兽用中化药生产企业GMP监督检查情况分析与思考

对近年来中国兽医药品监察所组织实施的兽用中化药企业GMP监督检查发现的缺陷项目进行统计和分析,研究企业在生产质量管理中存在的主要问题并提出建议,以期帮助兽药生产企业提高自身GMP执行水平,确保产品质量,并为兽药监管部门提供参考。

甲磺酸瑞波西汀体外颉颃塞内卡病毒的研究

【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(SenecavirusA,SV A)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA化合物体外筛选平台。从FDA批准上市药物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的化合物,并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性,通过反映乳酸脱氢酶(LDH)释放水平的细胞毒性试验进而确定其最大无毒浓度。针对病毒感染周期的吸附、入胞、复制和组装释放等4个主要过程,采用不同的细胞处理方法和实时荧光定量RT-PCR、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、蛋白免疫印迹(Western blotting)和病毒滴度测定(TCID_(50))等技术进行化合物分子额顽机制研究。【结果】从包含127种分子的FDA获批上市药物库中筛选出8种候选抗SVA活性分子,通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测,鉴定出1种安全、有效的化合物——甲磺酸瑞波西汀。在病毒感染细胞36h内甲磺酸瑞波西汀可使SVA VP3蛋白表达量和病毒滴度均极显著下降(P<0.01)。甲磺酸瑞波西汀处理金黄仓鼠肾细胞(BSR-T7/5)可减少SVA的吸附和入胞;实时荧光定量RT-PCR也显示甲磺酸瑞波西汀能抑制SVA的组装阶段,但它对SVA的复制和释放阶段没有影响。【结论】本试验从FDA批准上市药物库中筛选出了1种细胞毒性较低且颉SVA效果优异的化合物一—甲磺酸瑞波西汀,该化合物通过抑制SVA的吸附、入胞和组装阶段来对抗SVA感染。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。

河豚毒素检测方法的研究进展

河豚毒素是钠离子通道阻断剂,是一种强海洋神经毒剂。由于其在医学、军事等领域有广阔的应用前景,一直受到国内外学者的关注。作者对河豚毒素的检测方法进行了综述。

游走罐疗法在小儿邪在卫分型风温病中的临床效果

目的:观察游走罐疗法在小儿邪在卫分型风温病中的临床效果。方法:选取2022年6月—2023年9月惠州市中医医院收治的邪在卫分型风温病患儿60例作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各30例。对照组接受标准对症治疗,观察组加用游走罐疗法治疗。比较两组退热时间、治疗总有效率、中医证候评分。结果:观察组退热时间短于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.037)。治疗前,两组中医证候评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组中医证候评分均低于治疗前,观察组低于对照组(P<0.001)。结论:游走罐疗法在小儿邪在卫分型风温病中的应用效果较好,可缩短小儿外感发热时间,减轻患儿症状。

土拉杆菌病特征及其国内外流行状况

本文简要综述了土拉杆菌病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化等特征以及诊断方法和治疗措施,介绍了该病在国内外的流行状况。土拉杆菌病在国外主要流行于北美和北欧地区。我国的土拉杆菌病自然疫源地主要集中在西藏地区,近年来人间报道病例极少,动物土拉杆菌病仅有零星散发。我国应对啮齿类经济动物和水貂等进行病原学流行病学调查,并对土拉杆菌有较强抵抗力的动物进行血清流行病学调查,根据调查结果及时提出土拉杆菌病向人间传播的预警。

基于Aspice的汽车软件开发流程实践

Aspice模型是基于CMMI模型提出的专门针对汽车类软件开发的一种模型,旨在帮助汽车企业提高软件开发的质量及效率。文章基于Aspice模型细化了常规的V开发模式,利用RTC丰富的统计功能实现对项目的监控和管理,并提出了一种自动化的集成方式。

奶牛皱胃左方变位诊治报告

本文介绍了两例奶牛皱胃左方变位的主要临床特征、诊断特点、手术治疗的方法与效果。结合临床的观察,对皱胃变位在听诊、叩诊、直肠检查及全身症状表现等方面的特征做了比较详尽的论述。

