灰毡毛忍冬bZIP25基因的克隆及其表达模式分析

目的克隆灰毡毛忍冬bZIP25基因序列全长,并进行生信分析及表达模式分析,以初步探索其在灰毡毛忍冬中的生物学功能。方法通过逆转录PCR技术克隆bZIP25基因的序列全长,采用生物信息学分析方法对bZIP25及其编码的蛋白进行分析。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术测定其在茎、叶及七个花期花中的表达水平。结果克隆得到LmbZIP25基因(OR551766),其编码191个氨基酸,具有典型的bZIP家族结构,在bZIP结构域中与其他植物同源性较高。LmbZIP25基因具有组织特异性,在茎中的表达量显著高于花和叶,在七个花期中黄色花蕾期的表达量最高。结论克隆得到LmbZIP25基因全长,分析其在不同器官和不同花期的表达差异,为进一步探索其在灰毡毛忍冬中花发育中的功能奠定了研究基础。

灰毡毛忍冬MADS-box基因家族鉴定与CMB1基因克隆

目的鉴定灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因并进行生物信息学分析与表达模式验证,克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬MADS-box家族成员CMB1全长。方法基于转录组数据,利用在线工具对灰毡毛忍冬MADS-box进行生物信息学分析,并利用qRT-PCR验证MADS-box基因在不同品种中的表达模式,通过RT-PCR、RACE技术克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬CMB1基因全长。结果28个灰毡毛忍冬MADS-box蛋白长度为89~359 aa,碱性蛋白占比85.7%,不稳定蛋白占比96.4%,亲水性蛋白占比96.4%,均定位于细胞核,均为无跨膜结构的非分泌蛋白。转录组显示,与野生型比较,湘蕾型中28个MADS-box基因有17.86%表达下调,MIKCC型基因中有18.75%表达下调。克隆得到在两个品种的灰毡毛忍冬花中高度特异性表达的CMB1基因全长,均包含一个738 bp的ORF,编码245个氨基酸。CMB1基因在两个品种的花中表达量存在显著差异(P<0.01),且与茎、叶相比,在花中高度特异性表达(P<0.01)。结论基于灰毡毛忍冬转录组数据,鉴定了28个MADS-box家族基因,克隆得到湘蕾型与野生型灰毡毛忍冬CMB1基因全长,为进一步研究灰毡毛忍冬花发育、优良表型形成的分子机制提供研究基础与理论依据。

灰毡毛忍冬SS基因的克隆及表达分析

[目的]克隆灰毡毛忍冬SS基因全长序列,并进行生物信息学和表达模式分析。[方法]提取灰毡毛忍冬花总RNA,通过RT-PCR和RACE技术克隆LmSS基因的全长cDNA序列;运用相关软件对该基因序列进行生物信息学分析;利用qRT-PCR测定灰毡毛忍冬茎、叶和不同花期花中该基因的相对表达量。[结果]克隆的LmSS基因开放阅读框(ORF)长度为1245 bp,编码414个氨基酸,属于亲水性蛋白,定位于细胞质中,具有典型的多聚异戊二烯基合成酶活性结构域,与其他植物SS基因具有较高同源性。LmSS基因在灰毡毛忍冬不同花期和器官中表达有组织特异性。[结论]该研究成功地克隆灰毡毛忍冬中的SS基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础,同时为探究灰毡毛忍冬皂苷生物合成和调节机制提供了科学依据。

“以学生为中心”的理论维度与实践模式——以药用植物学课程的线上线下混合式金课建设为例

探索线上线下混合式教学模式,就是把“以学生为中心”的理念贯穿始终,从课程目标、教学文案设计与撰写、教学资源运用、教学过程设计、评价体系建构等方面,做到在目标设置中驱动学生、在教案撰写中理解学生、在资源共享中激发学生、在教学互动中引领学生、在评价激励中完善学生。药用植物学课程内容理论和实践兼备,线上线下融合互补,“以学生为中心”贯穿每个环节,能有效促进教学改革,提高学生自主学习能力、促进个性化学习,达到了提升教学效果、提高人才培养质量的目的。

