低温对脊髓缺血再灌注损伤保护机制的研究进展

下肢截瘫或者轻度瘫痪是外科大血管手术后严重的并发症,这不仅给患者带来了身体上和精神上的沉重打击,对临床医生也是一种严峻的挑战。随着低温在改善颅脑损伤方面的广泛应用,脊髓损伤的低温保护作用也受到了极大的关注,但目前低温保护机制尚不十分清楚。本文将低温对脊髓缺血再灌注损伤保护机制的研究进展做一综述。

脂肪来源干细胞治疗心肌梗死的研究进展

心肌梗死（myocardial infarction）是冠心病的严重类型[1],其所致的细胞坏死和瘢痕形成是影响心功能的主要因素,也是导致顽固性心力衰竭乃至死亡的病理基础。目前,临床用于治疗心肌梗死的方法均只能达到改善梗死区心肌血供,而无法逆转已经坏死的心肌细胞。

成纤维细胞介导的人白介素6基因疗法增强机体免疫功能的实验研究

通过研究成纤维细胞介导的人ＩＬ－６基因疗法对机体免疫功能的影响，结果发现，高分泌ＩＬ－６成纤维细胞克隆体内移植后，能显著提高淋巴细胞增殖反应、ＩＬ－２和ＩＦＮ－ｒ产生水平以及ＮＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性，当与ＩＬ－２合用时，对ＮＫ和ＬＡＫ活性的增强作用更加明显，表明成纤维细胞能显著增强机体免疫功能，可望为肿瘤生物治疗、造血功能重建等开辟新的途径。

重组腺病毒介导IFN-γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能分析

巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞，为研究ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法，以重组腺病毒为载体将小鼠ＩＦＮ－γｃＤＮＡ转染入小鼠腹腔巨噬细胞，观察了对其体外免疫功能的影响，结果表明，ＩＦＮ－γ基因转染１８ｈ后巨噬细胞上清中存在高水平ＩＦＮ－γ，ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞杀伤活性显著增高，其分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＮＯ的水平均有不同程度的升高，表明重组腺病毒载体能将ＩＦＮ－γ基因成功地转染入巨噬细胞并增强巨噬细胞免疫效应功能。

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。

GM-CSF基因修饰的不同肿瘤瘤苗体内诱导抗肿瘤免疫功能的比较

GM-CSF作为一种重要的造血生长因子，能刺激粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的增殖分化，此外它还具有重要的免疫调节作用，尤其是其增强机体抗肿瘤免疫功能的作用近年来倍受重视。曾有报道，GM-CSF基因修饰的肿瘤瘤苗能诱导机体产生有效的保护性抗肿瘤免疫应答，在同一肿瘤模型中其作用强于用IL-2、

α黑素细胞刺激素及其类似物对内毒素休克小鼠的保护作用

目的 研究α黑素细胞刺激素 (α -NSH)及其类似物 (NDP -MSH)对内毒素休克小鼠的保护作用。方法 腹腔注射LPS 5 0 μg/kg和D -半乳糖 (D -Gal) 90 0mg/kg复制小鼠内毒素休克模型 ,研究不同剂量α -MSH及NDP -MSH在不同时间或经不同途径给药对内毒素休克小鼠生存率的影响。用常规病理切片观察α -MSH对内毒素休克小鼠重要脏器病理变化的影响。结果 未给予α-MSH的内毒素休克小鼠在 9h内全部死亡 ,经尾静脉、腹腔和皮下注射α -MSH 2 5mg/kg或 5 0mg/kg均可以起到一定的保护作用 ;给予LPS前后不同时间注射 2 5mg/kgα -MSH都可以明显延长内毒素休克小鼠起始死亡的时间 ,提高存活率 ,其中以给予LPS后 1h经腹腔给药疗效最好 ,72h的生存率达 33 3% ,但增加给药次数未见疗效提高。经腹腔注射 2 5mg/kgNDP -MSH ,小鼠平均起始死亡时间较α-MSH组延长 4h ,72h的生存率升至 44 4%。病理学检查结果表明浕 -MSH可以减轻LPS引起的肝脏、脾脏及肺脏瘀血及细胞坏死。结论 α -MSH及NDP -MSH可以减轻LPS引起的小鼠重要脏器的病理损害 。

瘤体内注射脂质体包裹的IL－2基因的抗肿瘤作用及其局部免疫机理分析

脂质体可以介导体内的细胞因子基因治疗。将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射到小鼠黑色素瘤（Ｂ１６－Ｆ１０）瘤体内，结果发现，肿瘤的生长明显受到抑制，部分小鼠的瘤体完全消退，存活期明显延长；从瘤体中分离的肿瘤细胞经Ｇ４１８筛选后产生阳性克隆，其上清中分泌有ＩＬ－２；肿瘤局部浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）具有较高的杀伤活性，揭示瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可增强肿瘤细胞的免疫原性，激活瘤体局部的抗肿瘤免疫功能。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因具有良好的抗肿瘤效果。

一种利用微小磁珠建立的免疫磁珠细胞分离方法

一种利用微小磁珠建立的免疫磁珠细胞分离方法＊马施华曹雪涛章卫平郑玲莉周正芳临床和实验研究中常需要得到纯度高、活力佳和足够数量的特定细胞群或细胞亚群，这对细胞分离技术提出了新的要求。用免疫学方法将磁珠标记至特定细胞的表面，根据细胞在磁场中的不同物理行为...

