乡村振兴背景下西藏动物医学专业教育模式改革探索

[目的]为了推进动物医学专业改革,培养适应乡村振兴战略的应用型高级人才。[方法]分析本校动物医学专业教育存在的问题,寻找制约学生未来投身乡村振兴的症结,探索培养提升学生动手实践、理论联系西藏实际能力的方法。[结果]通过教育模式改革,增加了学生实践学时;降低了学生对实验动物的排斥心理;解决了学生实践机会较少的问题;使教学能够理论联系实践;解决了分散实习下教师不足的问题;部分弥补了试验动物较少的遗憾;打通了动物医学人才培养与乡村振兴的通道。[结论]通过多种手段的教学改革,能使动物医学专业的学生动手实践能力得到提升,能让学生发挥兽医专业技能、更好地服务于西藏乡村振兴。

山羊子宫内膜基质细胞的分离培养及鉴定

对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基质细胞效果较好,所得细胞在培养后0．5 h开始贴壁,培养12 h后,可见梭形和多角形2种形态的细胞,3～4 d呈网状铺满皿底,有明显的重叠生长现象;免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95％以上,不表达角蛋白。说明采用本文所述的消化和分离方法可获得高纯度的子宫内膜基质细胞。

山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL转化及分泌活性的影响

【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA组合刺激PBMC与PBL转化,应用MTT法检测ESC0及ESC30培养上清对PBMC和PBL转化的作用,ELISA检测PBMC和PBL分泌IL-2I、L-4的相对含量。【结果】ESC0及ESC30上清可刺激PBMC/PBL转化并分泌IL-2和IL-4,抑制PHA-P诱导的PBMC/PBL增殖及IL-2的分泌,但对PHA-P引起的PBMC/PBL分泌IL-4有促进或协同作用。【结论】ESC能通过旁分泌作用影响PBMC和PBL的转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。

大肠埃希菌O_(111)黏附牦牛子宫内膜上皮细胞致炎模型的建立

为建立大肠埃希菌O_(111)黏附牦牛子宫内膜上皮细胞的致炎模型,体外分离、培养牦牛子宫内膜上皮细胞,培养5d后,加入大肠埃希菌O_(111),通过计算细胞上细菌的黏附数量研究细菌数量和孵育时间对黏附效果的影响,得到最佳黏附条件,通过ELISA法测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL^(-1)β)的质量浓度变化来鉴定模型。结果表明,大肠埃希菌为1×10~5 CFU/mL、孵育时间为120min是黏附的最佳条件。ELISA法检测结果表明,与对照组相比,60、90、120min组TNF-α、IL-6、IL^(-1)β的质量浓度显著升高,致炎效果明显,表明致炎模型建立成功。

高纯度牦牛子宫内膜基质细胞的分离培养及其鉴定

为获得高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞,对牦牛子宫内膜使用胶原酶消化,分离基质细胞进行体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果,牦牛子宫内膜在37℃条件下,以2g/L的胶原酶Ⅱ消化2.5h,更换新鲜消化液继续消化2.5h,消化效果好;用74μm滤网过滤,再经400r/min离心和自然沉降去除上皮细胞,可分离得到大量的单个细胞,所得细胞贴壁后可见梭形和多角形2种形态,免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95%以上,不表达角蛋白。结果证明已成功分离到高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞。

牦牛子宫内膜腺上皮细胞分离培养方法比较

[目的]建立牦牛子宫内膜腺上皮细胞体外分离培养方法。[方法]分别采用组织块培养法和消化培养法分离、纯化牦牛子宫内膜腺上皮细胞。[结果]组织块培养约8 d细胞可汇合成片,经胰蛋白酶分次消化,可得到纯化的子宫内膜上皮细胞;使用2 g/L的胶原酶Ⅱ消化2.5 h,更换新鲜消化液继续消化2.5 h,消化悬液经74μm滤网过滤,400 r/min离心5 min,收集沉淀,重悬后自然沉降,可得到纯净的腺细胞团。免疫细胞化学显示所得细胞角蛋白染色阳性,阳性率达到95%以上。[结论]2种方法均可得到纯净的牦牛子宫内膜上皮细胞。

家畜病理学实践教学改革探索

《家畜病理学》是动物医学专业的一门实践性很强的学科。通过实验内容改革、病例的应用、实习报告改革、实验考核方式改革、实习方式改革等办法,大大提高了学生的兴趣和实验效率,加强锻炼了学生基本实验技能和理论联系实际的能力。

一例藏鸡传染性喉气管炎混合感染新城疫的诊治

2010年11月,西藏自治区米林县羌纳乡某藏鸡养殖户共800多羽藏鸡,4月龄开始发病死亡。根据临床症状、剖检病变、实验室检查情况,确诊为鸡传染性喉气管炎混合感染新城疫,经采取一定的防治措施,疫情得到了有效控制。

藏族学生家畜病理学教学探索

家畜病理学是动物医学基础学科和临床学科之间的桥梁课程,是一门重要而又较难的学科,为教好西藏学生的这门课程,我们从教师自身方面、学生方面、教学手段、考核方式等方面进行了探索。通过这几方面的改进,激发了学生的学习兴趣、提高了教学效果。

山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定

为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定，通过2g／L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h，200目的滤网过滤后进行低速离心，收集沉淀物，沉降洗涤3～5次，将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长，腺团开始向外部扩散，生长2～3d，细胞扩散并出现明显的铺路石状，4～5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色，细胞表达角蛋白的阳性率达90％以上。

