体外细胞培养支原体的检测与清除

目的检测及清除细胞培养中支原体的污染。方法应用DNA荧光法及两步PCR法检测支原体,采用BM-Cycline与裸鼠皮下过继联合法去除支原体;结果DNA荧光法、两步PCR法支原体检测率分别为25.0%,40.0%;BM-cycline与裸鼠过继法对支原体的清除率为100.0%;结论上述方法能有效检测和清除细胞培养中支原体的污染。

黑色素瘤细胞系HME1的建立及其生物学特性分析

目的 :建立一株黑色素瘤细胞系 ,并分析其体外生物学特性。方法 :取黑色素瘤活检组织进行组织块法原代培养 ,待长满 90 %后 ,消化传代培养并进行生长动力学、形态学及致瘤性等生物学特性鉴定。结果 :该细胞系已在体外培养生存 1 8个多月 ,传 90余代。其生物学特性如下 :该细胞系接种至裸鼠后可致瘤 ,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似 ;检测第 2 0代细胞生长曲线 ,其倍增时间为 5 6 .9h ;第 2 0代细胞软琼脂集落形成率平均为 1 9.1 % ;染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 92条 ;透射电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛、核糖体及黑色素颗粒 ;SP免疫组化分析显示 ,细胞有HMB 4 5表达。结论 :该黑色素瘤细胞经体外培养后已永生化 ,形成了连续传代细胞系 。

人卵巢癌细胞与自体或同种异体树突状细胞融合诱导抗肿瘤免疫(英文)

目的 探讨人卵巢癌 (OVCA)细胞与自体或同种异体树突状细胞 (DC)融合后体外诱导特异性CTL的作用。方法 用PEG法将OVCA细胞与自体或异体DC融合 ,在含GM -CSF的RPNH - 16 4 0完全培养基中继续培养 7～ 14d ,然后将融合细胞与CA - 12 5特异性T细胞共同培养 ,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL活性。结果 人类OVCA细胞表达CA - 12 5、HER2A/neu、MUC1肿瘤相关抗原及MHC -Ⅰ类分子和粘附分子 (ICAM ) ,但不表达MHC -Ⅱ类分子、B7- 1和B7- 2 ;DC则表达MHC -Ⅰ类和Ⅱ类分子、共刺激分子和ICAM ,但不表达DF3/MUC1或CA - 12 5等OVCA相关抗原 ,而OVCA细胞与自体或异体DC融合细胞则表达CA - 12 5及MUC1肿瘤相关抗原、MHC -Ⅰ类和Ⅱ类分子、B7- 1、B7- 2及ICAM。结论 人OVCA与自体或异体DC融合细胞能诱导由MHC -Ⅰ类分子限制的CTL活性和自体肿瘤细胞的溶解作用。

宫颈癌细胞系HCE_(1)的建立及其生物学特性

从 5例手术切除宫颈癌标本中取材进行体外培养 ,并建成一个新的连续细胞系 ,命名为湖南宫颈癌上皮细胞系 1号 (HCE1)。该细胞已在体外生存 18个多月 ,传 80多代。其生物学特性显示 :①该细胞系接种至裸鼠后可致瘤 ,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似 ;②电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛及核糖体 ;③检测第 2 5代细胞生长曲线 ,其倍增时间为 45 8h ;④计数 6个平皿软琼脂集落形成率平均值为 14 8% ;⑤染色体核型分析为非整倍体 ,众数为

一株新的卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性分析

目的 从人卵巢癌组织建立一株卵巢癌细胞系 ,为卵巢癌发病机制研究和治疗药物筛选提供可靠的材料。 方法 取手术切除的卵巢癌组织 ,进行组织块培养法 ,待长满 90 %汇合面后消化传代培养 ,并进行形态学、生长动力学及致瘤性等生物学特性分析。 结果 该卵巢癌细胞系已在体外培养生存 1年以上 ,传 80余代 ,命名为湖南卵巢癌细胞系 1号 (HOC1) ,其生物学特性显示 :这些细胞系体外生长的倍增时间为 47.2h ;软琼脂集落形成率为 18.5 % ;接种至裸鼠后具 10 0 %致瘤性 ;染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 74～ 92条 ;透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面含有丰富的微绒毛 ,胞浆内含有丰富的核糖体。 结论 该卵巢癌细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系 ,并具有明显的恶性表型特征。

