的头孢曲松耐药菌和 2株头孢曲松敏感菌 ,头孢西丁诱导前和诱导后 β内酰胺酶的表达水平 ;使用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增 6株阴沟肠杆菌ampD基因 ,测定并分析它们的核苷酸序列。 结果 :诱导前 ,4株耐药株β内酰胺酶表达水平是敏感株的 39～ 82 9倍。诱导后 ,2株敏感菌 β内酰胺酶水解活性分别为诱导前的 18倍和 2 2倍 ;4株耐药菌则无明显增加。ampD6基因在 316～ 32 0位缺失 5个核苷酸 ,出现移码突变 ,34 0位突变为终止码 ;AmpD1、AmpD8和AmpD2 5的C’末端分别有 6个、3个、3个可疑的氨基酸替代。结论 :阴沟肠杆菌AmpD蛋白C’端缺失或氨基酸的替代可能导致了AmpC酶的去阻遏表达 ,导致细菌对 β内酰胺类抗生素耐药。

铜绿假单胞菌对10种抗菌药物敏感性分析

目的调查我院临床分离的铜绿假单胞菌对10种抗菌药物的敏感性,分析其多重耐药特点,指导临床用药.方法收集我院2002-2004年临床分离368株铜绿假单胞菌,使用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法测定其对10种抗菌药物的抑菌环直径,按NCCLS 2002年规定判读结果.结果ICU分离菌对亚胺培南和美罗培南耐药率为54.3%和52.2%,分别高于非ICU28.8个百分点和34.7个百分点(P＜0.01),对头孢吡肟、头孢他啶和氨曲南的耐药率高于非ICU 10.2～12.6个百分点(P＜0.05);呼吸道标本分离株对哌拉西林、哌拉西林-三唑巴坦、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、环丙沙星、庆大霉素和阿米卡星的耐药率高出非呼吸道标本12.2～25.4个百分点(P＜0.01),对头孢他啶的耐药率比非呼吸道标本高10.1个百分点(P＜0.05).结论我院ICU和呼吸道标本分离铜绿假单胞菌对多种抗菌药物的耐药率高于非ICU和非呼吸道标本分离株.

深圳地区甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学特征

目的调查深圳地区甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的耐药情况并了解其分子流行病学特征。方法收集2012年深圳地区3所医院的112株甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌,琼脂稀释法测定对10种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),聚合酶链反应(PCR)来检测杀白细胞毒素(Panton-Valentine leucocidin,PVL)基因,并对PVL基因阳性菌株行多位点基因序列分型(MLST)。结果 MRSA检出率26.2%,112株MRSA对复方新诺明、莫西沙星、环丙沙星、庆大霉素、红霉素、克林霉素和四环素的耐药率分别为4.46%、12.50%、16.96%、19.64%、46.42%、25.00%和26.79%,未发现万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁耐药株;PVL阴性株和阳性株对10种抗菌药物的耐药率均无显著性差异;112株MRSA中,PVL基因阳性13株(11.61%),MLST分型为7种已知序列型和1种新的序列型,其中ST338和ST25最多。结论深圳地区MRSA检出率较低,PVL基因阳性率处于中等水平,具有明显不同于其他地区的独特的遗传背景。

葡萄球菌属临床分离菌的耐药性监测

目的 :了解临床分离葡萄球菌属对常用抗菌药物的敏感性。方法 :受试菌为临床分离的 2 19株金黄色葡萄球菌和 75 6株凝固酶阴性葡萄球菌。采用Kirby Bauer法进行药敏试验。结果 :甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌 (MRSA)为 32 .4 % ,万古霉素对MRSA具有强大的抗菌活性 ,敏感率 10 0 % ;MRSA对其他大多数抗菌药物的敏感性低于 5 0 %。甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA)对青霉素敏感率为 10 .0 % ,对多数 β内酰胺类抗生素的敏感率 >90 % ,对红霉素、克拉霉素的敏感率为 4 0 %左右。甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)对多数抗菌药物的敏感率低于 5 0 % ,无万古霉素耐药株 ,甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌 (MSCNS)对多数抗菌药物的敏感率 >70 %。结论 :MRSA对临床常用抗菌药物耐药性严重 。

