黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落组成与多样性特征

【目的】本研究旨在研究福建南平地区芦柑(Citrus reticulata)植株根际土壤细菌群落,并分析黄龙病对其细菌群落的影响,为南平地区芦柑黄龙病的防控提供科学依据。【方法】采用五点法采集了健康和黄龙病发病的芦柑植株根际土壤样本,通过扩增子测序技术和生物信息学方法,深入研究了黄龙病发病芦柑根际土壤细菌群落的多样性和组成变化,分析了土壤理化因子与细菌群落的关联性。【结果】研究结果表明,黄龙病发病的芦柑植株根际土壤细菌群落的多样性略高于健康植株。黄龙病发病芦柑根际土壤中的变形菌门相对丰度明显升高,而放线菌门相对丰度显著降低。在属水平上,与健康植株相比,黄龙病发病芦柑植株根际土壤细菌群落中蔷薇属和嗜酸性杆菌属的相对丰度显著增加,与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著负相关,而与pH值呈现显著正相关。相反地,康奈斯氏杆菌属和褚氏杆菌属的相对丰度明显低于健康植株,并与速效钾、有效磷以及有机质呈现显著正相关,同时与p H值呈现显著负相关。【结论】黄龙病菌感染改变了柑橘土壤理化特性,并显著减少根际土壤中有益细菌的相对丰度,从而导致了芦柑植株根际细菌群落的多样性和组成出现显著变化。与此同时,黄龙病发病的芦柑植株可能通过招募固氮和促进植物根际生长的有益细菌来对抗病原菌的侵害。

柑橘3种病毒类病原多重RT-PCR检测技术的建立及应用

【目的】建立柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)、柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)和啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid,HSVd)的多重RT-PCR检测体系。【方法】设计多重RT-PCR引物,分析其特异性,确定其最佳浓度比、最适退火温度及灵敏度,在此基础上对福建地区的柑橘样品进行检测。【结果】确定了CYVCV-F/R、CTV-F/R和HSVd-F/R等3对引物的最佳浓度比例为1∶1∶2,最适退火温度为52.9℃,灵敏度结果显示该体系可检测模板稀释到10^(-2)的阳性样品。应用该体系对采自福建部分地区的157份柑橘样品进行检测,结果发现,CYVCV、CTV和HSVd的检出率分别为47.1%、56.7%和22.9%。【结论】成功建立了柑橘CYVCV、CTV和HSVd病原的多重RT-PCR检测方法,为该类病害的检测提供准确、快速的检测方法。

福建三明地区柑橘病毒类病原种类的鉴定及检测

为了明确福建省三明地区柑橘病毒类病原(病毒和类病毒)种类,利用RT-PCR技术对其进行了鉴定和检测,并对其检出率进行了分析。结果表明,从207份柑橘叶片样品中检出柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)、柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)和蚜虫致死麻痹病毒(aphid lethal paralysis virus, ALPV)等4种病毒以及柑橘曲叶类病毒(citrus bent leaf viroid, CBLVd)、啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid, HSVd)、柑橘矮化类病毒(citrus dwarfing viroid, CDVd)、柑橘类病毒Ⅴ(citrus viroidⅤ, CVdⅤ)和柑橘类病毒Ⅵ(citrus viroidⅥ, CVdⅥ)等5种类病毒。其中,CTV、CYVCV、CLBV和ALPV的检出率分别是71.01%、66.67%、0.97%和6.28%,CBLVd、HSVd、CDVd、CVdⅤ和CVdⅥ的检出率分别是7.25%、28.50%、13.04%、9.18%和6.76%。同时发现,CTV和CYVCV复合侵染的检出率为54.59%,而品种‘大分1号’的病毒检出率相对较低。本研究首次在柑橘叶片中检测到ALPV。

浅谈某城市综合体高效制冷主机房设计

为实现综合体建筑空调系统高效节能,本文分析了厦门某城市综合体高效制冷主机房设计情况,从中央空调制冷主机房能耗现状、工程概况、负荷模拟及计算、高效设备优化选型、水力计算及管路优化、运行策略优化等方面,对城市综合体高效节能制冷主机房进行设计优化,从而达到高效制冷主机房综合能效比值大于5.0要求。

关于提高初中体育足球绕杆训练效率的思考

在初中体育教学中,足球是一项比较受学生欢迎的运动,其既能够锻炼身体,又能培养学生的团队和竞技精神。在初中体育足球教学的过程中,要想提高学生的技术水平和身体素质,可以采用绕杆训练的方式。绕杆训练具有一定难度,需要教师根据初中学生的特点采取有效的训练方式。在实际测试的过程中,很多学生容易出现抢跑、遗漏标志杆等问题。文章对足球绕杆训练项目进行了简单的介绍,阐述了初中体育足球绕杆训练的要求,并提出了提高初中体育足球绕杆训练效率的方法。

