角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。

纤维母细胞生长因子10基因在角膜混浊小鼠中的克隆测序与表达研究

目的研究纤维细胞生长因子10(Fgf10)基因在角膜混浊小鼠(B6-Co)中的克隆测序及表达。方法正常小鼠(C57BL/6,B6)和B6-Co小鼠交配,取胚胎16.5dB6和B6-Co小鼠皮肤组织,提取总RNA并逆转录,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)技术分段扩增目的基因,连接T载体,转化感受态细胞,筛选阳性克隆,并测序分析;采用实时荧光PCR的方法进一步检测该基因在B6-Co小鼠中的表达。结果测序发现在Fgf10基因第三外显子1 914bp和1 915bp之间插入了碱基A;实时荧光PCR结果显示Fgf10在B6-Co小鼠中的表达明显下降(P<0.05)。结论 Fgf10与B6-Co小鼠出生时眼睑开放(EOB)表型有关,其表达调控机制有待进一步研究。

SNP标记对角膜混浊小鼠突变相关基因的精细定位

为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提取F2代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明:B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283～113 397 654bp之间,因该区间内有5个已知基因,其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关,提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。

斯氏艾美耳球虫热休克蛋白70基因的克隆及表达分析

为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E.stiedai HSP70的全基因序列,将其连入原核表达载体p ET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)p Lys S,通过IPTG诱导表达重组HSP70蛋白,并进行Western-blot分析。结果表明:HSP70序列全长为2 727 bp,最大ORF为2 010 bp。HSP70在诱导后37℃培养4 h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下无表达。说明试验成功获得E.stiedai HSP70的全基因序列以及重组HSP70蛋白。

靶向抑制MAP3K1对小鼠乳腺癌细胞生物学行为的影响

为了在细胞学水平研究靶向抑制MAP3K1(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1)基因对小鼠乳腺癌4T1细胞黏附、运动及侵袭能力等生物学行为的影响,试验用体外构建靶向"沉默"MAP3K1基因的amiRNA(artificial microRNA)干扰载体,以X-treme GENE HP转染4T1细胞(干扰组转染amiRNA干扰载体,对照组转染空载体,空白组未转染质粒)对MAP3K1基因mRNA及蛋白表达水平进行检测,以测定干扰效率;分别以黏附试验检测小鼠乳腺癌4T1细胞的黏附能力,用划痕-愈合试验与Transwell侵袭试验测定小鼠乳腺癌4T1细胞的运动与侵袭能力。结果表明:小鼠乳腺癌4T1细胞转染MAP3K1 amiRNA-3干扰载体与空载体后,干扰4T1细胞MAP3K1 mRNA水平及蛋白水平均被有效抑制,干扰效率高达70%(P<0.01)。试验组4T1细胞黏附能力极显著低于对照组(P<0.01);干扰组4T1细胞的运动与侵袭能力均显著低于对照组(P<0.05)。说明构建的amiRNA干扰载体能够有效抑制靶基因MAP3K1的表达,并能够显著抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的黏附、运动与侵袭能力;靶向抑制MAP3K1基因能够广泛地影响小鼠乳腺癌4T1细胞的生物学行为。

C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养与纯化鉴定

为了建立一种易于操作,能够获得高纯度、高活力C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养体系,并对分离提取的细胞进行纯化鉴定,试验在无菌环境下取E12.5胎鼠皮肤,剪碎至1 mm2大小,均匀铺于皿中,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基连续培养4 d,以胰蛋白酶消化-再贴壁法分离纯化目的细胞,分别以NIH3T3、角质形成性细胞作为阳性与阴性对照,采用免疫荧光、Western-blot检测Vimentin及Keratin的表达情况,以鉴定所分离的细胞及其纯度。结果表明:组织块培养24 h即可见成纤维样细胞爬出,培养96 h细胞生长爬满全皿,经胰酶消化、筛网过滤再贴壁接种后能够获得形态均一、活力旺盛、具有成纤维细胞形态学特征的目的细胞;所分离细胞Vimentin表达阳性率为100%,而Keratin表达阳性率为0;与阴性对照角质形成性细胞相比,C57BL/6分离成纤维细胞和NIH3T3细胞均高表达Vimentin,且差异极显著,有统计学意义。说明以E12.5胎鼠皮肤为材料建立成纤维细胞分离培养体系,所分离培养的成纤维细胞具有更高的细胞活力和细胞纯度。