大肠埃希菌中质粒AmpC型β内酰胺酶基因型的检测

目的 :研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC型 β内酰胺酶的基因型。 方法 :收集对头孢西丁不敏感的 4 2株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 ,用酶提取物三维试验检测AmpC酶 ;用等电聚焦电泳、接合试验、聚合酶链反应 (PCR)确定AmpC型酶的表型和基因型。结果 :16株菌高产AmpC酶 ,其中 11株同时产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ;这 16株菌对亚胺培南敏感 ,5株只产AmpC酶的菌对头孢吡肟敏感 ;等电聚焦电泳发现这 16株菌产生 2～ 5种酶 ,且都有一个能为氯唑西林抑制的、等电点>7.8的酶带 ;1株大肠埃希菌通过接合试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌 ;PCR扩增和测序证实其为质粒介导的ACT 1型AmpC酶。 结论 :2 0 0 0年我院分离的对头孢西丁不敏感的 4 2株革兰阴性杆菌中证实有 15株大肠埃希菌和 1株肺炎克雷伯菌产AmpC酶 ,并在国内首次发现 1株大肠埃希菌产ACT 1型质粒AmpC酶。

G试验对深部真菌感染的早期诊断价值分析

目的探讨G试验在深部真菌感染(DFI)早期诊断中的临床价值。方法 1 995例患者G试验检测结果,计算阳性率,分析阳性患者临床科室分布情况;比较356例患者G试验和体液标本真菌培养检测结果。结果在1 995例患者中G试验阳性率为16.46%(328/1 995)。356例患者G试验阳性66例、阴性290例,真菌培养阳性24例、阴性332例,二者阳性、阴性符合率分别为30.43%和85.67%。结论 G试验在深部真菌感染早期诊断中具有重要临床价值。

重症监护室鲍曼不动杆菌连续11年耐药谱动态观察

目的了解重症监护室(ICU)鲍曼不动杆菌临床感染情况和耐药性变迁,为合理应用抗菌药物和预防控制医院感染提供依据。方法回顾性分析2001年1月至2011年12月ICU临床标本中分离的733株鲍曼不动杆菌资料,用WHONET5.4分析鲍曼不动杆菌的耐药率变迁。结果 ICU鲍曼不动杆菌痰标本所占比例最高(69.58%),对临床常用的15种抗菌药物耐药率总体呈上升趋势;并且2009年呈飞跃式上升且2010和2011年居高不下,对除米诺环素和头孢噻肟外的13种抗菌药物的耐药率及多药耐药鲍曼不动杆菌和泛耐药鲍曼不动杆菌的分离率显著高于非ICU(P<0.01)。结论 ICU鲍曼不动杆菌11年对临床常用抗菌药物的耐药性显著增强,耐药形势非常严峻,应当加强感染控制。

口腔牙菌斑与呼吸机相关性肺炎的关系

目的探讨机械通气患者口腔牙菌斑与呼吸机相关性肺炎(VAP)的关系。方法选择我院重症监护病房行机械通气后并发VAP的30例患者,同时取其口腔牙菌斑和肺泡灌洗液进行培养,并进行细菌鉴定和同源性分析。结果 30例患者中有22例的牙菌斑能培养出需氧细菌,其中15例的牙菌斑培养出的需氧菌≥2种;17例患者的肺泡灌洗液能培养出需氧细菌。牙菌斑和肺泡灌洗液培养出的革兰阴性菌的比例均高于革兰阳性菌。17个肺泡灌洗液样本中有10个和自身牙菌斑所培养出来的细菌具有高度同源性。结论口腔牙菌斑与VAP的发生密切相关,可能是机械通气患者呼吸道病原体的一个重要来源。

