核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)在免疫代谢中的研究进展

固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1)和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRC3)是NLR家族中的关键成员,它们与免疫代谢之间的关联成为研究的新焦点。NLRP3的激活可促进炎性小体的组装,导致白细胞介素1β(IL-1β)的激活,进而引发炎症反应。NLRC3则能抑制核因子κB(NF-κB)和干扰素基因刺激物/TANK结合激酶1(STING/TBK1)信号通路的激活,以及炎性小体的形成,进而调控免疫反应。而NLRX1则通过调节Ⅰ型干扰素、NF-κB信号传导以及自噬等过程,对免疫应答进行精细调控。这些NLR成员不仅参与病原体的识别,更与免疫代谢的调控密切相关。对NLR家族的深入研究将有助于揭示免疫代谢的奥秘,为疾病的治疗提供新的思路。

固有免疫受体NLRX1在中枢神经系统疾病中作用的研究进展

中枢神经系统(CNS)正常功能的发挥高度依赖细胞能量供给与固有免疫体系提供的内环境稳定。NOD样受体家族成员X1(NLRX1)是定位于线粒体的固有免疫模式识别受体,具有调节线粒体自噬、炎性反应、活性氧的生成等多种功能,因而可影响炎症、肿瘤等多种疾病的进展。近年来的研究表明,NLRX1通过抑制炎性反应、调节神经细胞线粒体自噬、线粒体动力变化和氧化应激反应等机制,在自身免疫性脱髓鞘疾病、缺血缺氧性疾病、创伤等CNS疾病中发挥神经保护作用。了解NLRX1参与CNS疾病过程的机制,可加深对CNS固有免疫分子的认识,并可望为CNS疾病的治疗提供新的思路与靶点。

汉滩病毒(HTNV)感染正常人肺上皮细胞及其固有免疫与代谢改变

目的确定汉滩病毒(HTNV)可感染BEAS-2B正常人肺上皮细胞并通过转录组分析HTNV感染诱导的宿主免疫应答和代谢改变。方法采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和免疫荧光实验检测BEAS-2B细胞内的病毒载量,并使用RNA测序技术进行转录组分析。结果在HTNV感染的BEAS-2B细胞中,HTNV核衣壳蛋白(NP)和小片段(S)表达均随时间增加。对HTNV感染BEAS-2B细胞48 h的转录组数据分析,得到328个差异基因,基因本体论(GO)富集及京东基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析发现其差异主要集中在干扰素应答及固有免疫模式识别受体相关通路。通过蛋白质互作网络分析发现多个固有免疫应答相关基因,此外筛选到4个编码去整合素和具有血小板反应蛋白基序的金属蛋白酶的基因。通过对代谢通路分析发现3个与萜类骨架生物合成相关的基因,2个与糖酵解/糖异生相关基因和2个类固醇激素生物合成相关基因。此外,差异基因的亚细胞定位分析表明多个差异基因位于线粒体。结论HTNV能有效感染BEAS-2B细胞,可作为体外HTNV感染人肺上皮的细胞模型。生物信息学方法筛选的HTNV感染相关的差异基因及代谢通路,可为研究HTNV感染的分子机制提供理论依据。

淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达

淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。

汉滩病毒G_2重组腺病毒的表达及其基因免疫的研究

目的:在VeroE6细胞中表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G2重组腺病毒(AdenoG2),并探讨其诱导免疫应答特性。方法:以HTNVAdenoG2病毒原种(滴度约1×1013pfu/L)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物。以表达产物免疫BALB/c小鼠后,用ELISA、微量细胞培养中和试验及淋巴细胞增殖试验检测体液及细胞免疫应答。结果:用HTNVAdenoG2感染VeroE6细胞后,可检测到HTNV糖蛋白G2的表达。用HTNVAdenoG2免疫小鼠后,可诱导产生抗HTNV糖蛋白G2的特异性抗体,抗体效价为1∶40。微量细胞培养中和试验的结果表明,HTNVAdenoG2还可刺激小鼠产生低水平的中和抗体;但淋巴细胞的增殖反应不明显。结论:在VeroE6细胞中成功地表达了HTNV糖蛋白G2。以HTNVAdenoG2免疫小鼠后,主要刺激小鼠产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,而特异性的细胞免疫应答不明显。本研究结果为HTNV基因工程疫苗的研制提供了实验依据。