中国商陆皂甙诱生淋巴因子的能力及其抗肿瘤细胞效应的研究

采用中国商陆皂甙诱导30例正常人脾细胞,发现中国商陆皂甙不仅能诱生γ-干扰素(IFN-γ),还能诱生白细胞介素2(IL-2)及淋巴毒素(LT)。实验还证明此含有数种淋巴因子(混合淋巴因子,MLF)的制品,对人的SPC-3(人肺癌细胞株),Hela细胞(人宫颈癌细胞株)、SMMC-7721(人肝癌细胞株)、Jurkat及Molt-4细胞(人T淋巴细胞白血病细胞株)等均有不同程度的细胞毒性作用,有兴趣的是MIF对人的正常细胞(WISH细胞株)无毒性作用。

逆转录病毒介导的肿瘤坏死因子基因转染的肿瘤细胞克隆株的建立及其生物学活性的观察

以逆转录病毒为载体将小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)基因转染人小鼠黑色素瘤细胞(B16)中,经G418抗性筛选,有限稀释及培养上清中TNF活性测定,从多株阳性克隆中筛选到一株高分泌TNF的克隆株(B16-TNF_a^(+)).B16-TNF_a^(+)细胞的形态,体外增殖能力及集落形成能力与野生型B16细胞无显著差异.体内致瘤性实验表明,B16-TNF_a^(+)细胞致瘤性下降,但致瘤性高低与接种细胞数量有关.小鼠皮下接种1.25×10~4或更多细胞,肿瘤结节形成率与接种细胞数量成负相关;而接种6.25×10~3细胞的小鼠肿瘤结节形成率反而高于2.5×10~4细胞接种的小鼠.接种B16-TNF_a^(+)的荷瘤小鼠长期存活率显著高于对照组.本实验为进行肿瘤细胞靶向的TNF基因治疗奠定了实验基础.

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内诱导杀伤细胞活性及细胞因子产生的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后体内免疫效应细胞（包括ＣＴＬ、ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞）抗肿瘤活性及其分泌的细胞因子（包括ＩＬ－２、ＩＦＮ－ｒ、ＴＮＦ及ＧＭ－ＣＳＦ）水平的变化，荷瘤后第１５天小鼠脾细胞ＮＫ活性及经诱导后的ＬＡＫ活性有所降低，而经诱导后的ＣＴＬ杀伤活性显著升高，荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤活性及其分泌的ＩＬ－１水平也明显升高；在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰，实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制是因为ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内ＣＴＬ及巨噬细胞杀伤活性提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。

Mycielski图的L(2,1)-标号

设μ(G)表示一个图G的Mycielski图,λ(G)为G的L(2,1) 标号数.给出了λ(μ(G))的上、下界和λ(μ(G))达到下界(|G|+1)的一个充分条件.

腺病毒介导M-CSF,IFN-γ基因转染的腹腔巨噬细胞对体外抗肿瘤免疫功能影响的研究

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)-IFN-γ是两种与单核巨噬细胞密切有关的细胞因子．M-CSF除了准持骨髓巨噬祖细胞增殖、分化、存活之外，对于成熟的Mφ也有一定的调节作用。IFN-γ是一种较强的巨噬细胞激活因子(MAD，除了激活Mφ外，也可刺激NK，LAK细胞的活性．刺激B细胞增殖、分化，T细胞增殖等，

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内增强巨噬细胞功能的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后腹腔内巨噬细胞功能的变化。荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤性在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰；荷瘤后第１５天小鼠腹腔内巨噬细胞的吞噬能力及ＭＨＣⅡ类抗原的表达增强，抗原提呈能力增高；荷瘤后第４天及第１２天腹腔内巨噬细胞经诱导的ＩＬ－１水平出现两个高峰，经诱导的ＴＮＦ水平变化不明显。此实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制的原因之一是ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内巨噬细胞的抗原提呈能力增强及杀伤活性的显著提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。