极低出生体重儿院内感染状况及原因分析

目的探讨极低出生体重儿（verylowbirthweightinfant，VLBWI）院内感染特征，分析感染发生的可能危险因素，以便采取针对性的预防对策。方法回顾性调查2012年1～6月本院重症监护病房58例VLBWI感染发生情况、感染特征及感染发生的原因。结果58例WLBWI住院期间院内感染发生率为60．34％，感染病原菌主要为革兰氏阳性菌（占88．47％），以肺部感染（占82．90％）为主；感染时间主要在出生后21d内。机械通气、经外周静脉置管术（peripherallvinsertedcentralcatheter,PICC）、阿氏评分≤7分、使用氟康唑及胎膜早破的VLBWI感染率较高（均P〈o．05）。结论VLBWI感染发生率较高，主要为肺部感染，发生时间主要集中在出生后21d内；机械通气、PICC、阿氏评分低、胎膜早破等是VLBWI感染的主要因素。应加强VLBWI出生后3W内的感染控制，尽量减少对患儿的侵入性操作，合理使用抗生素，同时加强围生期保健，降低早产发生率。

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌同源性研究

目的 探讨我院 2 0 0 1年 8月至 2 0 0 2年 3月显著增多的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌之间的同源性。方法 用脉冲场凝胶电泳对 7株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌进行分型 ,明确其是否为同一菌株的克隆。结果 7株不动杆菌分为 :A型 2株 ,A1型 2株 ,A2 型 1株。A1型与A2 型之间的相似系数达 94 .6 % ,它们与A型的相似系数达 84 .9% ,其余两株各有独特的PFGE分型。结论 其中 5株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有高度同源性 ,第

医院感染细菌耐药监测及耐药机制研究

此题涉及临床微生物学、感染内科学、预防医学、流行病学、分子生物学.它主要研究了16年中28 000株菌的耐药情况,发现了有中国特色的耐药数据及其耐药机制,建立整套适合国情的监测方法.

288例肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的分析肺炎克雷伯菌 (kpn)的耐药现状 ,掌握肺炎克雷伯菌产超广谱 β内酰胺酶 (ESBL)的发生率。方法分析 2 0 0 0年 7月至 2 0 0 3年 7月间从临床感染标本中分离的 2 88株肺炎克雷伯菌对 2 0种抗生素的耐药情况 ,用NCCLS推荐的纸片扩散法ESBL确证试验进行分析。结果肺炎克雷伯菌ESBL发生率为 4 1 7%。ESBL株较非产ESBL株对头孢菌有较高耐药率 ,还对多种其它抗生素有较高的耐药率 ,如氨基糖苷类 ,喹诺酮类。亚胺培南和美洛培南仍是对Kpn最有效的药 ,未出现耐药株 ;哌拉西林 他唑巴坦也有较好的抑菌活性。结论本院肺炎克雷伯菌的ESBL阳性率较高 ,碳青霉烯类仍是治疗ESBL株最有效的抗生素 ,哌拉西林 他唑巴坦对ES BL株仍有较好的活性 ,但不能忽视多耐菌株的出现。为减少ESBL和多耐菌株的产生 ,应注意合理使用抗生素。