B6-Co突变系小鼠混浊角膜组织蛋白的二维凝胶电泳分析

背景:从蛋白质组学水平研究B6-Co突变系小鼠浑浊角膜与正常B6小鼠角膜组织的异同,有利于阐释人类角膜混浊的发生机制,开辟从表型驱动研究基因功能的新途径。目的:应用二维凝胶电泳分析技术比较分析B6和B6-Co小鼠的角膜蛋白质组学差异。方法:分别提取B6与B6-Co突变系小鼠角膜组织蛋白,将所获得的蛋白质样品进行二维凝胶电泳和凝胶染色,分析电泳图谱,比较正常角膜组织与混浊角膜组织的蛋白质异同。结果与结论:实验成功建立了对小鼠两种角膜组织蛋白的提取及二维凝胶电泳的基本方法和条件,二维凝胶电泳图谱清晰,通过比较分析发现B6-Co突变系小鼠混浊角膜蛋白质组中有13个蛋白质点显著下调,6个表达显著上调。B6小鼠和B6-Co突变系小鼠角膜蛋白质组有显著差异表达,提示由于基因的突变导致了相关信号通路的基因表达上调、下调或沉默。

雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究

目的研究天然活性化合物雷公藤红素(celastrol)对裸鼠移植肿瘤的抑制作用。方法建立人源肝癌HepG2细胞的裸鼠皮下移植肿瘤模型。20只裸鼠随机分为4组,即空白对照组和雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组分别按4.0 mg/kg、2.0 mg/kg、1.0 mg/kg雷公藤红素腹腔给药,每日一次,每周5 d,共给药30 d,实验中每5 d测量一次肿瘤体积的变化。结果雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组的体积抑瘤率分别是89.52%、65.60%和12.21%,与空白对照组相比,高剂量组、中剂量组的差异具有统计学意义(P<0.05)。高剂量雷公藤红素给药后对裸鼠肝脏和肾脏等产生严重的毒性反应。结论雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤具有良好的体内抗肿瘤效果,应进一步开展药物新剂型及分子结构优化方面的研究,减少其毒副反应。

三种抗球虫药物对家兔CYP1A2 mRNA和蛋白表达的影响

利用Real-time PCR和Western blot分别检测抗球虫药物磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利对家兔肝脏、肾脏、十二指肠中CYP1A2mRNA和蛋白表达的影响。40只新西兰白兔分为空白对照组、磺胺喹噁啉处理组、氯苯胍处理组和妥曲珠利处理组。空白对照组家兔饲喂正常颗粒饲料,磺胺喹噁啉处理组饲喂含25mg/kg浓度磺胺喹噁啉的颗粒饲料,氯苯胍处理组饲喂含66mg/kg浓度氯苯胍的颗粒饲料,妥曲珠利处理组饲喂含2mg/kg浓度妥曲珠利的颗粒饲料,连续30d。在第31天无菌条件下取出动物的部分肝脏、肾脏以及十二指肠,提取RNA、蛋白分别进行Real-time PCR、Western blot检测。Real-time PCR的结果表明,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利都能够诱导家兔肝脏和肾脏CYP1A2mRNA的表达,而妥曲珠利能够显著的抑制十二指肠CYP1A2mRNA的表达。Western blot结果表明,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利能够显著的诱导家兔肝脏CYP1A2蛋白水平的表达;磺胺喹噁啉显著的诱导肾脏和十二指肠CYP1A2蛋白表达,而氯苯胍能够显著的抑制肾脏CYP1A2蛋白的表达。结果提示,磺胺喹噁啉、氯苯胍和妥曲珠利对家兔CYP1A2mRNA和蛋白水平的表达均具有组织特异性,在不同的组织器官呈现出显著的诱导和抑制作用。