远程视频检查在我国兽药监管领域的应用

因受新冠肺炎疫情或动物试验场所动物防疫制度要求的影响,兽药GMP/GCP/GLP检查员无法赴被检查单位或其动物试验场所所在地开展现场监督检查工作的难题,农业农村部畜牧兽医局于2022年4月提出“兽药远程视频监督检查”新思路,创新监管方式,助力我国兽药生产企业早日获得生产许可资质,兽药研发机构尽快投入研发工作。论文详细介绍了我国兽药监管领域远程视频检查的背景和应用情况,对兽药远程视频检查的优势及存在的问题进行分析,并就远程视频检查的推广应用提出建议,为在农业农村系统行政执法中普及远程视频检查提供参考与借鉴。

兽药非临床安全性评价研究单位现场检查缺陷项目分析

兽药非临床研究工作是兽药研发过程中的重要环节。本文对兽药非临床安全性评价研究单位现场检查中发现的缺陷项目进行归纳统计,分析问题产生的主要原因,并提出改进建议,以期为兽药非临床安全性评价研究单位提升质量管理水平和管理部门科学监管提供参考。

奶牛皱胃左方变位的手术治疗与术后护理

本文介绍了奶牛皱胃左方变位的主要临床特征、诊断特点、手术治疗的方法与效果。结合临床的观察,对皱胃变位在听诊、叩诊、直肠检查及全身症状表现等方面的特征做了比较详尽的论述。并对皱胃变位与奶牛年龄、胎次、病程长短等因素与手术效果、术后护理应注意的问题,进行了探讨。

采用圆柱形永磁体的汽车电子排挡的开发

在库仑模型的基础上,采用数值分析方法建立了汽车电子排挡系统中圆柱形永磁体的磁感应强度分布模型,并结合开关型霍尔传感器的触发特性,开发了一种汽车电子排挡系统电路辅助仿真设计软件,该软件可为设计者提供传感器布局的辅助决策,从而减少设计时间和成本。最后,将所建立的磁场模型和仿真设计软件应用于两款汽车电子排挡系统电路的设计开发,验证了模型的正确性和软件的有效性。

相思子毒素-a的纯化及鉴定

采用硫酸铵分级分离法和凝胶层析法,从相思子种仁中分离纯化出一种毒蛋白P1′。凝胶薄层扫描测得纯度≥97%;SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量为64300;经β-巯基乙醇处理,P1′分离为A、B 2条链,相对分子质量分别为29100和35400;经腹腔注射,小鼠LD50为2.11μg/kg;P1′质量浓度≥3.91 mg/L时,可凝集兔红细胞;P1′的B链N末端8个氨基酸序列为:I-V-E-K-S-I/L-I-N,与相思子毒素-a(abrin-a)和相思子毒素-b(abrin-b)同源性较高,为75%;肽质量指纹谱(PMF)分析表明,P1′与abrin-a匹配强度最高,为86%,与abrin-b、相思子毒素-c(abrin-c)和相思子毒素-d(abrin-d)匹配强度均为10%,表明毒蛋白P1′为abrin-a。abrin-a经1%甲醛减毒处理制备类毒素,家兔5次免疫后获得了效价高、特异性较强的抗血清。

人参皂苷Rh_2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-l细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理。结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-l细胞的增殖存在抑制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半数抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡。

相思子毒素-a双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用

以已制备的抗相思子毒素-a(abrin-a)的单克隆抗体(McAb)4G1和兔源多抗建立了abrin-a双抗体夹心ELISA法。abrin-a质量浓度在15.62~250.00μg/L的范围内,质量浓度的对数值与其D450值呈直线相关,回归方程为y=1.0467x+0.5277(R2=0.9992,n=5),检测灵敏度为7.81ng/mL。该法与相思子凝集素、蓖麻毒素(ri-cin)和蓖麻凝集素无交叉反应。经初步用于人工污染abrin-a香肠样品和自来水样品检测,回收率分别为92.0%和85.0%,变异系数(CV)<6%。表明该检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,可望用于食品、饲料和饮用水中abrin-a检验。