汉滩病毒囊膜糖蛋白G_2基因重组腺病毒的构建与表达

获得汉滩病毒G2 基因 ,构建其重组腺病毒并在HEK2 93细胞中包装表达 ,为研究汉滩病毒基因疫苗提供了实验基础。设计引物采用PCR从含汉滩病毒 \|76 1 1 8株M基因的M5 6质粒扩增出糖蛋白G2 基因片段 ,并将其克隆入腺病毒载体Adeno XviralDNA ,筛选获得重组腺病毒DNA ,转染HEK2 93细胞 ,包装、扩增后得到汉滩病毒G2 基因重组腺病毒原种 ;并在感染细胞内初步表达 ,用ELISA检测表达产物。得到了含汉滩病毒G2 基因的重组腺病毒 ,其滴度约为 1 0 10 pfu/mL ,同时在感染的HEK2 93细胞中检测到汉滩病毒糖蛋白G2 的表达。含汉滩病毒糖蛋白G2 基因重组腺病毒的成功构建 。

人源性噬菌体抗体库的构建及抗HFRS病毒抗体的筛选

目的：构建人源性 Ｆａｂ 噬菌体抗体基因库并筛选可表达与肾综合征出血热（ Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ）病毒抗原特异结合之 Ｆａｂ 抗体的重组克隆． 方法：利用逆转录、聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）等技术从 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ恢复期患者外周血淋巴细胞（ Ｐ Ｂ Ｌ）中扩增出人 Ｉｇ Ｇ抗体重链 Ｆｄ 基因及κ轻链基因，将之克隆入噬菌体载体ｐ Ｃｏｍ ｂ３，构建人源性 Ｆａｂ 噬菌体抗体基因库． 并利用噬菌体表面呈现技术，对此抗体库进行淘筛、富集． 结果：①成功地构建了人源性 Ｆａｂ 抗体基因库，库容量为 ３×１０６ ． ②从噬菌体抗体库中淘筛得到了能表达人源性抗 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ病毒 Ｆａｂ 抗体的重组克隆． 结论：利用噬菌体抗体库技术，可以获得能表达人源性抗 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ病毒抗体的重组克隆．

淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段在真核细胞中的初步表达

将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明:已成功将目的片断LCDV MCP 0.6kb转染到CHO细胞,并得到了初步表达。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。

人源性抗HFRS病毒抗体基因真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人源性抗HFRS病毒基因工程抗体基因的表达载体 ,为其进一步在真核细胞中表达奠定基础。方法 :经多次克隆将人源性抗HFRS病毒抗体可变区基因与启动子、增强子、前导肽序列和剪接供体信号等真核表达元件及人抗体恒定区基因和抗生素筛选标记基因相连接 ,构建抗体重链基因真核表达载体VHEpSV gpt及轻链真核表达载体VκEpSV neo。结果重组质粒酶切鉴定表明 ,人源性抗HFRS病毒抗体可变区基因已与载体pSV gpt和pSV neo正确连接。结论利用基因工程技术成功地构建了人源性抗HFRS病毒抗体基因真核表达载体。

汉坦病毒囊膜糖蛋白G1基因重组腺病毒载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达

拟构建汉坦病毒G1基因重组腺病毒载体并在VeroE6细胞中表达,为汉坦病毒基因疫苗的研究提供实验基础。PCR法从含汉坦病毒-76118株M基因的M56质粒扩增糖蛋白G1基因片段,利用穿梭质粒pShuttle,将其克隆入Adeno-X病毒DNA,获得重组腺病毒DNA,转染HEK293细胞,包装、扩增后得到汉坦病毒G1基因重组腺病毒原种,感染VeroE6细胞,用IFA法和ELISA法检测表达产物。得到了含汉坦病毒G1基因的重组腺病毒,其滴度约为1011pfu/ml,感染VeroE6细胞后检测到汉坦病毒糖蛋白G1的表达。

淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白1.3kb基因真核载体的构建及初步免疫

从LCDV1.3kb/pGEX-4T1质粒酶切获得LCDV1.3kb基因片段,构建重组真核表达质粒LCDV1.3kb/pcDNA3.1(+);并将其免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠血清中抗LCDV抗体和IFN-γ。结果发现免疫小鼠可产生特异性抗LCDV抗体,平均效价为1:40,最高效价达1:320,但小鼠血清中IFN-γ平均含量在30pg/mL左右,与阴性对照组无明显差异。结果表明,所构建的重组表达质粒LCDV1.3kb/pcDNA3.1(+)免疫小鼠后可成功诱导其特异性体液免疫应答,但细胞免疫应答不明显,可能与所选载体、免疫动物种类及免疫方法有关,其具体原因有待于进一步探索。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。

