鸡马立克氏病活疫苗免疫效力比较试验

用ＨＶＴ冻干苗、ＨＶＴ细胞结合苗、ＣＶＩ９８８细胞结合苗、ＳＢ１＋ＦＣ１２６双价活疫苗、３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６双价活疫苗和Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫ＳＰＦ白来航鸡或普通伊莎鸡，用鸡马立克氏病病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株、京－１血毒以及鸡马立克氏病超强毒ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株分别攻击进行免疫效力比较试验。试验表明，ＭＤ单价苗的免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８、ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗，这３种ＭＤ单价苗均能给免疫鸡群提供有效的免疫保护力。ＳＢ１＋ＦＣ１２６、Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６等３种ＭＤ双价苗免疫效力显著高于ＭＤ单价苗，均能给免疫鸡群提供较强的免疫保护力，并能有效地抵抗ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株的致瘤作用。

鸡马立克氏病疫苗的效力评价及选择与使用

鸡马立克氏病疫苗的效力评价及选择与使用吴长新刘秀梵（扬州大学农学院２２５００９）鸡马立克氏病（ＭＤ）是由疱疹病毒引起的一种高度接触传染性淋巴组织增生性肿瘤疾病。该病遍布世界养鸡地区，给养鸡业造成了巨大的经济损失。因ＨＶＴ疫苗广泛使用，ＭＤ得到了一定程...

应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究

应用新城疫单抗酶联诊断试剂盒对３群发生疑似新城疫的鸡群进行了快速诊断。采用肛门泄殖腔棉拭取样方法取样，分别取６０、３５和３８份样品，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检测出新城疫强毒抗原阳性分别为５、３和２份样品，诊断该３群发生非典型鸡新城疫。用病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法验证表明，新城疫单抗酶联试剂盒诊断非典型新城疫简便、快速。

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断鸽新城疫

某群肉鸽暴发了一种急性、烈性传染病、发病率近１００％，死亡率达４０％，发病鸽多数有呼吸症状，拉绿色稀粪，部分鸽有神经症状，病死鸽剖检表现全身充血、出血、出血性纤维素性肠炎、肺炎、气管炎等病理变化。采取病死鸽泄殖腔棉拭样品，应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断，结果表明，该鸽群发生了鸽新城疫。应用典型的病毒分离、鉴定和毒力试验的新城疫诊断方法诊断，证实了试剂盒诊断结果的正确性。应用鸽源ＮＤＶ强毒作抗原制成的油佐剂灭活苗免疫鸽群。

绿孔雀新城疫的快速诊断与紧急防制

绿孔雀新城疫的快速诊断与紧急防制吴长新梁惠良１）彭大新焦库华（扬州大学农业部畜禽传染病重点实验室２２５００９）世界各国对新城疫（ＮＤ）的研究已有６０多年的历史，广泛应用各种ＮＤ疫苗进行免疫防制也有３０多年。新城疫病毒（ＮＤＶ）对鸡、火鸡、珍珠鸡及雉鸡...

鸡马立克氏病Z_4＋Fc_（126）双价活疫苗配比试验

本研究用不同剂量的Ｚ＿４和Ｆ＿（ｃ１２６）配制成鸡马立克氏病（ＭａｒｅｋｓＤｉｓｅａｓｅ，ＭＤ）双价活疫苗做配比试验。２个试验８种配比的Ｚ＿４＋Ｆ＿（ｃ１２６）双价活疫苗免疫易感鸡，攻毒保护试验结果表明，Ｚ４无论与Ｆｃ１２６细胞结合毒还是与Ｆ＿（ｃ１２６）冻干毒配成双价活疫苗，均能给免疫鸡群提供坚强的免疫保护力，Ｚ４与Ｆ＿（ｃ１２６）间存在很强的免疫协同作用，即使Ｚ４剂量小至仅占疫苗病毒ＰＦＵ总数的１０％，这种协同作用仍能使免疫鸡群产生较强的免疫保护力。

抗菌药对马立克氏病活疫苗毒性的作用

用不同剂量的青霉素钾、硫酸链霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素和恩诺沙星等５种常见抗菌药加入ＨＶＴ冻干菌、ＣＶＩ９８８细胞结合苗和Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗中，作用１ｈ后，分别取样计数，研究其对马立克氏病（ＭＤ）疫苗的毒性作用。结果表明：５种抗菌药加入ＭＤ疫苗稀释液后，ｐＨ值变化较大，ＭＤ疫苗空斑数显著减少，以至使ＭＤ疫苗失效。

