荧光定量PCR与半定量PCR检测HBVDNA的对比分析

目的对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBVDNA的载量,为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。方法取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测,结果作统计学分析。结果两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异(χ2=1.75,P>0.05)。结论临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量PCR法检测血清HBVDNA的载量。

三氧化二砷对哮喘小鼠肺组织IκB-α表达和核因子κB激活的作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活和抑制蛋白IκB-α表达的影响,探讨As2O3抗炎作用的可能机制以及哮喘防治的新思路。方法BALB/c小鼠36只随机分为对照组、哮喘组(卵蛋白末次激发后1,4,12和24h)和As2O3治疗组(4mg/kg),每组6只。Diff-Quick染色观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中嗜酸细胞募集特点,电泳迁移率实验和免疫印迹实验分别检测肺组织NF-κB活性和IκB-α表达水平。结果①哮喘组BALF中嗜酸细胞募集[(48.72±5.38)%]较对照组[(0.56±0.21)%]增加(q=33.46,P<0.01),治疗组较哮喘组减少(q=34.65,P<0.01)。②哮喘组肺组织NF-κB活性均较对照组增加(q=41.84,72.75,61.61,16.32,P<0.01或0.05),以4h活性最高,治疗组较哮喘组减少(q=89.48,P<0.01)。③哮喘组肺组织IκB-α表达较对照组减少(q=30.94,P<0.01),治疗组较哮喘组增加(q=23.67,P<0.01)。④BALF中嗜酸细胞募集、肺组织NF-κB活性与IκB-α表达水平均呈负相关(r=-0.82,-0.94,P<0.01)。结论肺组织NF-κB过度激活可能是哮喘慢性气道炎症持续存在的基础;诱导肺组织IκB-α表达和抑制NF-κB激活,可能是As2O3发挥广泛抗炎作用的重要机制。

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡的影响及其作用机制。方法 :豚鼠 30只随机分为 3组 ,即对照组、哮喘组和As2 O3(2mg/kg)治疗组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记 (TdT mediateddUTPnickendlabelling ,TUNEL)技术原位标记细胞凋亡 ;计算机图像分析技术对气道壁EOS浸润和EOS凋亡进行定量测定。结果 :对照组豚鼠气道壁EOS计数 (4 4± 2 5 )个 /HP ,EOS凋亡指数为 (0 4 2± 0 0 8) % ;与对照组比较 ,哮喘组豚鼠气道壁EOS浸润显著增加 (P <0 0 1) ,EOS凋亡指数显著下降 (P <0 0 1) ;As2 O3治疗组 ,气道壁EOS浸润显著下降 (P <0 0 1) ,EOS凋亡指数显著增加 (P <0 0 1) ,并且气道壁EOS浸润数量与EOS凋亡指数之间呈显著性负相关 (r =- 0 94 9,P <0 0 1)。结论 :EOS凋亡异常是支气管哮喘的一个重要的发病机制 ;As2 O3通过促进肺内EOS凋亡 ,下调EOS浸润数量 ,从而减轻了哮喘气道炎症 ;小剂量As2 O3治疗哮喘既有效又相对安全 ,具有潜在的应用价值。

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内核因子-κB表达的影响

目的：研究Ａｓ２Ｏ３对哮喘豚鼠肺内核因子－κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢ，ＮＦ－κＢ）表达的影响及其作用机制。方法：豚鼠３０只随机分为３组，即对照组、哮喘组和Ａｓ２Ｏ３（２ｍｇ／ｋｇ）治疗组。采用免疫组织化学染色技术，即小鼠抗大鼠ｐ６５单克隆抗体（Ｆ－６）、生物素化马抗小鼠ＩｇＧ、二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色检测豚鼠气道壁ＮＦ－κＢ；计算机图像分析技术对气道壁ＮＦ－κＢ表达进行定量检测。结果：对照组豚鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个ＮＦ－κＢ阳性（ＮＦ－κＢ＋）细胞网络，其中支气管壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度为（２２０±７２）／ｍｍ２上皮面积；与对照组相比，哮喘组豚鼠气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著增加（Ｐ＜０．０１）；哮喘豚鼠经Ａｓ２Ｏ３处理后，气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著下降（Ｐ＜０．０１），但与对照组相比仍较高（Ｐ０．０１８）。结论：ＮＦ－κＢ激活增加是支气管哮喘重要的发病机制之一；下调肺内ＮＦ－κＢ激活细胞数量可能是Ａｓ２Ｏ３治疗哮喘的一个重要机制。

