综合翻转文献阅读研讨促进分子生物学学习的实践研究

分子生物学是生物医学专业本科生的重要基础课程。为了提高学生的学习兴趣和积极性,武汉科技大学生物化学教研室设计了一项综合翻转文献阅读研讨计划来促进学生主动参与课堂和思考科学问题。在教师的指导下,学生自主选题检索文献并进行课堂汇报,通过总结与讨论形成良好的学习氛围。通过训练学生专注阅读和口头表达的技巧,并在选定的主题领域提出研究概况,教师对学生成绩数据进行分析。结果表明学生成绩明显提高,证明翻转文献阅读研讨计划是一种有效的方式,既能通过以学生为中心提高学生参与度,又有助于提高学生文献检索、阅读、科研、表达以及团队协作等能力。

花生四烯酸显著预防软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗

目的探讨花生四烯酸(AA)对软脂酸(PA)引起HepG2细胞胰岛素抵抗的预防作用及其可能机制。方法培养HepG2细胞,设立对照组(control组)、软脂酸组(PA组)、软脂酸+花生四烯酸组(PA+AA组)、高胰岛素组(HI组)。PA组、PA+AA组、HI组分别用250μM PA、250μM PA加20μM AA,5×10-7M胰岛素孵育24h。然后葡萄糖氧化酶法测定各组胰岛素刺激后12h点葡萄糖消耗量,蒽酮法测定胰岛素刺激后3h点细胞内糖原含量,Western-blotting技术检测15min点胞内P-Ser473PKB、P-Ser21/9GSK-3α/β水平。结果葡萄糖消耗量PA组与HI组比较差异无统计学意义(P=0.594)。葡萄糖消耗量、细胞内糖原含量、P-Ser473PKB、P-Ser21GSK-3α、P-Ser9GSK-3β水平均显示,PA组与control组比较显著降低(P<0.05),PA+AA组与PA组比较显著升高(P<0.05)。结论AA(20μM)能显著预防PA引起的HepG2细胞胰岛素抵抗,能在PKB、GSK-3水平上显著维持250μM软脂酸孵育HepG2细胞的胰岛素信号传递。

花生四烯酸对高脂饮食大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出影响的研究

目的观察花生四烯酸对大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出紊乱的预防作用。方法将230～250g24只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常组(8例),高脂组(8例),高脂+花生四烯酸组即预防组(8例)。饲养12周。饲养至第12周实验终点时进行口服葡萄糖耐受实验。断头处死各组处于空腹状态下的大鼠,取肝脏,蒽酮法测定肝糖原含量,并用RT-PCR法检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)及糖原合酶(GS) mRNA水平。结果高脂组与正常对照组比较,肝糖原含量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数显著升高(P<0.01),但基础状态下体重差异无显著性。预防组和高脂组比较,肝糖原含量(P<0.05)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著降低,但与正常对照组比较,肝糖原含量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著升高。高脂组与正常对照组比较,G-6-Pase mRNA水平显著升高(P<0.01),PEPCK mRNA水平略有升高,但差异无显著性。预防组和高脂组比较,PEPCK mRNA水平(P<0.05)、G-6-Pase mRNA水平显著降低(P<0.01),但3组大鼠GSmRNA差异没有显著性。结论花生四烯酸预防高脂诱导的全身胰岛素抵抗和肝糖输出紊乱作用明显,但不彻底。相关的PEPCK、G-6-Pase mRNA水平显著降低,但GS mRNA水平没有显著性差异。

HPV相关肿瘤疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)是一种小DNA病毒,多种恶性肿瘤的发生与HPV感染有关,尤其是宫颈癌。目前通过分子生物学方法获得的HPV疫苗依其作用效果可分为三大类:以体液免疫为主的预防性疫苗、以细胞免疫为主的治疗性疫苗及兼具体液免疫和细胞免疫的预防性兼治疗性疫苗。

蛋白激酶C在软脂酸诱导HepG_2细胞胰岛素抵抗中的作用

目的从蛋白激酶C(PKC)信号通路角度,探讨游离脂肪酸(FFA)引起肝脏胰岛素抵抗(IR)的可能机制。方法培养HepG2细胞,同时设立对照组、软脂酸(PA)组、高胰岛素组。软脂酸组、高胰岛素组分别用250μmol/L PA、5×10-7mol/L胰岛素处理24h。然后对照组、软脂酸组再根据胰岛素刺激前加(+)与不加(-)PKC抑制剂白屈菜红碱盐酸盐(chelerythrine chloride,CC)5μmol/L预处理1h,随机分为两亚组:对照组(-)、对照组(+)、PA组(-)、PA组(+)。葡萄糖氧化酶法测定胰岛素刺激后12h葡萄糖消耗量,蒽酮法测定胰岛素刺激后3h点细胞内糖原含量,Western blotting技术检测15min点细胞内P-Ser473PKB、P-Ser21/9GSK-3α/β水平。结果PA组(-)与高胰岛素组葡萄糖消耗量无统计学差异(P=0.523)。葡萄糖消耗量、细胞内糖原含量、P-Ser473PKB、P-Ser21GSK-3α、P-Ser9GSK-3β水平均显示,PA组(-)与对照组(-)比较显著降低(P值依次为0.000,0.000,0.004,0.004,0.028),对照组(+)与对照组(-)比较略有升高但无显著性差异;PA组(+)与PA组(-)比较显著升高(P值依次为0.000,0.014,0.043,0.041,0.035)。结论PA(250μmol/L)体外成功诱导了HepG2细胞产生IR,PKC信号通路在FFA引起肝脏IR中起着重要作用。

