TRIM21促进巨噬细胞M1极化加剧慢性根尖周炎进展的实验研究

目的:探究三元基序蛋白21(TRIM21)在慢性根尖周炎(CAP)中的作用及机制。方法:收集人慢性根尖周炎和正常组织,RT-qPCR检测炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1)、破骨基因(TRAP、RANKL、CTSK)、巨噬细胞极化相关基因(CD86、iNOS、CD206、Arg1)及TRIM21的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞,免疫组化染色检测TRIM21蛋白。以脂磷壁酸(LTA)或脂多糖(LPS)刺激Raw264.7细胞,并检测上述因子的表达,CCK-8法检测Raw264.7细胞增殖情况。提取野生型和TRIM21^(-/-)小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs),免疫荧光染色鉴定。RT-qPCR验证LPS刺激的BMDMs中上述因子的表达,TRAP染色检测破骨细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞极化状态。结果:CAP组织中炎症因子、破骨基因、CD86、iNOS及TRIM21表达增加,CD206、Arg1表达减少,破骨细胞较正常组织多。LTA/LPS刺激促进Raw264.7细胞增殖,上述因子的表达情况与组织中的结果一致。LPS刺激后,TRIM21^(-/-)的BMDM炎症程度较轻,破骨特异基因表达量较低,破骨细胞较少,M1极化程度较低。结论:TRIM21可能通过促进巨噬细胞M1极化从而促进CAP的进展。

新生儿缺氧缺血性脑病血清IL-6水平变化及与脑实质CT值的相互关系

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)患儿血清IL 6水平与脑实质CT值的变化规律及其相关性。方法 采用ELISA法对 37例HIE患儿和 12例对照组新生儿血清IL 6水平进行动态测定。同时采用西门子Smatom CR型全身CT扫描机单纯头颅平扫 ,在CT诊断分度的同时测定脑实质CT值。结果 轻、中、重度HIE患儿急性期血清IL 6水平均较恢复期明显增高 (均P <0 .0 1) ,并明显高于同期对照组水平 (均P <0 .0 1) ,3组患儿中尤以重度组增高显著 ;恢复期重度HIE组血清IL 6水平仍高于对照组 (P <0 .0 1) ,而轻、中度HIE组与对照组无显著性差异。轻、中、重度HIE患儿脑实质CT值均明显低于对照组 (均P <0 .0 1) ;相关分析发现 ,急性期患儿血清IL 6水平与脑实质CT值呈显著负相关 (r =- 0 .893,P <0 .0 1) ,而恢复期患儿血清IL 6水平与脑实质CT值无相关关系。结论 IL 6在新生儿缺氧缺血性脑病的发病中起重要作用。血清IL 6水平测定可作为HIE诊断及评价脑损伤程度的重要参考指标。

新型隐球菌性脑膜炎38例

目的 分析隐球菌性脑膜炎误诊的原因 ,探讨早期诊断方法。方法 采用回顾性方法对 38例新型隐球菌性脑膜炎临床进行分析 ,并对其中 2 5例误诊者原因进行探讨。结果 38例隐球菌性脑膜炎有 2 5例误诊。结论 隐球菌性脑膜炎早期易误诊 ,多次脑脊液离心涂片墨汁染色镜检是防止漏诊、误诊的关键。

血液透析治疗小儿急性肾功能衰竭的临床研究

目的 :观察血液透析 (HD)治疗小儿急性肾功能衰竭的疗效。方法 :对 2 5例在透析前后行肾功能、血电解质、二氧化碳结合力等检测。结果 :2 5例透析后痊愈 2 2例 ,好转 3例 ;BUN(35 .4± 8.5vs 7.6± 2 .1)mmol/L ,SCr(5 83.2± 2 2 .6vs 2 0 5 .2± 10 .3) μmol/L。结论 :HD能迅速纠正ARF患儿的水电解质及酸碱平衡失调 ,促进肾功能恢复 ,减少并发症的发生。

儿童新型隐球菌性脑膜炎38例临床及误诊分析

目的 :分析隐球菌性脑膜炎误诊的原因 ,探讨早期诊断方法。方法 :采用回顾性方法对 38例的临床与其中 2 5例误诊作一分析。结果 :38例隐球菌性脑膜炎有 2 5例误诊。结论 :隐球菌性脑膜炎早期易误诊 ,多次脑脊液离心涂片墨汁染色镜检是防止漏诊、误诊的关键。