灰毡毛忍冬与忍冬HQT2基因的克隆及表达分析

目的分别克隆灰毡毛忍冬与忍冬HQT2基因全长序列,并进行生物信息学和表达量分析,以揭示HQT2在灰毡毛忍冬与忍冬绿原酸生物合成中的可能功能。方法多糖多酚试剂盒法分别提取灰毡毛忍冬与忍冬花总RNA,通过RT-PCR和RACE技术克隆HQT2基因的全长c DNA序列,运用相关软件对该基因序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)分别测定灰毡毛忍冬与忍冬茎、叶及不同花期花中相关基因的相对表达量;采用HPLC测定绿原酸含量并结合表达量做相关性分析。结果克隆得到LmHQT2(MH196564)和LjHQT2(MK294639),其开放阅读框长度均为1296 bp,编码431个氨基酸,生物信息学分析预测为亲水性蛋白,可能定位于细胞质中,属于氯霉素乙酰转移酶样结构域超家族;qRT-PCR结果显示,HQT2基因具有组织特异性,在灰毡毛忍冬与忍冬茎、叶及不同花期花器官中表达存在差异;绿原酸含量与基因相对表达量之间呈现一定的相关性。结论本研究成功克隆了灰毡毛忍冬与忍冬HQT2基因并探索其在不同器官中的表达模式,推测HQT2基因在灰毡毛忍冬与忍冬的绿原酸生物合成途径中发挥不同功能,为进一步研究该基因的功能及探究灰毡毛忍冬和忍冬绿原酸生物合成调节机制提供了研究基础。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎的影响

目的本研究旨在探讨闹羊花毒素Ⅲ调控TLR4、MyD88和NF-κB的机制,以及闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的影响。方法RA大鼠模型通过Ⅱ型胶原诱导构建。随机将Wistar大鼠分成6组(n=8):假手术组(Sham组)、RA模型组(Model组)、阳性药物雷公藤组[TWG组,50 mg·(kg·d)^(-1)]、闹羊花毒素Ⅲ低剂量组[R-ⅢLo组,0.06 mg·(kg·d)^(-1)]、中剂量[R-ⅢMi组,0.12 mg·(kg·d)^(-1)]和高剂量组[R-ⅢHi组,0.24 mg·(kg·d)^(-1)]。测定各组大鼠的关节炎指数(arthritis index,AI);采用HE染色、ELISA、Western blot和RT-qPCR检测闹羊花毒素Ⅲ对TLR4/MyD88/NF-κB信号轴及RA的影响。结果与Model组比较,闹羊花毒素Ⅲ处理显著降低了RA大鼠的AI评分(P<0.05)。闹羊花毒素Ⅲ对滑膜组织的恶性增生和炎症细胞浸润有明显的抑制作用。与Model组比,闹羊花毒素Ⅲ各剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平降低且呈浓度依赖性(P<0.05)。与TWG组比,R-ⅢLo和R-ⅢMi组的。TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平升高(P<0.05),而R-ⅢHi组无显著差异(P>0.05)。结论闹羊花毒素Ⅲ可以通过下调TLR4、MyD88、NF-κB因子的表达水平来改善RA。本研究为利用闹羊花毒素Ⅲ治疗RA提供了一定的实验基础。