应用16S rDNA克隆文库法分析B6-Co小鼠角膜炎细菌组成

目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析B6-Co小鼠角膜细菌组成,B6小鼠作为对照。结果 B6-Co角膜混浊小鼠中共鉴定出20种细菌,隶属于15个属,包括葡萄球菌属、假单胞菌属、链球菌属、微球菌属、棒状杆菌属等。葡萄球菌属和假单胞菌属为优势群,葡萄球菌属丰度为19.7%~53.1%,假单胞菌属的丰度为17.4%~32.8%。其中葡萄球菌属主要是表皮葡萄球菌,丰度为13.8%~20.9%;缓慢葡萄球菌,丰度为14.0%~30.9%;金黄色葡萄球菌,丰度为7.4%~20.3%。此外,棒状杆菌和微球菌也比较常见。10 d龄B6小鼠未检测出细菌。结论 B6-Co突变系小鼠角膜细菌组成与人类角膜炎病原菌相似,是研究人类角膜炎诊断方法、发病机理及临床用药的很好的动物模型。

蛋白磷酸酶2A催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究

利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5d的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体,对P3代MEFs进行感染,分别用PCR,RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后MEFs的细胞周期的变化,利用细胞划痕试验检测了其细胞迁移能力的变化。结果显示,胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞,DNA,RNA和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除MEFs。流式分选发现Ad-Cre处理的MEFs与Ad-EGFP处理的MEFs相比,处于G2期的细胞比例为30.8%±2.57%,高于Ad-EGFP MEFs的23.9%±2.46%,并且细胞碎片的比例也远高于后者。划痕试验表明,Cα亚基缺失后细胞迁移能力下降,12h就显著低于对照组。结果表明,腺病毒携带的Cre重组酶能够在体外有效地敲除掉MEFs中的蛋白磷酸酶2A的Cα亚基,PP2ACα亚基的缺失会导致MEFs细胞周期倾向于阻滞在G2期,并会降低细胞迁移的能力。

蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞凋亡过程中的作用

为探究蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡过程中的作用,用Cβ+/-的杂合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取胚胎期12.5d(E12.5)的胚胎制备MEFs,用PCR、RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时对P3代MEFs利用流式分选技术检测其细胞凋亡和细胞周期的变化,并采用Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果采用胰酶消化方法成功获得了MEFs,DNA、RNA和蛋白水平鉴定显示获得了3对3的野生型和Cβ基因敲除MEFs。流式分选发现Cβ基因敲除MEFs和野生型之间细胞分裂期前期(M1期)细胞分别为53.95%±2.81和46.94%±4.17,细胞分裂期后期(M2期)细胞分别为21.14%±2.53和29.83%±3.25。但Bcl-2的蛋白表达量和mRNA表达量没有显著差异。结果表明,虽然蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基的缺失并不会导致小鼠胚胎死亡,但Cβ亚基的缺失会轻微影响胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞周期。

B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察

目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异。方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片。采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况;FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架;Hoechst染色眼睑部位细胞核。结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移。结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放。