鼻咽癌HNE1细胞与CNE1细胞的蛋白质表达谱的初步研究

目的 探讨鼻咽癌发生、发展过程中蛋白质的动态变化 ,为寻找鼻咽癌的分子标志物打下基础。 方法 采用双向电泳结合质谱技术研究低分化鳞癌细胞系HNE1与高分化鳞癌细胞系CNE1的蛋白质表达谱的差异。 结果 初步鉴定出 8个在HNE1细胞中表达上调的蛋白点包括 14kDabeta -galactoside -bindinglectin ,fourandahalfLIMdo mains 2 ,regulatorofG -proteinsignalling 2 0 ,Similartohypothetcalprotein ,RAB9,unnamedproteinproduct ,SREC -4。 结论 HNE1与CNE1细胞蛋白质表达谱有差异 ,该研究有助于进一步阐明鼻咽癌发生、发展的病理机制。

以树突状细胞为基础的肿瘤疫苗研究进展

树突状细胞 (DC)是具有最强抗原提呈能力的专职性抗原提呈细胞。近年来 ,以DC为基础的肿瘤疫苗研究已成为肿瘤免疫治疗的热点之一。综述DC的功能研究、各种DC肿瘤疫苗的制备和研究策略 ,以及在体内外抗肿瘤排斥反应中的作用与临床应用前景。

723例健康体检者生殖道沙眼衣原体感染的调查

目的 了解沙眼衣原体在人群中的感染情况 ,为临床防治沙眼衣原体提供依据。 方法 询问受检者生殖道感染症状并采集生殖道粘膜标本进行沙眼衣原体检测。 结果 在 72 3例受检者中 ,沙眼衣原体阳性率为 5 .4% ,男女之间无明显差异。在沙眼衣原体阳性受检者中 ,有自觉症状者占 66.7% ,无症状者为 3 3 .3 %。 结论 人群中生殖道沙眼衣原体感染率较高 ;大部分沙眼衣原体感染者可出现生殖道感染症状 ,但相当一部分人不出现感染症状 ;沙眼衣原体阳性者以青壮年居多。

对高校中分析测试中心的几点观感

分析测试中心作为高校建设的重要一分子，在当今学校兼并、学科强强联合的情况下显得尤为重要．本文在剖析其现状的基础上，试图探讨其发展的建设模式，为高校分析测试中心建设提供参考。

人二倍体细胞株HLF-02的建立及其生物学特性

目的 :建立HLF 0 2细胞株 ,为老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等研究提供新的实验材料。方法 :人二倍体细胞株HLF 0 2取于肺组织 ,用胰蛋白酶消化肺组织 ,可获 90 %以上具有正常代谢活性的肺细胞 ,对存活的肺成纤维细胞进行形态学观察、生长特性检查、核型分析、电镜观察和异种移植等。结果 :建成的HLF 0 2细胞株其形态表现、电镜观察、核型分析和异种移植等均符合二倍体细胞特征。经过 10个月的体外培养 ,共传 5 0代 ,细胞倍增时间 75 .5h ,染色体始终保持二倍体特性 ,异种移植成瘤试验阴性 ,无支原体污染。结论 :HLF 0 2是一株人二倍体细胞株 ,可用于对细胞老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等方面的研究。

益气解毒颗粒对大鼠鼻咽癌变中端粒酶和端粒酶RNA表达的影响

目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒防治鼻咽癌的作用机制。方法 :用二亚硝基哌嗪 (DNP)诱导大鼠鼻咽癌动物模型 ,观察益气解毒颗粒对大鼠鼻咽癌变中病理形态改变以及端粒酶和端粒酶RNA表达的影响。定期分批处死大鼠 ,取鼻咽组织作病理学检测 ,用PCR -ELISA和NestedRT -PCR法检测大鼠鼻咽组织端粒酶的活性和端粒酶RNA的表达。结果 :灌服益气解毒颗粒大鼠鼻咽癌发癌率 0 (0 /5 ) ,明显低于盐水对照组 80 % (4/5 ) (包括原位癌和浸润癌 ) ;其端粒酶活性为 0 2 4± 0 11,也明显低于对照组 0 93± 0 2 3(P <0 .0 5 ) ;维甲酸组发病率为 0 (0 /5 ) ,端粒酶活性为 0 2 7± 0 13;各组端粒酶RNA均为阳性。维甲酸组大鼠于 2 15～ 30 8d间逐步死亡。结论 :益气解毒颗粒能阻断DNP诱导大鼠鼻咽癌变 。

