快速个体识别STR分型技术

DNA-STR分型技术[1]一般包括DNA提取、PCR扩增、电泳分析三个部分,DNA提取需要1 h以上,PCR扩增需要3~4 h,电泳分析需要1 h以上,完整的DNA-STR分型需要6~8 h[2]。进一步缩短DNA-STR分型时间,实现快速DNA分析成为科研攻关的一个新的重点[3-5]。目前,快速DNA分析的研究主要集中在快速DNA提取和快速电泳分型两个部分。

大数据时代市场营销学科“三数能力”人才培养途径的思考

伴随着"大智移云"时代的到来,数字营销、精准营销以及云营销蓬勃兴起。大数据产业要求市场营销人才在具有"双创"能力的同时兼具数据思维能力、数据素养能力以及数据延展能力,这对市场营销学教学改革提出了新的挑战。

中国电信业航母驶入改革深水区——由国家铁塔公司到网业分离

良性的竞争作为市场经济发展的核心要素,有利于促进资源的自由流动和优化配置,是市场经济的"催化剂"和"加速器"。党的十八届三中全会审议通过的《中共中央关于全面深化改革若干重大问题的决定》明确强调,要继续完善社会主义市场经济体制,使市场在资源配置中起决定性作用。从电信业"营改增"税改计划、虚拟运营商牌照的发放,到组建国家铁塔公司,中国电信业的改革进入深水区——网业分离。然而它究竟能在多大程度上促进竞争,打破垄断,成为了监管机构、专家学者以及业内人士研究的重点课题。

利用“移动云平台”构建SPOC课程与评价体系的探索——以西北师范大学知行学院《市场营销学》课程为例

基于SPOC的混合教学模式是继MOOC快速发展之后出现的一种新型信息化教学模式,该模式对提升教学有效性有巨大潜力。文章以《市场营销学》课程为例,阐述了大数据语境下SPOC教学模式的内涵及优势,设计了基于SPOC的混合教学模式,通过利用AHP层次分析法对其教学评价体系进行了权重的测算,以期为独立院校应用SPOC进行课程教学改革提供借鉴。

新零售模式下的甘肃中医藏药产业体系创新性研究

藏医药是甘肃省重点发展的产业之一,藏药产业已逐步走向产业集群的规模发展之路。但是在藏药产业体系发展过程中,还存在一些问题:中医藏药行业研究经费不足,产业发展结构不合理;中医藏药企业政策发展环境不佳;中医藏药企业人力资源体系建设缺乏创新;缺乏自主知识产权的核心性产品;中医藏药行业知识产权缺乏保护意识。新零售模式下,甘肃藏药产业体系创新性研究的对策是:加大研究经费投入,开展产学研合作创新;加大政府政策倾向支持;培育藏药产业创新人才;打造"甘肃中医藏药"品牌战略;形成甘肃中医藏药产权意识。

我国中小企业经营模式的选择及政策扶持

我国是中小企业的大国,但不是中小企业的强国,与国家对大企业战略的定位和关注程度相比较,与世界先进国家和地区相比较,我国中小企业发展还有较大差距。本文针对我国中小企业的发展现状,分析了其存在的主要问题,并提出了中小企业发展的思路对策。

“互联网+”背景下流通组织平台运作机制研究

随着信息技术发展的不断深化,“互联网+”已经渗透到了我们生活中的方方面面,为我们的生活、生产提供了发展的契机和动力。对于传统企业而言,则为传统企业走出发展中的瓶颈指明了方向。从这一角度讲,我们首要的一件事就是要对平台化这一组织形式有一个全面、客观的认识和了解,只有这样才能在此基础上制定切实有效的对策,消除平台建设和运行过程中的制度断层,实现流通组织平台创新功能的发挥。

