巨尾桉组培快繁与转基因再生体系的优化

以巨尾桉带腋芽的半木质化茎段为最初外植体,通过正交试验优化法,对巨尾桉组培快繁体系建立过程中各项培养基进行了研究,建立起良好的巨尾桉组织培养再生体系,为桉树遗传转化和良种保存提供材料和技术支持,同时对根癌农杆菌介导的叶盘法转化体系进行优化。结果表明:叶片分化芽率提高到26.7%,理论上最佳的转基因巨尾桉叶片直接分化培养基为WPM+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.15 mg/L,生根培养基中筛选转基因芽段的卡那霉素选择压为20 mg/L。

巨尾桉胞质EuCuZnSOD基因的克隆与原核表达

通过克隆巨尾桉的细胞质EuCuZnSOD基因,构建原核表达载体pET-CuZnSOD,并研究该基因的功能.测序结果表明:基因序列长度为459bp;152个编码氨基酸,蛋白相对分子质量为15.2ku.在28℃条件下,1mmol·L-1异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h,转化菌株的超氧化物歧化酶(SOD),总酶活比对照组平均高19.9%.结果表明:克隆获得的巨尾桉细胞质EuCuZnSOD的重组基因表达产物具有SOD酶活性,GenBank注册号为JX138573.

GRP1.8-反义pt4CL1基因对巨尾桉木质素含量的影响

桉树是桃金娘科桉树属(Eucalyptus)植物的统称,是制浆造纸的主要原料之一,但是桉树中含有大量木质素,木质素的存在会严重影响纸浆的质量。4-香豆酸∶辅酶A连接酶(4CL)是木质素单体生物合成的关键酶之一,抑制4CL基因的表达,可以有效降低植物中木质素的含量。通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将形成层定位启动子GRP1.8融合的杨树反义4-香豆酸:辅酶A连接酶基因导入巨尾桉,经卡那霉素筛选和PCR鉴定,获得9株转基因阳性植株。通过4CL酶活性测定和木质素、纤维素含量的分析,发现转基因组培苗的4CL酶活性比对照植株下降了44%,温室转基因幼苗中硫酸木质素含量下降了16%。