黄曲霉毒素B1免疫检测方法的新进展

黄曲霉毒素是迄今发现毒性最强的一类生物毒素,包括AFB1、AFB2、AFB2a、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2、AFQ1、AFQ2a等10余种毒素。作者介绍了黄曲霉毒素B1和M1抗体制备和检测方法的研究进展,通过对各种检测方法优缺点的比较分析,得出结论:寻求安全、快速、准确和经济的检测方法已成为黄曲霉毒素研究中亟待解决的任务之一。

牛布鲁氏菌四种血清学检测方法的比较

[目的 ]为在布鲁氏菌病临床检疫中选择可靠的血清学检测方法提供参考。[方法 ]对采集的294份牛血清样品用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和补体结合试验(CFT)进行布鲁氏菌病抗体检测,比较RBT与ELISA,SAT与CFT的符合率及Kappa值,以CFT作为判定标准,比较四种检测方法的敏感性和特异性。[结果 ]RBT与ELISA、SAT与CFT检测方法的符合率高达到95%以上,且Kappa值均大于0.75。以CFT作为判定标准,RBT和ELISA的敏感性较好,但有假阳性;SAT的特异性较好,但有假阴性。综合比较认为ELISA的敏感性和特异性都比较理想。[结论 ]临床工作中使用RBT或ELISA对布鲁氏菌病进行初筛,用CFT进行复核确诊,通过两种或两种以上的血清学检测方法联合诊断,结果较为理想。

中药抗病毒性疫病作用机制研究进展

病毒性疫病作为一类具有高度传染性的疾病,目前尚缺乏理想的抗病毒药物,而中药因其独特的病毒病防治视角,成为近年来我国学者们研究的热点。研究显示,多种中药及其有效成分对病毒有一定的抑制作用。本文结合病毒性疫病发病机理与近年来抗病毒中药研究成果,对中药的抗病毒机制进行阐述,以期为多方位、多靶点、天然低毒兽医临床抗病毒药物的研发提供帮助。

应用无张力疝修补术治疗腹股沟斜疝围手术期护理30例分析

目的:为避免无张力疝修补术治疗腹股沟斜疝术后复发,减少术后并发症,促进早日康复。方法:总结30例无张力疝修补术患者的护理经验,并随访观察长期疗效。结果:术后随访1～5年,术后5年无复发。结论:完整、及时的围手术期护理是无张力疝修补术成功的重要保证。

相思子毒素-a单克隆抗体的制备与鉴定

用含1%甲醛的磷酸盐缓冲液对相思子毒素-a(abrin-a)减毒处理制备类毒素,以类毒素为免疫抗原分4次免疫3只BALB/c小鼠。采用聚乙二醇(PEG)法,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选分泌抗abrin-a的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。将阳性细胞株接种BALB/c小鼠制备McAb腹水,根据亚类鉴定结果,分别采用蛋白A或蛋白G亲和层析柱纯化腹水,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测McAb特异性,Western-blot法分析McAb抗原识别位点。结果获得1G5、3C2和4G1共3株McAb杂交瘤细胞株,均为抗abrin-a的特异性McAb,与相思子凝集素、蓖麻毒素(ricin)和蓖麻凝集素均无交叉反应,其中4G1为特异性结合abrin-a A链的McAb,1G5和3C2两株为特异性结合abrin-a B链的McAb;制备的McAb可用于abrin-a含量的检测。

甲醇汽油金属腐蚀抑制剂的研究

通过实验筛选出能够解决甲醇汽油腐蚀金属腐蚀抑制剂,并探讨了其缓蚀机理。通过单因素实验筛选出单一的缓蚀剂,并对筛选出的缓蚀剂进行复配制得复合缓蚀剂。当试液pH=3,水浴温度T=40℃,复合缓蚀剂用量为200 mg/L时,缓蚀剂对金属试片有较好的缓蚀效果,缓蚀率可达到80%左右。该研究制得的金属腐蚀抑制剂对金属试片有很好的缓蚀效果。