羊踯躅含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的探究羊踯躅含药血清对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)增殖和炎症因子分泌的影响和作用机制,为临床治疗RA提供理论及实验依据。方法将细胞分为空白组、模型组、雷公藤多苷组、5%和10%空白血清组及5%和10%羊踯躅含药血清组。RA-FLS经TNF-α(10 ng/mL)处理24 h以构建RA细胞模型。CCK-8检测细胞增殖情况。采用ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的含量。Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT1)、磷酸化AKT1(phosphorylated AKT1,p-AKT1)、原癌基因c-JUN、p-c-JUN、p65、p-p65、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白表达水平。结果与未用羊踯躅含药血清处理的正常RA-FLS相比,用5%和10%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性在48 h内没有明显的变化(P>0.05),而用20%和30%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的细胞增殖活性显著上升(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的细胞增殖活性均显著降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平明显下降(P<0.05)。与空白组相比,模型组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。此外,10%羊踯躅含药血清的效果比5%羊踯躅含药血清更为显著(P<0.05)。结论羊踯躅含药血清能抑制TNF-α诱导的RA-FLS增殖及促炎因子的分泌,其机制可能与调控EGFR、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、AKT和c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路有关。

基于高效液相指纹图谱及网络药理学预测分析山银花质量标志物

山银花具清热解毒、疏散风热功效,应用前景广阔。目前《中国药典》仅将绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙作为山银花质量评价指标,不能全面评价山银花质量。本研究建立了山银花HPLC指纹图谱,对29批山银花进行相似度评价,应用聚类分析和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)初步筛选出山银花8个潜在Q-Marker;通过网络药理学构建“成分-靶点-通路”网络图,进一步分析验证山银花潜在Q-Marker的有效性。本研究发现绿原酸、异绿原酸A、新绿原酸、獐芽菜苷、异绿原酸B、灰毡毛忍冬皂苷乙、咖啡酸、川续断皂苷乙可作为山银花质量标志物,其为较全面评价山银花药材质量提供了科学依据。

药食同源百合的资源分布与现代研究进展

百合是一种重要的药食同源植物,来源于百合科植物卷丹(Lilium lancifolium Thunb.)、百合(Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker)或细叶百合(Lilium pumilum DC.)的干燥肉质鳞叶,是湖南的“湘九味”药材之一。百合的化学成分复杂,主要含多糖、甾体皂苷、黄酮、氨基酸等活性成分,具有止咳祛痰、镇静催眠、抗氧化、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、降血糖等多种药理作用。百合亦药亦食,具有较高的应用价值和广阔的开发前景。本文就百合的资源分布情况、化学成分、药理作用、开发与应用现状进行了总结,以期为百合进一步资源利用提供参考.

杜仲不同部位化学成分比较

目的比较杜仲叶、皮、果荚、雄花化学成分。方法采用UPLC-MS/MS法进行定性分析,HPLC法测定桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、芦丁、紫云英苷、槲皮素的含量。结果共鉴定出97个化合物,包括木脂素类17个、黄酮类20个、苯丙素类16个、环烯醚萜类11个、其他类33个。杜仲叶所含成分最多,雄花其次,皮最少;苯丙素类成分在叶中最多,果荚中其次,皮中最少。木脂素类成分在皮中含量最高,叶中其次,果荚中最低;黄酮类成分在叶中含量最高,雄花中其次,皮中最低;环烯醚萜类成分在果荚中含量最高,雄花中其次,皮中最低。结论该方法稳定可靠,可为杜仲不同部位综合开发和质量评价提供有效的数据支撑。

莲生物碱生物合成途径及相关基因研究进展

莲的多个部位均可作药,其中苄基异喹啉类生物碱是荷叶、莲子心的主要活性成分。荷叶含有荷叶碱、莲碱等阿朴啡类生物碱,具有良好调脂减肥作用;莲子心中主要含有甲基莲心碱、莲心碱等双苄基异喹啉类生物碱,可抗心律失常。近年来,莲生物碱成分的显著药理活性及荷叶与莲子心的“同源异效”现象,激发越来越多研究工作者开展莲生物碱生源合成途径及关键酶研究。为此,本文综述了荷叶、莲子心生物碱成分类型、生物碱合成途径及关键酶基因研究进展,以期为解析莲的生物碱合成途径及荷叶、莲子心的药效分化分子机制提供参考。