Epstein-Barr病毒潜伏蛋白1通过核转录因子κB诱导鼻咽上皮细胞表达端粒酶活性

利用已建立的原代人胚鼻咽上皮细胞和Tet on LMP1系统等良好的实验模型 ,采用荧光酶报道基因分析法和端粒酶TRAP ELISA技术 ,分别检测EB病毒潜伏蛋白 1(LMP1)诱导的核转录因子κB (NFκB)活性和端粒酶活性 ,从LMP1介导NFκB信号传导途径角度 ,探讨LMP1诱导端粒酶表达的分子机制 .结果表明 ,LMP1可诱导鼻咽上皮细胞表达端粒酶活性 ,将LMP1羧基端胞浆区突变后 ,可同时下调NFκB活性和端粒酶活性 .在Doxycycline诱导LMP1表达状态下 ,NFκB反式激活活性增强 ,同时端粒酶活性升高 ;进一步应用硫代磷酸化修饰的反义NFκBp6 5寡脱氧核苷酸和IκBα的显性负性突变体分别阻断NFκB活性 ,可降低由LMP1诱导的端粒酶活性 .因此 ,NFκB作为LMP1信号传导途径上的枢纽 ,可能介导了LMP1对端粒酶的表达调控 .

鼻咽癌相关基因BRD7对鼻咽癌细胞CNE1的影响

为了研究BRD7基因对鼻咽癌细胞CNE1的影响,通过脂质体转染方法,将BRD7基因导入NPC细胞株CNE1细胞中.通过细胞生长曲线发现该基因能够抑制CNE1细胞的生长.为了探讨可能的作用机制,进而采用蛋白质组技术研究该基因对鼻咽癌蛋白质表达谱的影响,从而研究该基因在CNE1中的地位和作用.通过对过表达BRD7基因后鼻咽癌细胞系CNE1的蛋白质表达谱改变的研究,鉴定出19个差异表达蛋白,这些蛋白质包括:BCCIP(BRCA2andCDKN1A(p21(Waf1/Cip1)),FHL2(fourandahalfLIMdomains2),Chloridechannelregulatoryprotein;Hin-1(high-in-normal-1),WISP-1(connectivetissuegrowthfactorrelatedprotein),SREC-4(scav-engerreceptorexpressedbyendothelialcells-2),folatereceptor.这些差异蛋白涉及到基因表达调控、细胞黏附等众多的事件.从另一个侧面研究了BRD7基因与鼻咽癌的关系,扩展了BRD7基因的研究范围,并进一步充实了该基因做为鼻咽癌候选抑瘤基因的证据.

益气解毒颗粒对鼻咽癌裸鼠移植瘤基因表达的影响

目的 探讨中药复方益气解毒颗粒抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。 方法 将鼻咽癌细胞系HNE1接种至BABL/c裸小鼠 ,待移植瘤生长至一定大小 (约 1cm× 1cm× 1cm) ,灌喂益气解毒颗粒药液 (按人口服药量换算鼠的给药量 ) ,一个疗程 ( 3 0d)后处死裸鼠 ,解剖获取肿瘤组织 ,测量瘤体体积大小 ,称量瘤体重量。取 10 0mg瘤体组织 ,提取总RNA后逆转录标记成cDNA探针 ,与 5 88个基因的AtlasTMHumanCancercDNAArray杂交 ,灰度扫描杂交信号及统计分析差异。 结果 益气解毒颗粒药液能明显抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长 ,灌喂中药组瘤体积和重量分别为 ( 0 .2 0 7± 0 .0 2 3 )cm3 和 ( 0 .13 2± 0 .0 2 1)g ,对照组为 ( 1.3 42± 0 .2 98)cm3 和 ( 1.0 17± 0 .0 15 )g(P <0 .0 5 ) ,抑制率为 84.5 8%。HumanCancercDNAArray分析发现 ,益气解毒颗粒组有STK1、MAPK1、CDK1等 19个与细胞增殖、细胞周期、核转录因子、DNA修复相关基因表达下调。有Caspase、TNFR -1、FADD等与细胞凋亡、角化蛋白死亡受体相关基因表达上调 ,部分基因表达与未用药组组织基因表达无明显差异。 结论 益气解毒颗粒抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的形成 ,可能是通过抑制细胞内重要的核转录因子、细胞分裂增殖、细胞周期、DNA修复和?

人DC与黑色素瘤细胞融合疫苗体外诱导特异性抗肿瘤CTL

目的:探讨HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+的树突状细胞(DC)融合后体外诱导Me-lan-A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用及交叉抗原递呈的能力。方法:用PEG法将黑色素瘤细胞与DC融合,在含GM-CSF的RPMI1640完全培养基条件下继续培养24～48h,然后将融合细胞与Me-lan-A特异性T细胞共同培养,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL的活性,流式细胞术分析T细胞的活化率。结果:从异体外周血分离的单核细胞在GM-CSF及IL-4条件下培养6d后,未成熟的DC能表达一定的CD80,CD83,CD86,HLA-DR和HLA-ABC等共刺激分子,而经TNF-浕,PGE-2及CD40L诱导成熟的DC,则这些分子的表达进一步上调。融合细胞体外活化Melan-A特异性T细胞的效率为16.72%±4.26%,阴性对照为0.21%±1.84%,阳性对照为28.60%±5.67%。融合细胞活化的CTL能有效地溶解HLA-A2的黑色素瘤细胞。结论:HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+阳性的DC融合肿瘤疫苗,能在体外有效地交叉递呈MHC-I限制性肿瘤抗原,并诱导Melan-A特异性的CTL和有效地杀伤黑色素肿瘤细胞。