胃镜污染HBV、HCV和HIV的调查

目的 检测胃镜常规清洗消毒后HBV、HCV、HIV污染残留状况.方法 随机取样.巢式聚合酶链反应法检测HBV DNA,逆转录巢式聚合酶链反应法检测HCV RNA、HIV RNA,放免法检测HBsAg.结果 对605例标本进行检测,未检出阳性标本.结论 胃镜经常规消毒后未检到HBV、HCV和HIV的污染,但进一步规范胃镜消毒操作方法,提高消毒质量,意义重大.

“引厂驻校、产教融合”办学模式的探索与实践

校企合作是当前高职院校教育改革的关键,工学结合的教学模式是培育合格职业人才的方向。校企合作-引厂驻校:校企优势互补、资源共享、合作共赢、共同发展,办学实力明显提高;工学结合-产教融合:实践"订单培养、做学合一"的人才培养模式,创建真实工作的生产性实训环境,建立校企合作运行机制,校企共同施教,形成具有自身特点的高素质技能型人才培养模式,探索了一条可持续发展的特色之路。

肺炎衣原体膜表面蛋白重组质粒的构建

目的构建表达肺炎衣原体膜表面蛋白(OMP)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白.方法用高保真PCR方法从肺炎衣原体扩增OMP片段,双酶切后插入原核表达质粒pQE 30,在大肠杆菌M15中表达.结果 重组质粒经双酶切鉴定与目的基因长度相符;各表达蛋白经SDS PAGE分析,相对分子量与文献相符.结论 该重组质粒可用于核酸疫苗的备选质粒,基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于肺炎衣原体检测试剂盒的制备.

小剂量三氧化二砷治疗对哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞凋亡和核因子—κB表达的关联研究

目的：研究小剂量三氧化二砷（As2O3）对哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞（EOS）凋亡和核因子－κB（NF-κB）表达的影响作用及其相关性，探讨小剂量As2O3治疗哮喘的可能机制。方法：豚鼠30只随机分为3个组，即对照组、哮喘组和As2O3(2mg/kg）治疗组。采用TUNEL技术原位标记细胞凋亡；免疫组织化学染色技术检测豚鼠气道壁NF－κB；计算机图像分析技术对气道壁EOS凋亡和NF－κB表达进行定量检测。结果：对照组豚鼠支气管壁EOS凋亡指数（AI）为（0．43±0．08）％，整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NF－κB^+细胞网络，其中支气管壁胞核NF－κB^+细胞密度为（222±70）个／mm^2上皮面积；与对照组相比，哮喘组豚鼠支气管壁EOS凋亡指数显著下降（P＜0．01），胞核NF－κB^+细胞密度显著增加（P＜0．01）；哮喘豚鼠经As2O3处理后，支气管壁EOS凋亡指数显著增加（P＜0．01），胞核NF－κB^+细胞密度显著下降（P＜0．01），但与对照组相比仍较高（P＜0．05），并且三组气道壁EOS凋亡指数与胞核NF－κB^+细胞密度之间均呈显著性负相关（γ=-0.93和－0．91，P＜0．01）。结论：EOS凋亡异常与NF－κB激活增加密切相关；下调气道NF－κB激活细胞数量，促进EOS凋亡，可能是As2O3治疗哮喘的一个重要机制。