基于HPLC指纹图谱及网络药理学的杜仲质量标志物预测分析

通过建立杜仲不同部位HPLC指纹图谱分析方法,结合网络药理学预测杜仲潜在质量标志物。基于中药质量标志物(Q-Marker)的理论依据,结合指纹图谱和网络药理学对杜仲Q-Marker进行初步预测分析,对63批杜仲不同部位样品进行相似度评价,同时分别进行主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA);通过网络药理学筛选杜仲相关成分的靶点和通路,构建“成分-靶点-通路”网络图,预测杜仲的Q-Marker。本研究建立了63批杜仲不同部位的指纹图谱,相似度均大于0.900,经筛选得到8个化合物,173个靶点,包括PIK3R1、HRAS、AKT1、EGFR、SRC等11个核心靶点,涉及氨代谢、癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、癌症蛋白聚糖、PI3K-Akt信号通路、卵巢类固醇生成等主要通路,并构建成分-靶点-通路图。预测绿原酸、芦丁、京尼平苷为杜仲叶潜在Q-Marker,桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷为杜仲皮潜在Q-Marker,京尼平苷酸、京尼平苷、桃叶珊瑚苷为杜仲雄花潜在Q-Marker,将绿原酸、京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷为杜仲果荚潜在Q-Marker。

灰毡毛忍冬UGTPg17、UGTPg36基因克隆及功能研究

克隆灰毡毛忍冬糖基转移酶UGTPg17、UGTPg36基因,并进行其不同花期表达量与皂苷含量相关性分析。根据灰毡毛忍冬转录组Unigene序列设计特异性引物进行UGTPg17、UGTPg36克隆;使用生物信息学网站对克隆的UGTPg17、UGTPg36编码蛋白进行理化性质、蛋白结构和进化关系等分析;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析基因在不同花期表达情况;HPLC法测定灰毡毛忍冬皂苷含量;利用SPSS分析基因表达量与皂苷含量相关性。UGTPg17、UGTPg36基因开放阅读框长度分别为1410 bp、1428 bp,分别编码469、475个氨基酸,分别包含4、7个糖基化位点,均属于不稳定、亲水性蛋白,不具跨膜区域;UGTPg36蛋白不存在信号肽序列,UGTPg17蛋白平均S值>0.5,推测其可能含有信号肽。UGTPg17、UGTPg36在不同花期中表达均为上升趋势,皂苷含量在不同花期中存在波动,两者相关性分析得出,2个UGT基因与皂苷含量呈极显著负相关。成功从灰毡毛忍冬中克隆了UGTPg17、UGTPg36基因,其在不同花期表达存在差异性,且相关性分析表明UGTPg17、UGTPg36基因与灰毡毛忍冬皂苷生物合成相关,为进一步探索其具体功能奠定了基础。

不同提取方法中白术挥发油成分的比较研究

目的:对不同提取方法所得的白术挥发油成分进行比较研究。找出一种更利于白术挥发油提取的方法。方法:采用GC-MS对水蒸气蒸馏法、超声波溶剂提取法和超临界CO2萃取法所得白术挥发油成分进行分析。结果:水蒸气蒸馏法挥发油得率为1.01%,共有18个峰鉴定15个;超声波提取法得率为1.60%,分离得24个峰鉴定20个;超临界CO2萃取法挥发油得率为2.32%,共得49个峰鉴定37个。挥发油中以苍术酮(Atractylon)含量最高,3种方法所得挥发油的已鉴定峰中有12个共有成分。结论:3种不同提取方法所得的白术挥发油成分存在差异但也有共同特征,超临界CO2萃取法提取白术挥发油得率更高,成分更加全面。

