SMAD3介导TGF-β1抑制MMP9在COS7细胞中的表达

用明胶酶谱的方法检查了野生型和Smad3ex8 ex8纯合突变小鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP9)的活性 .发现突变小鼠血清中MMP9的含量较正常小鼠的明显增高 ,提示SMAD3有抑制MMP9表达的功能 .通过细胞转染实验证实 ,TGF β1和野生型的SMAD3可以抑制COS7细胞分泌MMP9,而C端缺失的突变型Smad3基因过表达可以解除这种抑制作用 ,说明SMAD3介导TGF β1信号抑制MMP9在COS7细胞中的表达 .

SMAD3介导TGF-β1刺激软骨细胞增殖和抑制软骨细胞肥大性分化(英文)

为研究TGF β1 SMAD3信号对小鼠软骨细胞增殖和分化的影响 ,分离了野生型与Smad3基因剔除 (Smad3ex8 ex8)突变纯合子小鼠肋骨软骨细胞并进行了体外培养 .通过3 H TdR参入实验检测了体外培养软骨细胞的增殖能力 .TGF β1可以刺激野生型软骨细胞的增殖 ,Smad3基因缺失导致小鼠软骨细胞丧失对TGF β1刺激生长作用的应答 .Northern杂交显示 ,TGF β1促进野生型小鼠软骨细胞表达Ⅱ型胶原 ,而Smad3基因缺失突变纯合子软骨细胞大量表达肥大性软骨细胞的分子标记物X型胶原 .结果表明 ,SMAD3介导转化生长因子TGF

TGF-β1对体外培养的关节软骨细胞的作用

以原代培养的软骨细胞为材料,研究了转化生长因子TGF-β1对关节软骨细胞的增殖和软骨特异性基质代谢的调节作用,结果显示TGF-β1可以刺激细胞外基质中蛋白多糖含量的增加,并可以在转录水平上调节II型胶原的表达。TGF-β1可以在体外诱导高密度培养的软骨细胞形成透明软骨样结构。没有用TGF-β1处理的高密度培养细胞不能形成透明软骨样结构,在透射电镜下观察发现其内部结构发生了异常变化。这些结果表明TGF-β1对于支持关节软骨细胞的体外培养具有重要的作用。

TGF-β在骨关节炎发生中的可能作用

转化生长因子TGF - β具有广泛的生理效应 ,对于维持关节软骨正常有重要意义。软骨细胞外基质降解和关节软骨损坏是骨关节炎的重要特征 ,研究表明TGF - β一方面通过调节细胞外基质成分含量维持基质的正常更新 ,另一方面通过调节关节软骨细胞的形成、增殖和分化来保持正常数量和正常生理状态的软骨细胞。本文就这两个方面综述了最新研究进展 ,以探讨TGF - β在骨关节炎发生中的可能调节机制。

SMAD3与细胞周期蛋白Cyclin B的相互作用

SAMDs是TGFβ家族的细胞内信号介导者。为了研究SMAD3的信号传递过程 ,我们以SAMD3为诱饵蛋白用酵母双杂交系统筛选与SAMD3相互作用的蛋白 ,发现CyclinB可以与SMAD3发生相互作用 ,并在COS7细胞中证实了该相互作用。

IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

目的 探讨瘤内注射共表达mIL 12和hIL 2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法 构建pDC5 11hIL2 mIL12、pDC5 11mIL 12、pDC5 11hIL 2真核表达质粒载体 ;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达 ;小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后 ,检测不同时间血清中细胞因子浓度 ;观察各组小鼠存活时间 ,肿瘤大小变化 ;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocyte ,CTL)活性。对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察。结果 酶切鉴定各组质粒载体 ,均示构建成功 ,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子。瘤内注射各组质粒载体后 ,pDChIL2 mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC5 11hIL2组 (F =71 11,P <0 0 1)、pDC5 11mIL12组 (F =3 0 70 ,P <0 0 5 )比较有显著性差异。mIL 12基因和hIL 2基因联合治疗组 ,肿瘤生长明显受抑制 ,疗效显著优于各单独治疗组和对照组 (P <0 0 5 ) ,并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。双基因联合治疗组 ,病灶内肿瘤细胞坏死明显 ,炎性细胞广泛浸润。结论 IL 12、IL 2基因治疗可抑制小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤的生长 ,提高机体的抗肿瘤免疫应答 ,两者联合运用可产生协同效应。

未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者多聚酶P基因YMDD变异检测

目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点 ,选择 65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在 65例患者中 ,YMDD变异阳性 6例 ( 9.0 7%) ,阴性 5 9例 ,6例变异中 2例为YIDD阳性 ,其中 1例为YMDD野毒株和变异株混合存在 ,4例为YVDD阳性 ,其中 1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用 ,在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株 ,其与野生株一样是自然存在的。

HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测,对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒,并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异,出现变异6例,阳性率为9.07%;其中YIDD和YI/YMDD各1例,YVDD3例,YV/YMDD1例。结论本检测方法简便、实用,在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异,其与野生株一样是自然存在的,抗病毒药物压力不是导致HBVYMDD变异的唯一因素。

HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的研究

目的 采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测 ,对其临床意义进行初步的研究。方法 应用分子克隆方法 ,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒 ,并进行敏感性及特异性试验。对 44例经拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果 经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD、YIDD质粒构建成功 ,且该方法具有较好的敏感性和特异性。 44例拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异 ,半年出现变异 5例 ,变异率为 11 . 3 6%:1年出现变异 7例 ,变异率为 15 . 91%。结论 本检测方法简便、实用 ,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素。