间接免疫荧光染色空斑计数技术的建立及应用

以间接免疫荧光抗体技术（ＩＦＡ）为基础，并加以改进，建立了间接免疫荧光染色空斑计数技术（ＰＣＴＩＩＦＳ），用其检测鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，可快速准确地计数疫苗中不同血清型病毒各自的空斑形成单位（ＰＦＵ）及其ＰＦＵ总数。克服了常规法不能计数二价苗中两种病毒各自空斑数的缺点，敏感性显著高于常规病毒空斑计数法。

LaSota毒株胰蛋白酶作用试验

在３７℃条件下，用０．１％和１％胰蛋白酶分别消化新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ毒株１２和２４ｈ后，接种１５日龄ＮＤＶ非免疫雏鸡，接种１５ｄ内雏鸡健活，采取血清测定血凝抑制（ＨＩ）抗体效价与对照组无显著差异；用０．１％和１％胰蛋白酶分别作用ＬａＳｏｔａ毒株２、４、１２和２４ｈ后，接种１０日龄ＮＤＶ非免疫鸡胚，鸡胚平均致死时间及尿囊液中病毒血凝（ＨＡ）效价与对照差异不显著；ＬａＳｏｔａ、Ｃｌｏｎｅ－３０和Ｖ４毒株在鸡胚成纤维细胞单层上形成病变需胰蛋白酶协助，而Ｆ８Ｅ４８毒株无需胰蛋白酶协助就能形成细胞病变．本研究表明：ＮＤＶ弱毒经胰蛋白酶消化后在鸡体内、鸡胚中毒力和增殖力未发生变化。

鸡马立克氏病单价活疫苗免疫效力比较试验

用农业部南京药械厂和三家外国动物保健品公司生产的４种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗、实验室制备的ＣＶＩ９８８细胞结合苗和ＨＶＴ细胞结合苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）单价活疫苗免疫１日龄ＳＰＦ白来航鸡，８日龄时用鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）ＧＡ株攻击，同时以Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗作对照，进行免疫效力比较试验。结果表明，６种ＭＤ单价活疫苗均能使免疫鸡群获得对ｖＭＤＶ攻击的免疫保护力，免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８，ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗；国产ＨＶＴ冻干苗的免疫效力不低于三家外国公司生产的ＨＶＴ冻干苗；

全胚连续消化制备鸡胚成纤维细胞技术研究

在一定条件下，将全胚置胰酶消化液中搅拌连续消化，建立了全胚连续消化制备鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＥＦ）技术，用该技术制备ＣＥＦ，每胚细胞产量达２．０亿个以上，是传统技术的２～３倍．所制备的细胞活性高，贴壁性强，分散度好，培养的单层均匀．以这种细胞单层为基质增殖病毒，病毒产量不低于传统方法制备的细胞单层的水平．

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀群进行快速诊断，采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性，诊断该群绿孔雀发生了新城疫。用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明，新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便、快速、准确。

马立克氏病毒Z_4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ＿４毒株第１０代（Ｚ＿４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代全第３０代（Ｚ＿４－３０），Ｚ＿４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化。分别以Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０，Ｚ＿４－２５和Ｚ＿４－３０细胞结合毒作单价疫苗，将Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０和Ｚ＿４－３０细胞结合毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒ＧＡ株攻击，进行免疫效力试验。结果表明，Ｚ＿４毒株４个代次单价苗之间以及３个代次毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）毒株组成的二价疫苗之间免疫效力无显著差异。表明Ｚ＿４毒株在ＣＥＦ单层上从第１０代连续传至第３０代，仍然保持其原有的培养特性和免疫原性。

不同细胞培养基细胞培养动力学比较试验

应用宜兴赛尔生物化工厂产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基与美国Ｓｉｇｍａ公司产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基分别配制细胞培养液，培养ＳＰ２／０和Ｖｅｒｏ细胞系及原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），做细胞培养动力学比较试验。比较这两种来源的细胞培养基对细胞生长的形态、分裂速度及鸡马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ．ＭＤＶ）疫苗毒株ＨＶＴ－ＦＣ１２６和ＲｉｓｐｅｎｓＣＶＩ９８８在ＣＥＦ单层上增殖量的差异。研究结果表明。

鸡马立克氏病二价活疫苗免疫协同作用研究

鸡马立克氏病二价活疫苗免疫协同作用研究@吴长新@刘秀梵@吴艳涛@张如宽@甘军纪@刘慧谋@彭大新@李胜$江苏农学院动物医学系@李胜$杭州市近江种鸡场鸡；马立克氏病；二价＋疫苗；免疫协同作用农业部“七·五”重大攻关项目；江苏省“八·五”重大攻关项目...

鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清Ⅱ型Ｚ_４毒株５００个空斑形成单位（ＰＦＵ）与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ_（１２６）毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ＿（１２６）二价疫苗，Ｚ＿４，３０１Ｂ／１和ＦＣ_（１２６）３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒Ｍｄ＿５毒株（ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ_５）攻击。结果表明：Ｚ_４＋ＦＣ_（１２６）和３０１Ｂ／１＋ＦＣ_（１２６）２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能给免疫鸡提供对ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ＿５毒株攻击的有效保护力。

鸡马立克氏病综合防制

鸡马立克氏病综合防制■吴长新刘秀梵（扬州大学国家农业部畜禽传染病重点实验室２２５００２）鸡马立克氏病（ＭＤ）是由疱疹病毒引起的一种高度接触传染性淋巴组织增生性肿瘤疾病。此病的特征是鸡的外周神经、性腺、肛膜、各种脏器和皮肤单核细胞浸润，产生淋巴性肿瘤，...

标记抗体染色病毒空斑计数技术的建立

用鸡马立克氏病病毒血清１、２、３型毒株及其对应的异硫氢酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的型特异单克隆抗体（单抗）和型共同单抗为试验材料，以免疫荧光抗体技术（ＦＡ）为基础，并加以改进，建立了标记抗体染色病毒空斑计数技术．该技术能克服常规病毒空斑计数技术不能计数一种样品含有两种或两种以上病毒的各自空斑数的缺点，能迅速准确计数出多病毒样品中病毒各自空斑数及其空斑总数。

抗禽大肠杆菌O_1和O_2抗原特异性单克隆抗体的研制

抗禽大肠杆菌Ｏ＿１和Ｏ＿２抗原特异性单克隆抗体的研制吴长新，张如宽，朱建国，刘秀梵（江苏农学院畜牧兽医系，扬州２２５００９）禽大肠杆菌病常给养禽业造成严重的经济损失。控制和预防该病，确诊和病原鉴定是前提。常规临床和实验室诊断繁杂费时，而Ｏ抗原单因子血...

绵羊MHC Ⅰ基因多态性位点分析显示基因座存在重叠（英文）

主要组织相容性I(MHC Ⅰ)类抗原分子重链基因是目前所有蛋白分子中多态性最高的分子。MHC Ⅰ分子重链有5个功能结构域,包括α1、α2、α3跨膜和胞浆区,其中α1和α2又是I类分子中多态性最高的区域。总的来讲,α1和α2结构域与等位基群或等位基因族系相关,而α3和跨膜及胞浆域与MHC Ⅰ类分子基因座相关。人们对MHC Ⅰ认识和知识主要来自人和鼠MHC Ⅰ研究,人和鼠MHC Ⅰ不存在基因座重叠现象,但最近研究发现灵长类MHC Ⅰ基因座存在重叠现象。生物学方法克服血清学方法不能定义或确定I类分子的基因座的缺点。本项目选择2只来自不同品系的绵羊,通过对它们的MHC Ⅰ类分子α1和α2 cD NA的克隆、测序和分析,研究绵羊MHC Ⅰ类分子多态性,并探索该基因在绵羊中是否存在基因座重叠现象。对来自2只绵羊20个α1和α2区域cD NA序列分析,2只绵羊9个或11个α1和α2 cD NA分子表明它们至少有5或6个MHC Ⅰ类分子等位基因。比较目前所有绵羊MHC Ⅰ类分子α1和α2 cD NA序列,结合分析α3跨膜区和胞浆区cD NA序列,参照目前单位片分析确定的绵羊MHC Ⅰ类分子基因座分布,我们发现绵羊MHCI分子基因存在基因重叠现象。