快攻战术在篮球训练中的实践探究

在现代体育项目中,篮球是非常受欢迎的一项运动。其不仅可以显著提升人们的身体素质和运动能力,而且能够增强人们的合作能力和团队意识。如今,篮球运动正向着更高层次发展。篮球教师应该积极地在篮球训练中渗透快攻战术,并将其灵活运用于不同类型的训练活动。

木尔坦棉花曲叶病毒V2蛋白N端保守脯氨酸对病毒致病性的影响

木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMuV)是棉花曲叶病的主要病原之一,其V2蛋白在病毒致病过程中起重要作用。本研究对V2蛋白N端第4位脯氨酸在病毒致病过程中的作用进行了分析。通过构建马铃薯X病毒(PVX)异源表达载体(PVX-V2、PVX-V2^(P4A)),利用农杆菌介导的方法接种于本氏烟发现,PVX-V2能够增强PVX异源病毒的致病性,致使PVX在植物体内复制量增加,而PVX-V2^(P4A)对PVX异源病毒致病性的影响相对较小。通过构建V2基因突变体(ΔV2、V2^(P4A))侵染性克隆,利用农杆菌介导的方法接种于本氏烟发现,ΔV2、V2^(P4A)侵染性克隆引起的症状较野生型更弱。结果表明,CLCuMuV V2蛋白N端第4位脯氨酸在病毒侵染过程中起重要作用。

利用酵母双杂交系统筛选本氏烟中与RGSV P5互作的蛋白

【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化病毒致病的分子机制提供理论基础,为该病毒病的防治提供有效策略。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主蛋白。提取感染水稻草状矮化病毒的水稻叶片的总RNA。依据P5基因的CDS序列设计特异性引物。利用RT-PCR技术获得P5基因,将P5基因构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7上,利用双酶切鉴定诱饵质粒。将诱饵载体pGBKT7、pGBKT7-P5、重组质粒pGBKT7-P5/pGADT7分别转化到酵母感受态细胞Y2H Gold中,通过观察其在缺陷培养基SD/-Trp、SD/-Leu-Trp/上的生长情况及在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上的显色情况检测诱饵质粒的毒性和自激活活性。将烟草酵母cDNA文库质粒转化到含诱饵载体pGBKT7-P5的酵母感受态细胞中,先后用不同缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp、SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal筛选后获得阳性克隆。经酵母质粒提取、转化、测序和Blast等分子生物学方法最终获得互作蛋白的序列。【结果】RT-PCR扩增得到P5基因,其大小为576 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-P5。表达的诱饵蛋白P5对酵母菌没有毒性和自激活活性。诱饵蛋白P5从本氏烟酵母cDNA文库中进行大量筛选,获得15个阳性克隆,分析后最终得到7个与P5互作的本氏烟蛋白。经生物信息学分析它们分别为线粒体孔蛋白VDAC、ADP核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白ArfGAP、囊泡突触结合蛋白Syt-2、延伸因子eEF1A、脯氨酸合成酶共转录的细菌同源蛋白PROSC、非特征蛋白C9orf78及一种未知蛋白。【结论】本研究成功筛选到7个与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主因子。这些互作的寄主因子主要参与转运、生物或非生物胁迫、胁迫应答等生物学过程。深入研究这些互作因子将为解析寄主蛋白参与调控病毒的复制、运动、致病等分子机制提供理论基础,为水稻草状矮化病毒病的防治提供新的思路。

农杆菌介导的病毒侵染方法在禾本科植物转化上的研究进展

综述了农杆菌介导的病毒侵染方法（Ａｇｒｏｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）在禾本科植物转化研究方面的进展．利用农杆菌的Ｔｉ／Ｒｉ质粒载体将病毒或类病毒的核酸导入植物细胞的方法，近年来在禾本科植物包括水稻、大麦、小麦和玉米等具有经济重要性的粮食作物的转化研究上取得了长足的进展．它具有直接、高效、灵敏等特点，在导入植物过程中不需制备病毒或类病毒的核酸，也不需通过介体昆虫的介导．因此，农杆菌介导的病毒侵染方法是人们研究农杆菌及其禾本科寄主的相互关系、病毒的生物学特性、病毒基因功能和核酸序列的很好的方法．