8株人黑色素瘤细胞系的建立及其生物学特性研究

目的 :从人黑色素瘤组织建立一系列黑色素瘤细胞系 ,命名为黑色素瘤细胞系 1- 8号 (HME1- 8) ,并研究鉴定其体外细胞生物学与免疫学特性。方法 :取黑色素瘤组织进行组织块培养法 ,待长满 90 %汇合面后消化传代培养 ,并进行形态学、生长动力学、免疫学及致瘤性等生物学特性研究。结果 :该系列黑色素瘤细胞系已在体外培养生存 1- 2年 ,传 6 0 - 10 0余代 ,其生物学特性显示 :①这些细胞系体外生长的倍增时间为 34. 2 - 5 9. 5h ;②软琼脂集落形成率平均值在 8. 6 % - 2 6 . 2 %之间 ;③接种至裸鼠后具有较高的致瘤性 ;④染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 6 4 - 117条 ;⑤透射电镜下可观察到细胞含丰富的核糖体及黑色素颗粒 ;⑥免疫组化分析显示细胞浆内含大量阳性棕色黑色素颗粒 ;⑦肿瘤抗原检测显示 8株黑色素瘤细胞系的Melan -A抗原阳性率为 75 % ,MAGE - 1阳性率为5 0 % ,MAGE - 2阳性率为 37 .5 % ,MAGE - 3阳性率为 6 2 .5 %。结论 :8株黑色素瘤细胞系经体外长期培养后已永生化 ,形成了连续传代细胞系 ,具有明显的黑色素瘤细胞恶性表型特征。

小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用

目的通过分析小檗碱处理后的Raji细胞中EB病毒DNA的变化,探讨小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用。方法运用四甲基偶氮唑蓝法确定小檗碱对Raji细胞生长的细胞无毒性浓度,然后采用巢式荧光定量PCR方法检测该浓度处理后的Raji细胞EB病毒DNA含量,分析小檗碱对EB病毒DNA复制的影响。结果小檗碱对Raji细胞的细胞无毒性浓度(NCC)为0～10μmol/L.不同浓度(1.25、10和40μmol/L)的小檗碱处理后的Raji细胞EB病毒DNA拷贝数与未加药组相比显著降低(P<0.05),呈药物浓度依赖性。结论小檗碱在细胞无毒性浓度下,可抑制Raji细胞中EB病毒DNA的复制,为使用小檗碱或含小檗碱的中药复方防治EB病毒相关肿瘤提供了新的实验依据。

益气解毒片对鼻咽癌细胞裸鼠植瘤细胞端粒酶抑制作用的实验研究

为了观察益气解毒片在体内对鼻咽癌细胞生长和端粒酶活性的影响。移植鼻咽癌细胞(HNE_1)于BALB/C裸鼠皮下,制备鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,肿瘤生长为(1.89±0.37cm^3)。用益气解毒片药液灌胃荷瘤裸鼠30d,测量肿瘤体积和瘤重,同时取瘤组织,用ELISA-PCR法检测瘤组织端粒酶的活性。结果:益气解毒片药液能抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长和端粒酶的活性,抑瘤率为82.2±7.56％,用药后瘤组织端粒酶活性受到抑制(A_(450):0.37±0.10),均为阴性。与环磷酰胺对照(抑瘤率:83.25±8.97％,A_(450);0.41±0.09)无明显差异。瘤体积和端粒酶的活性(1.66±0.47cm^3,0.37±0.10),明显小于蒸馏水对照组(1O.21±0.67cm^3,A_(450):1.69±O.21)。益气解毒片抗鼻咽癌作用可能与其抑制鼻咽癌细胞端粒酶的活性有关。

HPLC法测定肝炎灵注射液中苦参碱的含量

目的 建立肝炎灵注射液中苦参碱含量的HPLC测定方法。方法 采用μBondapak^(TM)NH_2柱(4.6 mm×300mm,5μm),甲醇-水(15:85)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长219 nm,柱温为30℃,进样量20μL。结果 在1.0 μg～500.0μg·mL^(-1)范围内苦参碱浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.3～100.9％,RSD<2％。结论 该方法简单,快速,重复性好。