小剂量、间断口服铁剂治疗小儿缺铁性贫血116例疗效观察

目的 :探讨治疗缺铁性贫血的最佳方案。方法 :将病人随机分为两组 ,治疗组每周小剂量服药 1次 ,对照组每天按常量服药 ,观察两组病人的网织球和血红蛋白回升情况。结果 :两组病人的网织球和血红蛋白回升率相近 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :小剂量、间断口服铁剂治疗缺铁性贫血与常规剂量每日口服法的疗效相近 ,前者方便、经济。

三七总皂苷对小鼠心肌肥厚的抑制作用及机制

目的探讨三七总皂苷对心肌肥厚的抑制作用及可能机制。方法 30只健康小鼠随机分为5组:对照组、模型组及3个治疗组(分别为低剂量组、中剂量组和高剂量组),通过各组小鼠心重指数、左心室重量指数(LVI)比较及组织形态学观察,了解三七总皂苷对心肌肥厚的抑制作用;应用碱水解法观察各组左心室胶原含量变化及三七总皂苷对胶原含量的影响;RT-PCR技术检测各组心肌中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达水平的变化。结果与对照组相比,模型组心重指数、LVI、羟脯氨酸含量及MMP-2、MMP-9的表达均增高,差别有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中、高剂量组心重指数、LVI、羟脯氨酸含量及MMP-2、MMP-9的表达明显下降,差别有统计学意义(P<0.01)。结论三七总皂苷对改善心肌肥厚有一定作用,其机制可能与其调节MMP-2、MMP-9的表达有关。

C/EBPα参与小鼠胰岛β细胞囊泡谷氨酰胺转运子2基因表达的调控

目的:探讨转录调节因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在小鼠胰岛β细胞株MIN6的囊泡谷氨酰胺转运子2(VGLUT2)基因表达过程中的调控作用。方法:克隆小鼠VLGUT2基因的启动子区,并对其中C/EBPα的结合位点进行了核酸定点突变,以荧光素酶活力方法观察突变后的启动子活性改变情况。通过电泳迁移率实验(EMSA)检测C/EBPα与含有小鼠VGLUT2启动子区核酸序列的核苷核探针的结合能力,以CEBPαsiRNA特异性抑制转录调控因子C/EBPα的基因表达,通过荧光素酶,RT-PCR和Western blotting方法观察抑制C/EBPα基因表达后小鼠VGLUT2的基因表达情况。结果:在对小鼠VGLUT2启动子区C/EBPα结合位点进行核酸定点突变后,小鼠VGLUT2启动子活性下降约50%,EMSA实验表明C/EBPα可与小鼠VGLUT2启动子区结合,当以C/EBPαsiRNA特异性地下调C/EBPα的表达时,小鼠VGLUT2的启动子活性、mRNA和蛋白水平也相应各自下降约60%、40%及45%。结论:C/EBPα参与了小鼠VGLUT2的基因表达调控。

小儿急性病毒性心肌炎肌钙蛋白T的检测及其临床意义

目的 :评价检测血清心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)在小儿急性病毒性心肌炎中的临床价值。方法 :急性病毒性心肌炎患儿 30例并以 2 0例正常人作对照 ,采用 ELISA法测定血清 c Tn T,用速率法测定肌酸激酶 (CK)、肌酸激酶同工酶 (CK- MB)、乳酸脱氢酶 (LDH)、α-羟丁酸脱氢酶 (αHBD)和血清门冬氨酸基移换酶 (AST) ,2周后复检以上项目。结果 :30例患儿血清 c Tn T浓度较正常对照组有显著升高(P<0 .0 1 ) ,治疗 2周后 c Tn T浓度明显下降 (P<0 .0 1 ) ;血清 c Tn T与心肌酶谱比较 ,其阳性率增高也具显著性 ,且持续时间长。结论 :急性病毒性心肌炎患儿血清的 c Tn T有显著升高 ,其检出率也明显高于 CK- MB、LDH等酶类 ,且诊断窗口时间也长。