不同胚期B6-Co小鼠眼睑组织中血清反应因子的表达变化

背景 C57BL/6角膜混浊表型的突变系（B6-Co）小鼠具有出生眼睑闭合不全（EOB）表型,是研究眼睑发育机制的良好动物模型.探讨血清反应因子（SRF）与B6-Co小鼠EOB表型形成的关系可为人类先天性眼睑发育缺陷产生机制的研究提供理论依据.目的 检测SRF在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达.方法 采用肌内注射戊巴比妥钠安乐死术,分别剖取B6-Co母鼠以及表型正常B6母鼠体内胚胎期（E）16.5 d、E17.5 d和E18.5 d小鼠各9只,分离眼睑组织,分别采用实时定量PCR法和Western blot法检测小鼠眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的相对表达水平.取各胎龄的B6-Co小鼠和B6小鼠制作组织冰冻切片,利用免疫荧光技术检测并比较2种小鼠SRF在眼睑组织中的定位和表达强度.结果 B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF mRNA的相对表达水平分别为0.41±0.06和0.24±0.17,明显低于B6小鼠的1.03±0.17和1.01±0.09,差异均有统计学意义（P=0.025、0.017）;B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF蛋白的表达水平分别为0.08±0.01和0.08±0.01,明显低于B6小鼠的0.12±0.03和0.13 ±0.02,差异均有统计学意义（P=0.036、0.024）;而2种小鼠间E18.5 d时眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的表达量差异均无统计学意义（P=0.387、0.774）.免疫荧光染色显示,SRF蛋白多表达于B6-Co小鼠和B6小鼠眼睑组织的角质层细胞,但B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞中SRF蛋白表达的荧光强度明显弱于B6小鼠.结论 SRF在B6-Co小鼠眼睑组织中的表达量明显下调,SRF可能参与眼睑发育缺陷的发生过程.

普通级与SPF级新西兰兔肝脏、十二指肠病理、超微结构及肝功能的比较研究

为了研究普通级与SPF级新西兰兔肝脏及肠道病理、超微结构和肝功能的变化差异,从而为正确选择、应用实验兔开展相关科学试验提供参考依据,试验分别选择6只普通级与SPF级新西兰白兔,采集粪便经饱和盐水漂浮法检查是否感染兔球虫;采血测定肝功能生化指标;解剖兔取部分肝脏和十二指肠,制作切片后进行H.E.染色,观察病理变化和超微结构。结果表明:在病理及超微结构比较上,普通级兔肝脏、十二指肠均出现明显的变化,主要表现在普通级兔肝脏、十二指肠表面与实质出现大小、数量不一的球虫结节,结节病灶有大量兔球虫卵囊,侵入周围组织、细胞,进而影响肝脏、十二指肠正常的病理结构与超微结构。与SPF级兔相比,普通级兔肝功能相关的5项指标中有3项出现显著差异,2项出现极显著差异。说明普通级兔肝脏正常的机理功能受到影响,提示有条件时应选用微生物控制等级更高的SPF级兔开展相关科学实验。

缩宫素对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用

目的:观察缩宫素对大鼠子宫内膜异位症(EMT)模型的治疗作用。方法:建模成功的SD大鼠随机分为缩宫素(OT)组和0.9%氯化钠液(NS)组各20只,OT组采用肌内注射OT 160μg/kg·d^(-1),NS组采用肌内注射0.9%氯化钠液0.1 ml/d。治疗4周后开腹观察异位病灶体积变化,应用RT-PCR、Western-blot检测治疗前后两组大鼠异位内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血小板反应素-1(TSP-1)mRNA及蛋白的表达水平。结果:(1)治疗前,OT组大鼠异位病灶体积(40.61±9.45 mm^3)与NS组(39.32±7.75 mm^3)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4周后,OT组大鼠异位病灶体积(15.21±3.11 mm^3)较NS组(39.59±7.65 mm^3)明显减小(P<0.05)。NS组治疗前后异位病灶体积无明显变化(P>0.05)。(2)OT组VEGF mRNA、TNF-αmRNA相对表达量(0.21±0.02,0.41±0.20)均较NS组(0.87±0.05,1.09±0.10)明显下降(P<0.05);OT组TSP-1 mRNA的相对表达量(3.87±0.84)较NS组(0.96±0.25)明显升高(P<0.05)。(3)OT组VEGF及TNF-α蛋白相对表达量(0.12±0.17,0.17±0.20)均较NS组(1.34±0.35,1.07±0.23)明显下降(P<0.05);OT组TSP-1蛋白相对表达量(1.01±0.14)较NS组(0.33±0.07)明显升高(P<0.05)。结论:缩宫素对大鼠EMT模型可能具有治疗作用,EMT病灶组织的高度血管化,可能与VEGF、TNF-α和TSP-1的表达失衡密切相关。