汗潜指印的STR分型检测

目的探索汗潜指印的荧光STR复合扩增检测的方法。方法采用Chelex-100和Microco-100浓缩柱,提取汗潜指印中DNA,STR复合扩增荧光电泳检测。结果 105例汗潜指纹STR分型可明确判读5个以上基因座的占30.3％,个体之间的差异、捺印指印时用力大小以及指印遗留在客体上时间的长短均影响检测成功率。结论该汗潜指印的DNA提取方法步骤简单,方法较为稳定,使单枚汗潜指印可望获得DNA分型。

PCR扩增循环数与低拷贝模板DNA的STR分型

目的探讨PCR扩增循环数对低拷贝模板DNA的STR分型的影响。方法模板DNA(9947A)的不同扩增用量(含低拷贝模板量),采用ProfilerPlus试剂盒,扩增循环数分别为28、30、32、34、38次,3100型基因分析仪(ABI,美国)检测结果。结果循环数从28次增至38次,模板DNA量最低检出量可从0.25ng减少至0.0312ng;先循环28次后,每反应加0.3μlAmpliTaqGoldDNA聚合酶,再循环6次较1次34个循环的检测灵敏度高,相当于1次38个循环的效果。结论增加PCR扩增循环数,可能影响低拷贝模板DNA的STR分型。

性别鉴定中amelogenin基因座变异的研究进展

Amelogenin基因座变异,分为amelogenin引物结合区突变和包含amelogenin基因座的Y染色体微缺失两种类型,以后者最为常见。Amelogenin引物结合区突变的发生机制是核苷酸点突变,包含amelogenin的Y染色体微缺失的发生机制可能是非等位同源重组或者非同源末端连接。在全世界人群中,位于印度次大陆地区的印度人群、斯里兰卡人群和尼泊尔人群amelogenin变异率非常高。Amelogenin变异对生育能力和表型影响非常小,但在性别鉴定中会导致错误的性别鉴定结果。采用包含常染色体STR基因座、amelogenin基因座和多个Y-STR基因座的复合扩增试剂盒进行检测可有效避免因amelogenin变异导致的性别误判。

15个常染色体和10个Y-STR基因座复合扩增试剂盒的研发

目的建立法医物证学常染色体和Y染色体综合检测的方法。方法选择常用的常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座,设计复合扩增引物,形成五色荧光标记复合扩增试剂盒。结果开发出一个五色荧光标记复合扩增试剂盒,可同时对15个常染色体STR基因座、1个性别基因座和10个Y染色体STR基因座进行分型检测。结论 15个常染色体STR加10个Y染色体STR检测试剂盒结合毛细管电泳凝胶进行STR分型,结果准确可靠,在法医学案件检验及数据库建设等方面有良好的应用前景。

应用RNA分析技术推断现场血痕形成时间

目的检测血痕中β-actin mRNA和18S rRNA在人体死后8～15d期间的表达残留,为推断血痕形成时间寻找新的客观依据。方法在上述时段内每天抽提血痕总RNA,利用实时定量RT-PCR技术监测18S rRNA和β-actin mRNA的扩增状况并对产物进行定量分析,通过检测18S rRNA与β-actin mRNA含量在各个时间点的变化趋势来推测血痕形成时间。结果死后8～15 d时段内18S rRNA与β-actinmRNA量的比值呈明显升高趋势,显示出两种不同类型RNA降解的时间差异性。结论一定时段内18SrRNA与β-actin mRNA量的相对变化,可作为推测血痕形成时间的参考指标。

MiniFiler试剂盒运用于法医微量物证的检验

目的应用MiniFiler试剂盒对法医微量物证进行DNA分析。方法采用MiniFiler试剂盒对样本进行DNA分型,确定样本9个STR基因座的等位基因型。结果10pg DNA模板经MiniFiler试剂盒扩增后,能够进行DNA分型,但40pg以上的DNA方可得到稳定可靠的分型结果。结论MiniFiler试剂盒可以用于法医微量物证的STR分析。