静脉输液针做小儿腰穿术的临床评价

目的 :提高小儿腰穿术的成功率 ,减少损伤。方法 :用静脉输液针代替传统腰穿针做小儿腰穿术。结果 :静脉输液针做小儿腰穿术一次成功率达 94% ,损伤率低。结论

工厂流动人口避孕现状研究

目的了解工厂中流动人口的避孕措施使用情况、避孕知识知晓情况及影响避孕知识知晓的因素。方法于2008年1—4月在深圳市、东莞市的4个工厂中现场抽取符合标准的流动人口进行匿名自填问卷调查,发放问卷1378份,回收有效问卷950份。结果950人中有838人(占88.2%)采取了避孕措施,使用最多的是避孕套避孕(占69.7%)。避孕知识得分的中位数为9.00分,低分者332人(占34.9%),高分者618人(占65.1%)。影响避孕知识得分的因素有文化程度、年龄和是否采取避孕措施。结论大多数工厂流动人口采取了避孕措施(使用避孕套最多);文化程度低、年龄<25岁和未采取避孕措施者的避孕知识得分低。对文化程度低的年轻流动人口应有针对性地加强避孕措施的宣教服务。

胰岛素样生长因子Ⅰ通过改善线粒体功能保护新生大鼠心肌细胞免于凋亡

目的:探讨线粒体机制在胰岛素样生长因Ⅰ(IGF-Ⅰ)保护心肌细胞中的作用。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,过氧化氢处理诱导凋亡,JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,Annexin V-FITC/PI双染色法、caspase-3活性测定、DNA-ladder分析和Hoechst 33258染色方法观察心肌细胞凋亡的情况。结果:过氧化氢可诱导心肌细胞凋亡,siRNA下调Kruppel样因子9(KLF9)48 h后,心肌细胞线粒体膜电位下降率明显降低,由对照组的(24.0±1.6)%,降为IGF-Ⅰ处理组的(18.3±1.2)%和KLF9下调组的(15.2±1.2)%;线粒体形态明显改善;DNA片段化改善;caspase-3活性降低,与对照组相比IGF-Ⅰ处理组降低(1.30±0.28)倍,KLF9下调组降低(1.31±0.43)倍;Annexin V-FITC/PI双染法显示细胞凋亡率对照组为(42.5±1.8)%,IGF-I处理组为(22.4±4.2)%,KLF9下调组为(32.5±3.5)%;Hoechst 33258染色结果显示凋亡小体减少,KLF9下调组与IGF-I的抗心肌细胞凋亡效果相似。结论:IGF-I通过下调KLF9表达改善线粒体功能,保护心肌细胞免于凋亡。

脱氧核酶对鼻咽癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的探讨脱氧核酶对端粒酶RNA组分的切割作用及对鼻咽癌端粒酶活性的抑制作用。方法针对端粒酶RNA组分(hTR)的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTRmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RTPCR扩增hTR基因片段,用PCRELISA法测定端粒酶活性。结果未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末端添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTRmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTRmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01);但DzTi和DzT转染对鼻咽癌细胞的生长均没有明显的影响(P>0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT’和DzTi’在胞外和胞内均不表现对hTRmRNA的切割作用。结论人工合成的脱氧核酶能够高效特异地切割端粒酶RNA组分,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。

东莞市不孕不育症患病调查

目的:了解东莞市不孕不育症的患病状况,为不孕不育症的防治提供参考依据。方法:采取整群抽样的方法,随机抽取东莞市15个社区(村)结婚时间≥1年且女方年龄在20-44岁之间的东莞籍已婚夫妇进行调查,由调查员填写调查表。结果:不孕不育症总现患率为4.58%,其中女性现患病率为3.12%,男性现患病率为1.20%,两现患率比较差异有统计学意义(2=41.03,<0.001)。结论:东莞不孕不育症现患率总水平较高,但就诊率不高,应加强生殖健康教育。

IL-15对儿童MDS造血前体细胞bcl-2、bcl-xl mRNA表达的影响

目的探讨IL-15对骨髓增生异常综合征(MDS)造血细胞bcl-2、bcl-xlmRNA表达的影响,以探索IL-15抑制MDSCD34造血干／祖细胞凋亡的可能机制。方法采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统,分离纯化17例MDS患儿骨髓CD34细胞,采用RT-PCR检测bcl-2、bcl-xlmRNA表达水平,观察IL-15对它们的影响。结果IL-15可呈时间与剂量依赖性的增强体外培养的MDS造血前体细胞bcl-2、bcl-xl基因mRNA的表达。结论IL-15可能为抑制MDSCD34造血干／祖细胞凋亡的作用机制之一。