中菲水稻病毒病的比较研究Ⅴ．水稻种质对病毒及其介体的抗性

采用网箱集团接种结合玻管定苗定虫接种技术，测定比较了中菲栽培稻的８１个品种和野生稻的３个种，对两国水稻东格鲁病和水稻草状矮化病的病原病毒及其介体的抗性，筛选出了能同时抗水稻东格鲁球状病毒（ＲＴＳＶ）、水稻东格鲁杆状病毒（ＲＴＢＶ）和水稻草状矮化状病毒（ＲＧＳＶ）的３个株系以上的多抗性抗源─中山红无名种、Ｏｒｙｚａｎｉｖａｒａ和Ｏ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，高抗这些病毒两个株系以上的多抗性品种─汕优桂３３、金早６号、ＨＢ４３７、Ｐａｎｋｈａｒｉ２０３、ＩＲ２８、ＩＲ５８和赤块矮选．高抗ＲＴＳＶ、ＲＴＢＶ介体黑尾叶蝉的品种─ＩＲ２８、ＧａｍＰａｉ３０１２－１５和Ｐａｎｋｈａｒｉ２０３，高抗ＲＧＳＶ介体褐飞虱的品种─ＩＲ２８和ＩＲ６４．

15种植物的单宁提取物对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用

测定了 15种植物的乙醇粗提物对TMV的体外抑制作用 ,其中 11种具有明显效果 ,这 11种植物粗提物经水 /氯仿萃取 ,水萃取物具有明显抑制TMV效果 ,而氯仿萃取物抑制效果差。水萃取物用明胶去除单宁后 ,基本失去抑制TMV的能力 ,表明单宁在其中起着重要作用。从杠板归与假槟榔种子中提取的总单宁对TMV具有明显的抑制作用 ;病毒粒体样品在分别加入这 2种植物总单宁后 ,电镜下表现为聚集结合 ;TMV分别与这 2种植物的单宁混合后 ,通过透析 ,可恢复大部分侵染力 ,表明单宁对病毒并无直接毒害作用 ;TMV外壳蛋白 (CP)与单宁混合后 ,在蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为结合现象 ;单宁对TMV体内抑制复制效果不明显 ;单宁在接种TMV前后施用并没有降低TMV侵染力 ;这些结果表明这 2种植物单宁对TMV抑制作用可能是与TMV CP结合而引起病毒侵染力下降或影响病毒CP对侵染位点的识别。

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析 (CM sepharoseFF)和凝胶层析 (SuperdexTM75 )方法 ,从新鲜食用菌毛头鬼伞 (Coprinuscomatus)子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDS PAGE初步确定其分子量约为 1 4 4kD。活性检测结果显示 :当其浓度为 1 2 5 μg mL时 ,对烟草花叶病毒 (TMV)在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达 83 0 % ;y3对兔血凝集活性滴度为 2 5,对人血凝集活性滴度为 2 6,其浓度分别为 1 5 62 μg mL和 0 781 μg mL ;利用胃癌细胞株MGC 80 3检测y3体外抗肿瘤活性 ,其IC50 为 1 2 μg mL。y3N 端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP ,为一新的蛋白序列。在SWISS PORT上登录号为P83477。

榆黄蘑中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗TMV和HBV的活性

采用阴离子交换层析和凝胶层析方法从新鲜食用菌榆黄蘑 (Plearotuscitrinopileatus)中进行了抗病毒蛋白的纯化 ,结果获得了一个纯化蛋白YP4 6 4 6 ,经SDS PAGE可确定其分子量为 2 7.4kD。以半叶法在枯斑寄主心叶烟上检测该蛋白对烟草花叶病毒 (TMV)的抑制率 ,发现有较好的抗TMV活性 ,其抑制TMV的中浓度为 0 .2 4 μg/mL。同时以HepG2 .2 .2 .15细胞株为模型 ,对所获得的蛋白进行体外抗乙型肝炎病毒效果的评价。结果表明该蛋白对HBsAg的 5 0 %抑制时的浓度为 0 .0 8μg/mL 。

大蒜精油对烟草花叶病毒的抑制作用

采用水蒸气蒸馏法提取的大蒜精油经GC MS测定,其主要成分为含硫化合物.高质量浓度 (1mg·mL-1以上 )的大蒜精油对烟草花叶病毒(TMV)有一定的体外抑制作用,质量浓度小于 0. 5mg·mL-1的大蒜精油对TMV的体外抑制效果不明显.在离体条件下,大蒜精油对TMV的增殖有明显的抑制作用.在烟草上喷施大蒜精油可降低烟草体内病毒的含量,减轻病害症状.

臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用研究

目的:研究臭椿和鸦胆子的抗植物病毒作用。方法:以烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)为供试病毒,采用局部枯斑法测定2种药用植物提取物对TMV侵染的抑制作用;叶碟法研究2种药用植物提取物的抗TMV增殖作用,并通过盆栽试验,测定2种药用植物提取物对烟草花叶病的防治作用。结果:臭椿和鸦胆子提取物不仅能有效抑制TMV侵染,而且对TMV的增殖也有明显抑制作用,并对烟草花叶病具有较好的防治效果。结论:臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用显著,在抗植物病毒方面具有进一步研究和开发价值。

黄瓜花叶病毒三个毒株对烟草细胞内防御酶系统及细胞膜通透性的影响

用黄瓜花叶病毒 (CMV) PE、M和 Xb3个毒株接种烟草 (品种 K3 2 6)后 ,按时间顺序测定与细胞防御系统有关的酶活性和受侵细胞膜通透性变化 :1)苯丙氨酸解氨酶 (PAL) :Xb毒株侵染初期导致酶活性明显升高、后期下降 ,M毒株导致酶活性一直保持在较高水平 ,而 PE毒株则导致酶活性下降。 2 )过氧化物酶 (POD) :PE和 M毒株均导致酶活性升高 ,Xb毒株影响不大。 3)超氧化物歧化酶(SOD) :Xb和 M毒株导致酶活性前期升高、后期活性下降 ,PE毒株引起酶活性前期略微升高、后期下降。 4 )多酚氧化酶 (PPO) :Xb毒株导致发病前期酶活性急剧升高、后期降低 ,M毒株导致酶活性初期降低、后期回升 ,PE毒株导致酶活性升高。 5)受侵细胞在发病初期的膜通透性均低于正常水平 ,不同毒株引起的膜透性变化与症状的严重度均有独特的规律。 3个毒株的侵染均可引起细胞内可溶蛋白浓度的改变。

几种植物提取物对4种植物病原真菌的抑制作用

以链格孢菌、芭蕉炭疽菌、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌等4种植物病原真菌为供试菌,对采自福建省福州地区16种植物乙醇提取物的抑菌活性进行测试,结果表明,0.0lg·mL-1下,有8种植物对至少1种病原真菌孢子的萌发抑制率达60%以上,大飞扬、杨梅、桃金娘3种植物的乙醇提取物对孢子萌发与菌丝生长都有较好的抑制效果.对这3种植物用极性从小至大的溶剂依次提取,提取物抑菌活性表明,活性物质多只分布在其中1至3种极性溶剂层中,不同极性提取物的抑菌能力与抑菌范围存在较大差异.大飞扬的丙酮提取物对芭蕉炭疽菌孢子可能具有毒害作用,乙酸乙酯提取物使芭蕉炭疽菌和链格孢菌的孢子芽管生长不正常.

河蚬中活性蛋白CFp-a的分离纯化及其活性

采用硫酸铵分级沉淀 ,BlueSepharose 6FastFlow、SPSepharoseFastFlow和HPLC柱层析 ,从河蚬 (Corbiculafluminea)中分离纯化蛋白CFp a。经SDS PAGE测定 ,其分子量为 2 4 .0kD ;经苯酚硫酸法测定 ,其含糖量为 2 .3%。 10～ 16 0 μg/mLCFp a分别处理肝癌细胞BEL74 0 4 72h后 ,采用四氮唑还原法 (MTT)检测癌细胞的生长活性 ,结果显示 ,CFp a对BEL74 0 4癌细胞生长的抑制率在 2 4 .6 %～ 79.2 %。采用质量浓度为 2 0 μg/mL和 4 0 μg/mL的CFp a分别处理BEL74 0 4 4 8h后 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡 ,可以在DNA直方图上观察到典型的亚“G1”峰 ,凋亡率分别为 10 .99%和 15 .5 1%。

三叶鬼针草中黄酮甙对烟草花叶病毒的抑制作用

测试了从三叶鬼针草中提取的黄酮甙对烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的抑制作用.结果表明:黄酮甙对TMV具有明显的体外钝化作用,其质量浓度为100μg·mL-1时,对TMV的抑制率为91.3%,但对烟草体内病毒复制无显著的抑制效果;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示黄酮甙与病毒外壳蛋白混合的泳带比对照明显滞后,表明黄酮甙可与TMV外壳蛋白结合,透析或萃取可使这种结合解离,使病毒恢复侵染力,说明黄酮甙对病毒无直接杀灭作用;用黄酮甙处理过的普通烟叶片,12h后接种病毒,可阻抑病毒初侵染,延迟病害症状的出现.

金鸡菊(Coreopsis drummondii)的抗TMV活性物质

采用活性跟踪法从金鸡菊根中分离获得抗病毒活性物质,经质谱和核磁共振分析,鉴定该物质为1-苯基-1,3,5-三庚炔.采用半叶枯斑法、叶圆盘法测定了该物质对烟草花叶病毒的抑制效果,结果表明,0.2mg/mL的该化合物对TMV表现出较好的体外抑制侵染和增殖活性,其对TMV侵染和复制的抑制率分别为73.5%和84.3%.实时荧光定量PCR测定结果表明,该化合物对TMV外壳蛋白基因的表达有明显的抑制作用,0.2mg/mL的该化合物对TMV外壳蛋白基因表达的抑制率为79.8%.