灰毡毛忍冬与正品金银花的绿原酸含量比较

目的 :从有效化学成分绿原酸的含量评价灰毡毛忍冬的药用价值 ,以合理开发利用这一丰富的自然资源。方法 :采用高效液相色谱法比较湖南产灰毡毛忍冬与山东省和河南省产的正品金银花 (忍冬 )的绿原酸的含量。结果 :湖南省隆回县和新宁县产的灰毡毛忍冬中绿原酸含量分别为 4 0 0 %和 4 5 2 % ,山东省和河南省产的金银花中绿原酸的含量分别为 2 2 0 %和 2 4 6 %。结论 :灰毡毛忍冬中绿原酸的含量远远高于忍冬花。

鱼腥草不同品系质量的比较研究

目的 比较不同品系鱼腥草质量的差异。方法 定期取样测定甲基正壬酮的含量以及水分、灰分、浸出物的含量 ,收获时测定小区产量并进行方差分析。结果 不同品系鱼腥草的甲基正壬酮含量和单位面积总量差异显著 ,农艺性状和产量也有较大差异。结论 青茎品系植株高大 ,产量略高 ,红茎品系鱼腥草挥发油中甲基正壬酮含量和单位面积总量均明显高于青茎品系 。

人工栽培黄花石蒜最适遮光度和最佳采收加工方法的研究

目的:确定人工栽培黄花石蒜最适遮光度及最佳采收加工方法。方法:采用HPLC法对不同遮光处理的和不同采收加工方法的人工栽培的黄花石蒜花中加兰他敏含量进行比较分析,从而确定其最适遮光度和最佳采收加工方法。结果:不同遮光处理的人工种植黄花石蒜花中加兰他敏含量分别为:20%遮光0.110%,40%遮光0.138%,60%遮光0.144%,80%遮光0.122%;不同采收期的分别为:花蕾期0.104%,始开期0.117%,盛开期0.128%,枯萎期0.139%;不同加工方法处理的分别为:晒干0.086%、烘干0.115%、阴干0.118%。结论:生产上人工种植黄花石蒜花期以60%遮光度为最适;盛花期及其后的枯萎期是人工种植的最佳采收期,以烘干方法干燥为最佳。

中药材金樱子及其炮制品的质量研究

目的 对中药材金樱子及其炮制品金樱子肉的水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物等质量方面进行全面和系统的研究。方法 按2000版中国药典一部附录ⅨH水分测定法第一法、附录ⅨK灰分测定法、附录ⅩA浸出物测定法。结果 中药材金樱子和炮制品金樱子肉的含水量均不超过10％;中药材金樱子灰分不高于4.10％,酸不溶性灰分不高于0.40％;炮制品金樱子肉灰分不高于6.00％,酸不溶性灰分不高于0.15％;中药材金樱子水溶性浸出物量不低于30.00％,炮制品金樱予肉水溶性浸出物量不低于40.00％;中药材金樱子90％乙醇浸出物量不低于30.00％,炮制品金樱子肉90％乙醇浸出物量不低于40.00％。结论 可作为建立和完善金樱子的质量标准体系和新版中国药典参考的数据资料。

湖南省大宗道地药材的资源概况

湖南省发展大宗道地药材具有气候条件优越,种植历史悠久,生产基地初具规模,销售网络较为完善,各地政府重视,群众积极性高,科技普及面较广,初具深度加工和产品开发能力等优势,本文还总结了生产中存在的问题,并对湖南省发展大宗道地药材生产提出了合理建议。

不同施肥措施对百合中总皂苷元含量的影响

目的采用不同施肥方式,研究其对百合中总皂苷元含量的影响。方法采用分光光度法,高氯酸作为显色剂,在408 nm处测吸光度值。结果各药材总皂苷元含量为0.291 mg/g^0.836 mg/g,其中以尿素+三元素复合肥+0.1%钼酸铵进行施肥处理的百合中总皂苷元含量最高。在48.68μg^97.38μg范围内薯蓣皂苷元回归方程为:Y=-0.127 4+1.774X,r=0.998 5。结论不同施肥措施对百合中总皂苷元含量影响不同。