瘤内注射脂质体包裹的IL－2基因激活免疫效应细胞及诱导细胞因子

目的：为了探讨脂质体介导的ＩＬ－２基因体内基因转移的可行性及对荷瘤小鼠全身免疫功能的激活作用及诱导细胞因子产生的效果。方法：将脂质体分别包裹ＩＬ－２基因、空白质粒及ＰＢＳ后，直接注射至黑瘤体内，１０ｄ后无菌取出小鼠脾细胞，诱导并检测肿瘤特异性杀伤细胞（ＣＴＬ）活性、ＬＡＫ活性及细胞因子的含量，用抗ＭＨＣＩａ单抗检测腹腔巨噬细胞的ＭＨＣＩ类分子的表达。结果：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，小鼠脾ＣＴＬ细胞活性明显高于瘤体内注射脂质体包裹空白质粒及ＰＢＳ的对照组，其脾淋巴细胞ＬＡＫ活性、诱导ＩＦＮ－γ等细胞因子的含量及表达ＭＨＣＩａ分子的水平均有相应的提高。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，通过在原位转染肿瘤细胞，增强了肿瘤细胞的免疫原性，诱导机体产生肿瘤特异性的ＣＴＬ以及提高机体非特异性的抗肿瘤免疫反应，发挥抗肿瘤作用。本研究为肿瘤的基因治疗的研究和应用提供了较实用的方法。

成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法促进化疗后造血功能恢复的实验研究

本实验观察了成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法对大剂量化疗后造血功能损伤小鼠的恢复作用。结果发现:接受G-CSF基因治疗的实验小鼠外周血白细胞尤其是中性粒细胞降低程度明显减弱,恢复速度明显加快;并可明显促进血小板的恢复,但作用较缓;其脾脏和骨髓CFU-GM、CFU-MK、CFU-S水平显著地高于对照组,表明成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法可显著降低大剂量化疗后造血损伤程度,并明显加速受损的造血功能的恢复。

低温联合腺苷预处理对脊髓缺血再灌注损伤后炎症因子的影响

目的观察腺苷联合深低温对大鼠脊髓缺血再灌注的保护作用及对炎症因子表达的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法将54只Sprague Dawley大鼠按电脑随机数字表法随机分为3组:常温37℃手术对照组(缺血再灌注组,n=18);低温18℃处理组(H组,n=18);腺苷+低温18℃处理组(AH组,n=18),腹主动脉夹闭前10 min尾静脉注射腺苷,用量为0.06 m L/100 g,浓度为5 mg/m L。于缺血再灌注6、12、24 h,各取6只进行行为学评分,分别取L2-L5节段脊髓组织,同时取心腔血2 m L于干燥管中,2 000 r/min离心10 min,取血清-20℃保存待测。动态测定脊髓组织及血浆中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-8浓度的变化。结果 3组行为学评分早期均有下降,随时间推移评分逐渐升高,缺血再灌注组各时间段评分均低于H及AH组,且AH组评分高于H组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果显示,H及AH组脊髓组织中IL-1β、IL-8比缺血再灌注组表达减少,且AH组低于H组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,缺血再灌注组血浆中IL-1β、IL-8表达明显高于H及AH组,AH组低于H组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腺苷联合深低温对大鼠脊髓缺血再灌注有保护作用,且保护效果优于单独运用低温处理,其可能机制是通过抑制炎症因子的表达而发挥保护作用。

P物质对刀豆素A和美洲商陆诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素的调节作用

本实验研究了不同浓度(10^(-11) ～10^(-5) mol/L)P物质(SP)在体外对刀豆素A(ConA)和美洲商陆(PWM)诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的影响。结果显示,10^(-11)～10^(-6)mol/L SP对10μg/mlPwM诱生IFN-γ没有影响。用5、2.5及1.25μg/ml ConA或PWM诱生时,10^(-9) ～10^(-5) mol/L SP可增高IFN-γ效价,10^(-7) ～10^(-5)mol/L SP作用更明显。单独加SP而不加诱生剂,未检测到IFN-γ.先加入10^(-9) ～10^(-6) mol/L SP 6h后,再加ConA诱生的IFN-γ效价,略高于同时加入10^(-9) ～10^(-6)mol/L SP时ConA诱生的IFN-γ效价。先加入10^(-5)mol/L SP,IFN-γ效价并不比同时加10^(-5) mol/L SP时增高,反而有降低的趋势.在先加入SP时,10^(-8)mol/L SP即表现出明显的增高IFN-γ效价的作用,而同时加SP,则在10^(-7)mol/L才有明显作用。

α-MSH抑制内毒素血症大鼠不同组织表达巨噬细胞移动抑制因子mRNA

目的研究α-黑素细胞刺激素 (α- MSH)对内毒素血症大鼠不同组织表达炎症反应介质巨噬细胞移动抑制因子 ( MIF)的影响 ,以探讨α- MSH的抗炎作用机理。方法 SD大鼠腹腔注射 L PS建立内毒素血症动物模型 ,静脉给予α- MSH处理 ,采用半定量 RT- PCR和 northern印迹杂交的方法 ,检测大鼠不同组织 MIF m RNA的表达。结果内毒素血症大鼠垂体、下丘脑、海马、大脑皮层及肾上腺和脾脏 MIF m RNA的表达与正常大鼠比较明显增强 ,α- MSH对大鼠垂体、海马、肾上腺和脾脏 MIF m RNA的表达具有明显的抑制作用 ,但对大脑皮层和下丘脑部位 MIF m RNA的表达无明显影响。结论α- MSH能抑制中枢神经系统和外周器官表达 MIF可能在其抗全身炎症反应中起重要作用。