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。

应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性

目的探寻分子生物学方法判定刑事案件现场物证的生物属性的可行性。方法取30份现场生物检材,其中血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)各10份,分别进行常规检验法和分子生物学方法,通过DNA-RNA共提取技术,将其中的mRNA运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术反转录成cDNA,根据3种生物检材不同的目标基因设计3对特异性引物,进行实时荧光定量PCR扩增,通过熔解曲线测定不同的熔解温度(Tm)和不同长度的扩增片段来区分生物检材。结果血液(斑)的Tm值为(84.5±0.2)℃,片段长度177 bp;唾液(斑)的Tm值为(76.9±0.3)℃,片段长度134 bp;精液(斑)的Tm值为(88.5±0.2)℃,片段长度294 bp。结论与常规检验法比较,联合应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术判定检材的生物属性特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠,可应用于日常法医物证检验。

浙江汉族人群12个X-STR基因座遗传多态性调查

目的调查12个X染色体STR基因座在浙江汉族人群的遗传多态性,为法医学应用提供基础数据。方法应用ZJGA-X12荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族468名无关男性个体与449名无关女性个体进行DXS7133、DXS8378、DXS981、DXS7424、DXS6789、DXS10159、GATA165B12、DXS101、DXS7423、GA-TA31E08、DXS10164、DXS10162这12个X-STR基因座的复合扩增,用ABI3130XL型基因分析仪对扩增产物进行检测,并统计这12个X-STR基因座的群体遗传学参数。结果获得12个X-STR基因座的等位基因频率分布,分别检出8、7、13、12、11、8、7、16、6、8、9、11个等位基因,获得男性样本DXS10159-DXS10162-DXS10164与DXS101-DXS7424两组连锁基因座单倍型119、62种;分别统计了12个X-STR基因座的GD、DP、MEC等法医遗传学参数。结论 12个X-STR基因座具有较强个体识别能力,可应用于法庭科学中的个体识别与亲权鉴定。

差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。

AS-PCR技术检测20个mtDNA SNP位点及单倍型频率

目的：基于等位基因特异性PCR（allele-specific PCR，AS-PCR）技术，建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA（mtDNA） SNP的方法。方法基于AS-PCR原理，选择20个mtDNA编码区SNP位点，分为两组，分别标记FAM和HEX荧光，每个位点设计具有长度差异的两条上游（下游）等位基因特异性引物以及一条下游（上游）通用引物。结合AS-PCR技术和毛细管电泳，检测200份无关个体血样。各位点随机选取至少3个样本进行直接测序验证，并进行单倍型频率调查。结果200份血样均得到清晰分型，各位点的检测结果与直接测序结果完全一致。10μL体系下，DNA最低检测浓度为0.2 pg，当模板量为0.5~5 pg时能得到较为理想的分型图谱。在200名无关个体中，共分出15种单倍型，单倍型多样性为0.9060。结论 AS-PCR技术是一种简单、快速且有效的mtDNA SNP分型方法，适用于法庭科学检验的需求。

应用微生物菌群鉴定阴道分泌液

目的探究特异性存在于阴道分泌液中的微生物菌群。方法收集阴道分泌液16份、唾液样本16份、粪便样本16份、精液样本8份、外周血样本8份、尿液样本5份及鼻腔分泌液样本4份,对卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、惰性乳杆菌和阿托波氏菌的16S r RNA基因进行扩增,PCR产物采用3130xl型遗传分析仪进行检测。结果卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、惰性乳杆菌和阿托波氏菌在阴道分泌液中的检出份数分别为15、5、8、14和3份。卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌特异性存在于阴道分泌液中。结论检测卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌对鉴定阴道分泌液具有潜在的应用价值。

Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用

目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒进行平行试验。对4个试剂盒相同基因座的分型进行比对,以确认Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的灵敏度和准确性。结果 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的检测成功率为97.79%,同一样本在相同基因座与SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒的STR分型结果相同。结论利用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型,信息量大、结果准确可靠,可应用于法庭科学。