特应性皮炎患者幽门螺杆菌的检测与治疗

目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染与特应性皮炎的关系。方法 采用1 3 C尿素酶呼气试验 ( 1 3 C -UBT)方法检测 62例特应性皮炎患儿与 2 5例健康儿童是否感染Hp ;Hp根除治疗采用奥美拉唑、克拉霉素、阿莫西林口服 1周。结果 41例患儿和 9名健康儿童UBT阳性 (P =0 0 1) ,接受根除治疗的 2 5例患儿有 5例特应性皮炎痊愈 ,未接受Hp根除治疗的 16例患儿中有 3例痊愈 (P >0 75 )。结论 特应性皮炎患儿中幽门螺杆菌感染率高 。

tRNA抑制子对转录因子NKX2.5提前终止密码子的通读

人类NKX2.5基因（NK2 homeobox 5，NKX2.5）提前终止密码子（Premature termination codon，PTC）突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前，已报道的NKX2.5 PTC突变有8个（E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X）。为了检测tRNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白，文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pcDNA3.1（-）载体，将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到pEGFP-N1载体，形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的tRNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断tRNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 mRNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明，文章成功构建了8个基于pcDNA3.1（-）的NKX2.5表达质粒、4个基于pEGFP-N1的质粒；tRNA抑制子tRNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X，且对后三者的通读效率均在50%以上；tRNA op能有效通读C264X，通读效率约50%左右；tRNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变；各通读后样本Cx43 mRNA相对表达量增加7%~41.7%；tRNA am和tRNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变，产生具有功能的全长蛋白，但tRNA抑制子对细胞的其他影响还不明确，有待于进一步观察。

IFN-γ、IL-4、IL-10在川崎病患者血清中的表达和意义

目的探讨IFN-γ、IL-4、IL-10在川崎病(KD)发病机制中的作用。方法采用病例-对照分析,使用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测45例急性期KD患儿静脉注射丙种球蛋白(IVIG)前后血浆中的IFN-γ、IL-4、IL-10蛋白浓度与25例正常同年龄对照组的差异。结果急性期KD患儿血浆IFN-γ、IL-4、IL-10水平觉对照组明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);给予IVIG治疗后,上述指标水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IFN-γ、IL-4、IL-10可能通过调节T细胞活化的细胞因子机制参与KD发病的自身免疫耐受过程。

IGF-1通过BTEB调控CYPs途径保护心肌细胞免于凋亡

目的探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱导心肌细胞凋亡,通过Annexin VFITC/PI双染色法、Caspase 3活性测定、Hoechest33258染色法和Tunel法观察下调CYPs的基因表达对心肌细胞凋亡的影响;JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变。结果大鼠心肌细胞经IGF-1刺激60 min后,BTEB m RNA和蛋白表达均明显下降;IGF-1刺激48 h后,CYP1A1、2E1、3A11和11A1的m RNA和蛋白表达均明显下降(均P<0.01);用BTEB特异性的si RNA人为下调BTEB基因表达后,CYP1A1、3A1 m RNA和蛋白表达明显下降(均P<0.01),CYP2E1、11A1 m RNA和蛋白表达变化不明显。与对照组相比,H2O2诱导的大鼠心肌细胞用CYP1A1、2E1、3A11和11A1特异性的si RNA人为下调上述基因表达后,Annexin V-FITC/PI双染法显示心肌细胞凋亡率下降(均P<0.05)、Caspase 3活性测定显示酶活性降低(均P<0.05)、Hoechest33258染色和Tunel法检测结果显示凋亡小体和凋亡细胞数目减少,与IGF-1的抗心肌细胞凋亡效果相似;且细胞线粒体膜电位下降率明显降低(均P<0.05),线粒体形态明显改善。结论 IGF-1可以通过下调细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的表达改善线粒体功能,其中CYP1A1、3A11受BTEB调控途径发挥抗心肌细胞凋亡作用。

槐耳清膏对K562细胞体外作用研究

目的通过用不同浓度的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞,探讨槐耳清膏对K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法应用MTT法、细胞形态学观察以及流式细胞术观察槐耳清膏对体外培养的K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。结果MTT法结果显示:在终浓度分别为0.5、1、2、4和8mg/ml的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞12、24、36、48、72h后,槐耳清膏抑制细胞增殖作用随着浓度增加及培养时间延长而逐渐增强,与对照组相比差异统计学意义(P<0.01)。流式细胞技术显示:不同浓度的槐耳清膏作用于K562细胞48h后,随着浓度的增加,凋亡细胞百分比逐渐增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论槐耳清膏在体外对K562细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用。