NOVA1在肿瘤发生、发展中作用的研究进展

神经-肿瘤腹侧抗原1(neuro-oncological ventral antigen 1,NOVA1)是神经特异性剪接因子,在神经系统发育、功能维持中具有重要作用。近年,多项研究发现,在肺癌、肝癌、结直肠癌等肿瘤中,NOVA1可促进癌细胞增殖、迁移、侵袭,与预后密切相关。该文就NOVA1在肿瘤发生、发展中作用的最新研究进展进行综述,探讨其调控机制和临床价值。

MEKK1在B6-Co小鼠胚胎发育过程中的表达

为了检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达,探讨其在该突变系小鼠EOB(出生时眼睛睁开)表型形成过程中的作用,试验剖取E16.5和E18.5小鼠,剪取整个头部,用4%多聚甲醛固定脱水,制作冰冻切片,通过免疫荧光技术检测MEKK1在小鼠胚胎眼睑部位的表达;剪取胎鼠皮肤,提取蛋白,以GAPDH为内参,通过Western-blot检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎中的表达情况。结果表明:与B6小鼠相比较,MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达差异不显著;但游离C端在E16.5小鼠的表达明显要高于E18.5的表达,差异显著。说明MEKK1对促进小鼠眼睑融合起到了重要作用。

B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4突变候选基因克隆及测序

目的对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoRE酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由c转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸（P）变成谷氨酰胺（Q）。结论Ddx4基因发生单碱基突变，表明该突变可能与B6－co小鼠的EOB表型相关，但是有待于进一步研究。

GnRH-a反加雌激素对大鼠子宫内膜异位症模型的疗效及复发的研究

目的探讨GnRH-a反加不同剂量雌激素对子宫内膜异位症的治疗效果及对复发的影响。方法将建成子宫内膜异位症模型的51只大鼠分为五组:对照组(n=10),予生理盐水1 mg/kg皮下注射,共1次;研究组:反加组Ⅰ(低剂量雌激素组n=10)、反加组Ⅱ(中剂量雌激素组n=10)、反加组Ⅲ(高剂量雌激素组n=10)、GnRH-a组(n=11)。研究组先予亮丙瑞林1 mg/kg皮下注射,共1次,反加组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别在给药第2周开始予不同剂量的戊酸雌二醇(25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg)灌胃,同时GnRH-a组予生理盐水灌胃,3 mL/只,各研究组每天1次,共14 d。用药后第4周和7周开腹探查,测量内异灶体积,取其内异灶组织,免疫组化法检测内异灶内的TNF-α、StAR的表达,眼眶内眦静脉丛的采血法采血,酶联免疫吸附法检测血清CA125的水平。结果用药前,各组大鼠异位病灶体积比较,差异无显著性(P> 0.05)。第4周,研究组较对照组明显减小,差异有显著性(P<0.05);第7周,反加组Ⅱ、Ⅲ较反加组Ⅰ和GnRH-a组体积增大明显,差异有显著性(P<0.05)。②用药前,各组大鼠异位病灶组织中TNF-α、StAR表达,差异无显著性(P> 0.05)。第4周,研究组内异灶TNF-α、StAR表达较对照组明显降低,差异有显著性(P<0.05);反加组Ⅱ、Ⅲ较反加组Ⅰ和GnRH-a组TNF-α、StAR表达高,差异有显著性(P<0.05)。③用药前,各组大鼠血清CA125水平比较,差异无显著性(P> 0.05)。第4周,研究组血清CA125较对照组降低,差异有显著性(P<0.05)。第7周,反加组Ⅱ、Ⅲ较反加组Ⅰ和GnRH-a组血清CA125水平高,差异有显著性(P<0.05)。结论 GnRH-a反加低剂量雌激素对大鼠内异症模型有较好疗效,反向添加中、高剂量雌激素可能通过诱导TNF-α、StAR而促进大鼠子宫内膜异位症的复发。