改造HBV作为基因治疗载体

HBV具备改造作为肝靶向性基因治疗载体的基本条件———天然嗜肝特异性 ,能够在肝细胞内持续复制、反复感染 ,病毒本身对细胞没有明显的细胞毒性 ;能够携带外源基因并被包装成病毒颗粒 ;能够介导外源基因的转移和表达。但由于基因结构复杂 ,目前改造的HBV载体均存在载容量小、复制包装效率低及安全性差等缺点。就近年相关研究进展进行综述。

乙型肝炎病毒P基因变异的检测及其意义

目的 采用错配PCR扩增方法进行乙型肝炎病毒(HBV)P基因YMDD变异的检测,并对其临床意义进行初步研究。方法 应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒,并进行敏感性及特异性试验。对44例经拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果 经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。44例拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异,半年出现变异5例,变异率为11. 36%; 1年出现变异7例,变异率为15. 91%。结论 本检测方法简便、实用,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素。

同源异型盒基因Emx在人胎盘绒毛膜中的扩增

以鹌鹑ＥｍｘｃＤＮＡ片段作为探针，对人胎盘绒毛膜细胞和成人血细胞的基因组ＤＮＡ进行ＤＮＡ印迹分析．结果表明，在人胎盘绒毛膜细胞中Ｅｍｘ基因剂量较成人血细胞高６倍。

表达白细胞介素-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用

目的:探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法:构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12,ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达,淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性;分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒DNA,观察各组小鼠存活时间、肿瘤体积变化及各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性。注射质粒DNA后1月进行瘤体组织病理学观察。结果:mIL-12基因治疗组与空载体对照组相比,肿瘤生长显著受抑制(F=4.10,P=0.03),小鼠存活期显著延长(X2=4.48,P=0.03),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。质粒DNA瘤内注射1月后,pDC511mIL-12组肿瘤病灶炎性细胞浸润明显,病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论:瘤内注射mIL-12表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤生长,能提高机体抗肿瘤免疫应答。

adw亚型HBV突变体与ayw亚型辅助质粒之间相互包装的研究

目的探讨adw亚型HBV突变体与ayw亚型辅助质粒之间相互包装。方法构建C基因截短adw亚型HBV表达载体pHBV-ΔC。重组载体与ayw亚型辅助质粒pHBV3142共转染HepG2细胞。以与PGEm共转染为对照。用PCR检测细胞核内重组HBV载体cccDNA生成和培养上清中rcDNA的形成,用Native westernblot和Soutern blot检测重组HBV载体在辅助质粒pHBV3142辅助下的包装。结果在实验组细胞核内可检测到cccDNA、培养上清中可检测到rcDNA,对照组中无此结果。实验组Soutern blot见阳性信号而对照组无阳性信号。结论重组adw亚型HBV载体在辅助质粒ayw亚型pHBV3142辅助下能进行有效复制且有效完成病毒包装。

包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒在Hep G2细胞中表达的抑制作用

目的 探讨包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒 (HBV )在HepG2细胞中表达的抑制作用。方法 构建包膜蛋白和核心蛋白共突变的HBV载体 pHBV mSIS/ΔC。瞬时转染HepG2细胞 ,以adwR9转染HepG2细胞为对照 ;用ELISA方法检测上清液中和细胞内HBVS抗原 ;重组载体与adwR9共转染HepG2细胞 ,以pcDNA3与ad wR9共转染为对照组。用荧光定量PCR检测胞内和上清液中病毒量。结果 突变载体转染细胞胞内和上清液中S蛋白表达量及分泌量与adwR9无明显差别 ;突变载体与adwR9共转染组上清液和胞内病毒量较 pcDNA3与adwR9共转染组低。结论 包膜蛋白和核心蛋白共突变对HBVS蛋白的表达量和分泌量没有影响 ,但干扰病毒复制和包装 。

一种对乙型肝炎病毒快速基因分型的聚合酶链反应

根据基因组的差别,目前可以将全世界范围内的乙型肝炎病毒(HBV)分成A～F6个基因型。鉴于HBV的基因型有典型的地域分布特点及不同基因型HBV可能在血清学反应、致病性、治疗反应等方面存在差异,进行HBV的基因分型对于弄清病毒传播和疾病发生具有重要意义。

非交换紧零维群上的Fourier级数的收敛

研究非交换紧零维群上的不可约酉表示的特征和Ｆｏｒｕｉｅｒ级数的收敛性．

以乙型肝炎病毒为载体的基因治疗研究

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)作为肝靶向性基因治疗载体的可能性。方法 用外源报告基因绿色荧光蛋白(GFP)取代HBV S基因读码框构建重组HBV载体,通过脂质体转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察外源基因的表达,半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细胞核内HBV 共价闭合环状DNA构型,常规PCR和Southern杂交检测上清液重组病毒DNA。结累 携带外源基因GFP的重组HBV载体能够在肝细胞内表达外源蛋白,此重组载体为复制缺损型,单独转染后不能在肝细胞包装与复制,在缺失包装信号ε的辅助HBV质粒下可被包装成携带外源基因的成熟重组HBV颗粒并分泌到胞外。结论 HBV可被改造成肝靶向性基因治疗载体。

白细胞介素-12治疗小鼠肝癌的实验研究

白细胞介素(IL)-12能诱导T细胞和自然杀伤细胞(NK)细胞产生多种细胞因子,促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)增殖和功能的活化[1].本实验以瘤内注射表达mIL-12质粒DNA的方式,初步探讨IL-12基因治疗肝癌的作用.