三氧化二砷对哮喘小鼠肺内树突状细胞的影响

目的 :研究不同浓度三氧化二砷 (arsenictrioxide ,As2 O3)对哮喘小鼠肺内树突状细胞 (dendriticcell,DC)分布、募集的影响及其作用机制。方法 :BALB/c小鼠 5 0只随机分为 5组 ,即对照组、哮喘组、低剂量 (1mg/kg)As2 O3组、中剂量 (5mg/kg)As2 O3组和高剂量 (10mg/kg)As2 O3组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道DC ;计算机图像分析技术对DC进行定量测定 ;扫描电镜分析DC形态。结果 :对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NLDC -14 5 +DC网络 ,NLDC -14 5 + DC密度从大气道到小气道分别为 (5 0 0± 5 0 )个 /mm2 到 (60± 10 )个 /mm2 上皮面积 (P <0 0 5 ) ,扫描电镜下DC呈典型的树突状形态 ;哮喘组小鼠肺内NLDC -14 5 + DC密度较对照组显著增加 (P <0 0 1) ;哮喘小鼠经As2 O3处理后 ,肺内DC密度皆显著下降 (P <0 0 1) ,但三种不同浓度砷剂处理组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :下调肺内DC数量可能是As2 O3治疗哮喘的一个重要机制 ;低剂量As2 O3治疗哮喘既安全又有效 ,具有潜在的应用前景。

编码N端截短的IκBα突变体重组腺病毒的构建与鉴定

目的:通过去除N端丝氨酸32/36磷酸化位点,获得人胎盘组织IκBα突变体(IκBαM)基因,构建其复制缺陷型重组腺病毒(AdIκBαM),并进行体外表达和活性检测。方法:PCR定点克隆IκBαM基因(203-1003bp),亚克隆至pShuttle和pGEM-T,进行PCR、双酶切、DNA测序和同源性分析。将重组质粒pShuttle-IκBαM中含CMV启动子、IκBαMcDNA和PolyA信号的表达单元定向插入Ad5腺病毒载体,构建成重组腺病毒AdIκBαM,再经脂质体介导共转染293细胞进行包装。Western blotting检测AdIκBαM在293细胞中蛋白表达情况,电泳迁移率实验观察AdIκBαM抑制佛波酯诱导的ECV304细胞核因子κB(NF-κB)激活的作用。结果:成功克隆长801bp的新型IκBαM基因,与Gen Bank中登陆的IκBα基因(接受号M69043)相应核苷酸序列一致。所制备的AdIκBαM滴度为4.0×1012pfu/L。AdIκBαM介导IκBαM基因在293细胞中表达,并以剂量依赖性方式显著抑制佛波酯诱导的ECV304细胞NF-κB活化。结论:AdIκBαM有效介导IκBαM基因表达并特异性抑制NF-κB活性,有望应用于哮喘的基因治疗。

三氧化二砷对哮喘小鼠肺内树突状细胞作用的研究

目的:研究哮喘小鼠肺内树突状细胞(DC)分布、募集的特点及三氧化二砷(As_2O_3)对其的影响。方法:将 BALB/c 小鼠30只随机分为3组,即对照组、模型组和 As_2O_3组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道 DC;计算机图像分析技术对 DC 进行定量检测。结果:对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个非淋巴样树突状细胞(NLDC)-145^+DC 网络,NLDC-145^+DC 密度从大气道到小气道分别为(500±50)个/mm^2到(60±10)个/mm^2上皮面积(P<0.05);模型组小鼠肺内 NLDC-145^+DC 分布与对照组相似,但密度较对照组显著增加(P<0.01);As_2O_3组小鼠肺内 NLDC-145^+DC 分布与模型组相似,但密度显著下降(P<0.01)。结论:树突状细胞在整个肺组织构成了一个完整的 NLDC-145^+DC网络;下调肺内 DC 密度,而不影响其肺内分布,可能是 As_2O_3治疗哮喘的一个重要机制。