合成法氏囊素和LCGF与卵黄抗体对鸡IBD的治疗作用

应用溶血空斑试验和溶血分光光度测定法分析了合成法氏囊素 ( BS)及其结构类似物—肝细胞生长因子 ( L CGF)对机体抗体形成细胞的影响 ,并进一步研究了二者对IBD的治疗作用。结果证明 ,合成 BS和L CGF均能显著提高小鼠抗体形成细胞的增殖 ,促进小鼠抗 SRBC抗体分泌 ( P <0 .0 1 )。治疗试验表明 ,合成 BS和 LCGF或卵黄抗体单独应用 ,均可显著提高 IBD发病鸡群的成活率 ( P <0 .0 1 )。BS,LCGF单独应用或与卵黄抗体结合的治疗效果均显著高于试验剂量的卵黄抗体 ( P <0 .0 1 ) ,高剂量的 BS能促进病鸡法氏囊损伤的修复。

LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素(LH)作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1 500。该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素(FSH)阳性血清呈现阴性反应。结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测。

一起藏猪猪瘟和猪气喘病混合感染的诊治

2010年5月,西藏自治区林芝县百巴镇强嘎村某藏猪养殖场陆续从附近村庄收购6～8kg的藏猪200头,到6月份陆续死亡80余头。根据临床症状、剖检病变、实验室检查情况,确诊为猪瘟和猪气喘病混合感染,经采取一定的防治措施,疫情得到了有效控制。

藏猪耳部成纤维细胞的分离与培养

用组织块法分离培养藏猪耳部成纤维细胞,并进行体外传代和冷冻,冷冻复苏后的藏猪耳部成纤维细胞仍可以正常培养和传代,冻存前后活率都在90%以上;其生长曲线呈典型的"S"型,细胞接种后,在经历0~2 d的潜伏期后,第3 d细胞开始迅速生长,进入对数生长期,到第10 d细胞开始发生接触抑制,生长缓慢进入平台期。研究结果表明,已成功分离培养到藏猪的耳部成纤维细胞,这将为藏猪的体细胞克隆和保种等方面的研究奠定基础。

藏猪颗粒细胞的体外培养研究

为建立藏猪颗粒细胞的体外培养和保存方法,从藏猪卵巢上采集卵泡的颗粒细胞,进行分离培养和冷冻复苏。结果显示:藏猪颗粒细胞形成单层需要6～7d;细胞冷冻复苏后仍可进行正常生长,冻存前后活率都在90%以上;细胞生长曲线呈"S"型,接种后,经历2d的潜伏期,第3天细胞开始迅速生长,进入对数生长期,到第8天细胞开始发生接触抑制,进入生长缓慢的平台期。表明建立的藏猪颗粒细胞的体外培养和保存方法可行有效。

Undifilum oxytropis次级代谢产物GC-MS分析及抗肿瘤活性研究

研究疯草内生真菌(Undifilum oxytropis),次级代谢产物成分与活性,通过GC-MS对菌丝体及发酵液进行了分析,并通过MTT法测定抗肿瘤活性。结果表明,菌丝体和发酵液中均以烷烃和酯类物质为主,菌丝体中检出活性物质角鲨烯(0.863%);菌丝体对HCT-8人回盲肠癌细胞和OS-RC-2人肾癌细胞抑制率均较高,发酵液对HCT-8人回盲肠癌细胞抑制率相对较弱。

孕早期山羊胎儿IL-4水平与PBMC增殖活性的关系

探讨了妊娠早期山羊胎儿IL-4水平与外周血单核细胞（PBMC）增殖活性的关系。用MTT法，检测孕早期山羊胎儿匀浆上清液（FHS）在不同浓度下对PBMC转化增殖活性的影响，设立孕130d胎儿血清（FS）及FHS＋PHA-P对照组；检测蛋白质浓度在1×10^-4mg／mL时IL-4的含苗，并与转化后的含量进行比较。结果：妊娠早期，FHS对PBMC转化活性的影响随着妊娠的发展而逐渐降低，但均低于妊娠后期对照组。FHS蛋白质浓度在1×10^-4～1×10^-5mg／mL时，对PBMC的转化增殖效果均较好（P〈0．05），且与PHA—P具有协同作用；妊娠早期FHS的IL-4水平随着妊娠的发展呈现上升的趋势，且均高于FS对照组，FHS的IL-4水平与转化后无显著差异（P〉0．05）。妊娠早期FHS IL-4水平的上升与PBMC转化活性下降之间呈负相关关系，正常妊娠早期主要是Th2型细胞因子在起作用，因此可以说明，PBMC转化活性的下降可能是IL-4发挥免疫抑制作用的结果，进而说明，妊娠早期胎儿可能通过自身分泌一些Th2型细胞因子，在母体子宫局部免疫中发挥免疫抑制作用，使其自身不被母体排斥，使妊娠能够顺利进行。

兽医外科手术学实验模型教学改革的初步研究

兽医教学的最终目的是提高学生毕业后的服务能力。本文以兽医外科手术学实验教学为例,通过分析目前的实验教学手段,以及当地学生实验课程中实际学习情况,引入实验模型教学的手段,以期改进实验教学方式,从提高学生的动手实践能力。

浅析西藏学生特点与兽医临床诊断学教学

受语言环境影响,藏族学生形成自我独特的学习方式,因此在教学中要因人而异。本文以兽医临床诊断学教学为例,分析如何针对藏族学生特点,做好兽医临床课程教学。

E_2、P_4、OT和PGF_(2α)对猪PBMC活性的影响

应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:PGF2α、OT、E2、P4。在试验剂量范围内,E20.1 pg/mL、P41 ng/mL、OT 10 pg/mL、PGF2α100 ng/mL时,其共同作用对PBMC转化活性最强。提示在不同生理时期,由于机体内各种激素浓度变化不同,免疫系统也发生相应的变化。