特发性血小板减少性紫癜合并侵袭性真菌病的菌群分布及药敏分析

目的分析特发性血小板减少性紫癜疑合并侵袭性真菌病的菌群分布特点及药敏情况,为合理用药提供参考。方法回顾性分析126例ITP疑合并IFD的患者,所有患者在确诊IPT并实施治疗前均无真菌感染的证据,送检患者痰、尿、血、引流物、分泌物及穿刺液等。采用直接涂片显微镜检查法检查真菌菌丝或孢子,有菌丝则判断为真菌增殖致病状态。将所有标本分别接种于萨布罗培养基上培养,应用VITEK32全自动微生物分析仪酵母菌鉴定卡进行鉴定,对鉴定为假丝酵母菌属的菌株再次接种于科玛嘉假丝酵母菌属显色培养基上培养。采用ATB真菌药敏试剂条2进行微生物敏感性试验,药物有两性霉素B、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑及卡泊芬净等。结果 126例ITP疑合并IFD患者中,确诊16例(12.7%),临床诊断48例(38.1%),拟诊62例(49.2%)。从确诊和临床诊断的64例患者中共分离出致病真菌84株,阳性检出率66.7%(84/126)。分离的菌株分别为念珠菌属、曲霉菌属、毛霉菌、隐球菌、卡式肺孢子菌及其他。念珠菌属占第1位,占分离菌群的59.5%;念珠菌属中又以白色假丝酵母菌为主,占念珠菌属的32.1%(27/84),其次为曲霉菌属[19.0%(16/84)],第3位为毛霉菌属[10.7%(9/84)]。氟康唑天然对克柔假丝酵母菌及曲霉菌无效;毛霉菌仅对两性霉素B及氟康唑敏感;卡式肺孢子菌除卡泊芬净外对其余抗真菌药均不不敏感,甲氧苄啶-磺胺甲恶唑为其首选。结论特发性血小板减少性紫癜患者疑合并侵袭性真菌病菌株以念珠菌属为主,念珠菌对两性霉素B及卡泊芬净敏感性高。

风扇形活塞注射器行非传统吸药法安全性实验研究

[目的]研究风扇形活塞注射器行非传统吸药法与使用后放置时间与细菌污染的相关性,探讨一种既省力、省时、省材又更适合于临床大量配制输液的非传统吸药法的安全性。[方法]用2 0mL风扇形注射器行非传统吸药法和传统吸药法连续配制相同液体A、B、C、D、E五组,分别对能量合剂、灯盏细芯、银杏达莫配制液进行细菌培养各90组,对连续配制五组液体后的注射器取即刻及放置1h、2h、3h各组的45个活塞进行细菌培养,并进行耗时对比。[结果]配制液细菌培养阳性率为0 ,连续抽吸2 0次内的注射器放置2h内其活塞细菌培养阳性率为0 ,非传统吸药法比传统吸药法省时。[结论]采取非传统吸药法配制液体后,风扇形活塞注射器在短时间内连续抽吸一定的次数是安全的。

基于广东省农村生活垃圾现状的政策性对策的探究

为了解广东省农村生活垃圾现状,并提出合理可行的治理对策,进行了调研。本次问卷调研面向广东省各地区农村家庭,采用多级抽样(3120份)和任意抽样(280份)相结合的整体抽样调查方法,针对分析得出现状产生的原因,从而整理出几条政策性对策:建立健全相关法律、法规;加大农村垃圾处理的资金投入;建立并完善管理模式和监督管理体系;开展科普宣传,增强农民的环保意识。文章提出的措施对改善农村环境具有一定的借鉴意义。

产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科对头孢美唑等抗菌药物的体外敏感性分析

目的比较头孢美唑等12种β-内酰胺类药物对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形菌的体外抗菌活性。方法收集2005—2006年全国15所教学医院产ESBLs非重复的528株大肠埃希菌、311株肺炎克雷伯菌和15株奇异变形菌，通过琼脂稀释法测定12种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），数据输入WHONET5．4软件进行耐药性分析。结果对于产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，碳青酶烯类敏感率最高（100．0％），头霉素类次之（80．1％～97．3％）；哌拉西林／他唑巴坦活性（78．5％～95．1％）高于头孢哌酮／舒巴坦（44．1％～56．2％）；头孢他啶对产ESBLs大肠埃希菌的活性要明显高于其他三代头孢菌素和头孢吡肟，但对于产ESBLs肺炎克雷伯菌，这种差距缩小，头孢呋辛敏感率〈1．6％；产ESBLs的奇异变形菌对碳青酶烯类、头霉素类和俨内酰胺类加酶抑制剂的药物均为100．0％敏感，而对头孢菌素的敏感性低。结论碳青酶烯类、头霉素类对产ESBLs的肠杆菌科保持了较高的抗菌活性。