纳黔高速公路雾区交通安全保障措施研究

纳黔[石坝(黔川界)—纳溪]高速公路赤水—叙永段位于川黔交界,为盆地与云贵高原过渡带,受地形限制,桥隧结构多、道路线形复杂、坡陡弯急、浓雾等恶劣天气偏多,使该路段成为交通事故可能频发的潜在"黑点"路段。文中分析了纳黔高速公路雾区的特征,根据驾驶员雾区驾驶特性和事故特征,制定了相应的诱导管理等安保措施,以确保该路段行车安全,最大程度降低事故损失,提高雾区交通安全性和运营效率。

黄芪多糖和黄芪总甙调控LX-2细胞因子分泌

目的:用黄芪多糖和黄芪总甙对LX-2细胞分泌的与纤维化相关的主要细胞因子进行研究,以探讨黄芪抗纤维化的确切分子机制。方法:不同浓度的黄芪多糖和黄芪甙作用于LX-2细胞,以Real Time Cell Electronics Sensing技术实时检测细胞增殖状态;分别再以25μg/ml和300μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙作用LX-2细胞24 h,提取细胞mRNA,以荧光定量PCR测定转化生长因子1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA的变化。结果:300μg/ml的黄芪多糖可抑制LX-2的增殖(P<0.05,94.7 h),但不同浓度的黄芪总甙对LX-2细胞均有促进增殖的作用(P<0.05);25μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙在TGF-β1促进分泌的同时,也上调其它抗纤维化因子,其中黄芪多糖对MMP2的上调(104.9倍)、黄芪总甙对IL-10的上调(550.65倍)最为显著;300μg/ml的黄芪多糖可抑制TGF-β1及HGF、MMP9、IL-10的表达,但仍然上调MMP2的表达,300μg/ml的黄芪总甙也可抑制TGF-β1的表达,但对抗纤维化因子MMP2、MMP9及IL-10仍有明显的上调作用。结论:低浓度(25μg/ml)和高浓度(300μg/ml)的黄芪多糖和黄芪总甙可通过不同的分子机制调控肝星状细胞因子的分泌而发挥抗纤维化作用;黄芪多糖主要以促进MMP2分泌为主,而黄芪总甙则主要通过上调MMP2、MMP9及IL-10的分泌而发挥作用。高剂量的黄芪多糖和总甙抗纤维化效果优于低剂量组。

喉罩通气全麻支气管镜下高频电灼联合冷冻治疗气管错构瘤2例并文献复习

气管狭窄有多种病因,其中气管错钩瘤是其原因之一。气管错构瘤属于腔内型错构瘤,在临床上比较少见。传统的治疗方法是外科手术切除。近10年来,随着内窥镜介入治疗技术日臻成熟，为气管狭窄的治疗提供了新的方法。本文通过分析南京医科大学第一附属医院呼吸科收治的2例气管错构瘤，并复习国内相关文献，旨在提高对气管错构瘤介入治疗的认识。

脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1～ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。

基于悬浮芯片技术的56种病原微生物的高通量检测

目的:建立高通量、快速、可靠、经济的病原微生物诊断技术平台。方法:设计和合成针对56种常见病原微生物的探针和阳性对照,采用悬浮芯片技术,对56种病原微生物的阳性标准品进行检测。结果:56种标准品的检测值显著高于阴性对照,各病原微生物的阳性标准品和各探针之间无交叉反应。结论:建立了高通量、快速、可靠、经济的病原微生物诊断技术平台,为突发传染病的病原体诊断提供技术储备。

湖州地区妇女宫颈病变人乳头瘤病毒亚型感染情况分析

目的:研究湖州地区妇女宫颈病变患者人乳头瘤病毒(HPV)感染率及型别分布情况。方法:采用悬浮芯片技术对720例湖州地区妇女宫颈分泌物或脱落细胞进行18种高危型HPV和8种低危型HPV检测。结果:720例患者中HPV感染183例,占25.42%。单一感染135例,占18.75%;双重感染33例,占4.58%;三重以上感染15例,占2.08%。183例阳性标本主要为高危型HPV 16、58型,低危型HPV 11、6型。结论:湖州地区妇女宫颈病变患者HPV感染率为25.42%,并明确了HPV 16、HPV 58为该地区宫颈病变组织中HPV主要的流行亚型。