一种高效转导蛋白质入哺乳细胞的方法——HIV TAT介导法

HIVTAT介导蛋白质入哺乳细胞的方法1988年就有文献报道,但近年才日趋成熟,且广泛应用于分子生物学研究。传统的调控哺乳细胞的途径有转导目的蛋白的表达型载体、微注射目的蛋白等。与之相比,TAT介导法有操作简单、迅速、应用广泛、可控性强等优点。

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的:研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分为对照组和40μmol/L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对VEGF-C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果:槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达。

湖北株HPV_(16)E_7基因疫苗的构建及免疫性研究

用 Eco R 和 Hind 双酶切 PWR5 90 -1,所得湖北株 HPV1 6 E7片段克隆入真核表达载体 pcd3.1- ,构建了湖北株HPV1 6 E7基因疫苗 ,皮下注射 BALB/c近交系小鼠 ,体外应用酶联免疫吸附实验 ( Elisa)法和 MTT法分别检测了湖北株 HPV1 6 E7基因疫苗在体内产生特异性体液免疫和细胞免疫的能力。

槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC803细胞增殖的影响及其细胞毒活性。应用TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)染色法检测槲皮素诱导MGC803细胞凋亡的作用。用免疫组化法测定P16、P53和Cmyc的表达率。结果:在40～100μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,槲皮素诱导48h后,MGC803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化检测表明,用药组P53及Cmyc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及Cmyc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞生长及凋亡作用的研究

目的：研究槲皮素对人胃癌MGC803细胞增殖的影响及诱导凋亡作用。方法：用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度槲皮素对MGC-803细胞的增殖活性的效应；原位末端核苷标记（TUNEL）法检测槲皮素诱导细胞凋亡的凋亡指数（AI）。结果：槲皮素浓度为40～100μmol／L时对MGC803细胞增殖有显著的抑制效应，且呈剂量依赖性；细胞加入槲皮素诱导48h后AI明显高于未加入组（P〈0．05）。结论：槲皮素在一定浓度范围内能显著抑制MGC-803细胞的增殖并能诱导其凋亡．其作用呈浓度依赖性。

人脑胶质瘤金属硫蛋白表达及其意义

目的 为研究金属硫蛋白(MT)在人脑各级胶质瘤中表达及生物学意义。方法 利用免疫组化方法检测46例胶质瘤手术标本中金属硫蛋白及Ki-67的表达水平,比较MT的表达与胶质瘤级别、患者预后的关系及其与Ki-67相关性。结果 随着胶质瘤级别的增高,MT和Ki-67的表达率逐渐升高。MT在脑胶质瘤中的表达率分别为Ⅰ级33.3％,Ⅱ级42.9％,Ⅲ级66.7％,Ⅳ级81.8％,低恶性度组(Ⅰ～Ⅱ)与高恶性度组(Ⅲ～Ⅳ)胶质瘤中MT的表达有显著性差异(P<0.05)。胶质瘤中的MT LI与Ki-67 LI呈正相关性(r=0.832.)。结论 MT在胶质瘤的生长中扮演重要角色,其在胶质瘤中的不同表达对判断胶质瘤的病理分级、患者预后及显示胶质瘤的恶性演进具有一定的意义。

川芎嗪对烫伤大鼠消化系统的保护作用

观察烫伤大鼠胃、小肠、肝组织ATP酶(ATPase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)、丙二醛(MDA)的变化及川芎嗪的防治效果。以健康Wistar大鼠作为模型,分别取胃、小肠、肝组织测定观察值。结果发现,川芎嗪可提高烫伤大鼠胃、小肠和肝组织中ATPase和GSH Px的活性,降低组织中MDA的含量。这说明,川芎嗪可对烫伤后大鼠的胃、小肠、肝组织起到一定的保护作用,其机制可能与减少自由基的产生及直接抗氧化作用有关。

人脑胶质瘤U251细胞中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的观察人脑胶质瘤U251细胞系中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态及其在肿瘤发生中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法对人脑胶质瘤U251细胞系的hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛甲基化进行检测;培养人脑胶质瘤U251细胞系,MSP法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2基因在人脑胶质瘤U251细胞中的甲基化状态改变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2在人脑胶质瘤U251细胞中的mRNA表达改变。结果人脑胶质瘤U251细胞中未发生hMLH1启动子甲基化,而发生了hMSH2启动子甲基化;5-aza-2’-deoxycytidine处理细胞株后,可逆转hMSH2启动子甲基化,细胞株的mRNA表达增加,加药前后的平均灰度比值分别为(0.40±0.18;0.85±0.32,P<0.01),差异有统计学意义。结论人脑胶质瘤U251细胞系中hMSH2基因启动子CpG岛高甲基化,5- aza-2’-deoxycytidine能完全逆转hMSH2基因高甲基化状态,可为临床诊断人脑胶质瘤提供新的检测指标和治疗靶点。