汉滩病毒G_1重组腺病毒的表达及其免疫学特性研究

将汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G1重组腺病毒(Adeno-G1)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物;并进一步将其免疫Balb/c小鼠。结果可检测到HTNV糖蛋白G1在VeroE6细胞中表达;用该重组腺病毒免疫小鼠,结果表明免疫小鼠体内可诱导产生抗汉滩病毒G1特异性抗体,同时微量细胞培养中和实验结果表明重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体,但淋巴细胞增殖反应不明显。说明Adeno-G1免疫小鼠后,主要刺激机体产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,但刺激机体产生特异性的细胞免疫应答不明显,为HTNV基因工程疫苗的研究提供了实验基础。

七年制医学生课外科研的重要性

0引言 七年制医学生教学是培养具有硕士学位的高级医学人才的重要途径之一，其特点是“学、硕连读”，对他们的要求起点高，除了需要他们掌握扎实的理论知识之外，还要求他们在学期间设计并完成毕业论文．在七年制医学生中开展课外科研，是实现课堂教学与课外活动相结合的重要环节，不仅能够完善学生的知识结构，而且还激发学生的求知兴趣和学习主动性，从而发展学生的创造性思维，培养学生的好奇心、分析问题、解决问题的能力及培养学生综合实验技能和科研素质．七年制医学生是我校培养高素质创新型军事医学人才的重要途径之一，因此在我校七年制医学生中开展课外科研活动，显得尤为重要．

医学生物技术专业实验教学探索与实践

随着现代生物技术的快速发展，交叉形成的医学生物技术已经成为最活跃、取得成果最多的领域之一，培养高素质的医学生物技术专业人才不仅需要掌握系统的生物技术理论知识，而且还需要具有很强的实验能力，培养的是一类应用型人才。对医学生物技术专业的实验教学进行了初步探索和实践，为培养合格的生物技术专业人才奠定基础。

人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因在Sp2/0细胞中的初步表达

目的在前期工作的基础上进一步将人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因转染到鼠骨髓瘤细胞Sp2/0并进行初步表达。方法将含人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因的真核表达载体VκEpSV-neo,用脂质体法转染鼠骨髓瘤细胞Sp2/0用RT-PCR法和免疫组化染色法检测转染及表达结果。结果RT-PCR和免疫组化染色结果表明人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因不仅已成功地转染进Sp2/0细胞,并得到了良好的表达。结论在鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中成功表达人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因,对抗HFRS病毒抗体人源化的研究具有重要意义。

关于农产品市场营销的思考及对策

加强农产品市场营销,对于推动农产品市场需求,切实增加农民收入,具有重要意义。文章从市场营销的基本原理出发,分析了农产品市场营销的现状不足,结合农产品市场营销的基本要素,对搞好农产品市场营销进行了深入思考,以期发挥市场营销在解决“三农”问题中的作用。

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fd段基因的克隆和序列分析

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬ） 中提取细胞总ＲＮＡ， 反转录成ｃＤＮＡ 。以之为模板，用半套式聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增人Ｉｇ Ｇ 抗体Ｆｄ 段及轻链基因，并将Ｆｄ 段基因克隆入噬菌体载体ｐｃｏ ｍ ｂ３ ；经酶切鉴定后，再亚克隆入ｐＧＥＭ７ｚｆ ，筛选阳性克隆测序。经计算机分析，Ｆｄ 段基因的全长为６３９ｂｐ ，编码２１３ 个氨基酸，属于人Ｉｇ Ｇ２ 亚类。

抗家鼠型HFRS病毒McAb 13E_2V_H基因的克隆及序列分析

从分泌高亲和力抗家鼠型ＨＦＲＳ病毒型特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１３Ｅ２中提取细胞总ＲＮＡ，经逆转录合成ＣＤＮＡ，并以之为模板，用特异性引物进行ＰＣＲ，扩增出约３６０ｂｐ产物，将之克隆入ＰＵＣ１８质粒中。序列分析表明，所克隆的基因符合编码小鼠抗体ＶＨ的特征。１３Ｅ２ＶＨ基因由２６６个ｂｐ组成，编码１２２个氨基酸，隶属于小鼠重链ⅡＡ亚组。

七年制学生医学微生物学教学浅谈

医学微生物学是一门十分重要的医学基础课程,它是连接基础课与临床课的桥梁,因此在医学教育中占有十分重要的地位.七年制学生是高等医学教育培养具有硕士学位的高级医学人才,其培养目标为毕业以后既是一名合格的医生,也是一名优秀的科研工作者,因此在七年制学生医学微生物学教学中采用行之有效的方法显得尤为重要.

电教片与医学生素质教育

素质教育是现代教育科学中的一个组成部分,在医学教学中显得尤为重要,而电教片具有直观性、生动性、浓缩性等优点,因而它的制作与使用已经成为全面提高医学生综合素质的一种不可替代的教学手段.