筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究——Ⅱ、单抗筛选检测方法—斑点免疫结合试验的建立

比较间日疟、恶性疟和食蟹猴疟原虫可溶性抗原不同蛋白包被浓度、酶结合物稀释度以及几种混合纤维素膜的测定结果,建立和稳定DIA(斑点免疫结合试验)方法,用以检测和筛选单克隆抗体获得较好效果。与常规IFAT(免疫荧光抗体试验)比较,DIA敏感性高,抗原用量小,可用肉眼判定结果。

广东省宝安县山区采石场的疟疾传播强度

广东省宝安县樟树布采石场位于群山环绕的山坳。工棚孤立,工棚周围2—3km范围内没有居民点和家畜。常住外来民工20余人。在疟疾流行高峰季节6、7、8月,嗜人按蚊占捕获按蚊总数87.7％(1059/1207),叮人率分别为10.9、24.88、8.71只。子孢子阳性率0.54％(3/554),平均日存活率0.803,叮人习性0.476。民工带虫率45.5％(10/22),配子体阳性率13.6％(3/22)、1—2个月内疟史率50％(11/22),均为间日疟。用3种方法计算的昆虫学接种率平均分别为0.084、0.665、0.215;或者说在工棚平均居住1.5-11.9d,短者1.1d,长者21.3d,就可能感染疟疾。 根据对采石场工人感染疟疾的发病时间分析,以第一种方法计算的昆虫学接种率结果比较接近实际情况。定期监测昆虫学接种率的有关参数及其数量变化,可以预测疟疾流行趋势和发病水平。

杂交瘤技术方法的建立和融合条件的研究

通过制备抗华支睾吸虫单克隆抗体，建立和稳定了淋巴细胞杂交瘤技术方法，并对影响融合效果的融合条件进行了观察。聚乙二醇浓度、新生牛血清质量、更换ＨＡＴ培养基的时间等因素对融合效果有影响。筛选了５株分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒的建立

本文报告一种华支睾吸虫病快速诊断试剂盒。全程操作１５ｍｉｎ，内容完善，使用简便，可肉眼判断结果及用自来水洗涤。敏感性９２．１０％（４１７／４５３），假阳性率２．２５％（１１／４８８），优于常规ＥＬＩＳＡ。试剂盒重复性好，稳定性高，４℃存放有效期达６个月。初步现场使用，效果良好。

抗华支睾吸虫单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗华支睾吸虫成虫的单克隆抗体杂交瘤细胞株并进行鉴定。方法：用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫虫卵抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应，用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定位。结果：获得５株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应；５株单抗均属ＩｇＭ；单抗所识别的抗原定位于华支睾吸虫肠管壁。结论：制备的抗华支睾吸虫成虫的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。

新型的华支睾吸虫病快速—ELISA诊断试剂盒现场应用评价

为对新型的华支睾吸虫病快速－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒首次现场应用进行评价．在本病流行区选２５９名职工．以双盲法用粪便清水沉淀法进行对照检测，抗体阳性率５０．２％（１３０／２５９）．虫卵阳性率４７．５％（１２３／２５９）．两者无显著性差异。其中两法均阳性１０６例．阳性符合率８６．２％．两法均阴性１１２例．阴性符合率８２．４％．总符合率８１．２％．与我省常规ＥＬＩＳＡ法结果相近．显示试剂盒有良好的应用价值．特别适用于乡、镇卫生院。

快速ELISA、快速斑点ELISA和IHA检测华支睾吸虫病效果的比较

采用快速ELISA、快速斑点ELISA和间接血凝试验（IHA）三种方法平行检测经粪便检查虫卵阳性的华支睾吸虫病人血清152份。结果快速ELISA的敏感性为98．68％，快速斑点ELISA为对，13％，IHA为63.16％，经比较敏感性之间差异均有显著性。以三种方法检测不同感染度的病人血清时，轻度感染者（EPG＜500）以快速ELISA最敏感（敏感性为98．89％）；以三种方法同时检测非流行区健康人血清106份，结果快速ELISA的特异性为97．17％，快速斑点ELISA为94．34％，IHA为92.45％，但三种方法比较特异性差异无显著性。因此，在临床诊断和大规模的流行病学调查中，最好选用快速ELISA。

1983年深圳市疟疾暴发流行情况调查

深圳市建设特区,大量人口流动,外地传染源输入,发生间日疟暴发流行,疟疾发病率由1979年的0.22(?)升至1983年的114.3(?)。检查5种人群血液1451人,平均带虫率10.3％,平均配子体阳性率3.3％。调查4种人群病史4486人,当年1～6月疟史率10.07％。外来人口,特别是种菜工人和打石工人的疟史率和带虫率明显高于当地居民。该市有当地人口37余万,外地人口13余万,疟疾流行较重和受波及的地区有7～10万人口,预计1983年实际发病率高于疫情报告发病率。在民工住棚捕获5种按蚊共1619只,其中中华按蚊种团占99％。解剖该蚊323只,子孢子阳性率0.93％,是当地的主要传疟媒介,媒介能量1.44。后来证明,当地存在嗜人按蚊且发现唾腺阳性感染。

广东省宝安县山区采石场疟疾传播强度观察

在外来人口居住的山区孤立采石场工棚,民工带虫率45.5％、配子体阳性率13.6％、1～2个月内疟史率50％,均为间日疟。嗜人按蚊占按蚊总数87.7％、平均叮人率15.57只、子孢子阳性率0.54％。用三种方法计算的昆虫学接种率A、B、C分别平均为0.084、0.665、0.215;或者说在工棚平均居住1.5～11.9d,短者1.1d,长者21.3d就可能感染疟疾。这是当前外地人口进入山区时而发生疟疾局部暴发流行的主要原因。

华支睾吸虫可溶性抗原对BALB/C鼠免疫效果的研究

用华支睾吸虫成虫可溶性抗原加等量自制佛氏完全佐剂（FCA）免疫BAU3／C鼠，以不同免疫途径、不同时间观察其免疫效果。结果腹腔注射组和皮下多点注射组两次基础免疫间隔3周，第二次基免后两周抗体几何平均滴度分别为2560．00和1470．00，差异无显著性；以加倍剂量于基础免疫后19－122天进行加强免疫，抗体水平迅速提高，于第三天已超过基础免疫水平，但在此时间内进行加强免疫的效果差异无显著性；两次基础免疫间隔3周和4周，其加强免疫后的抗体几何平均滴度分别为5881.34和3044.37，前者优于后者。实验中分别用自制FCA和进口FCA加入可溶性抗原进行免疫，其效果基本一样，但前者制作简便，价廉实用，可取代进口FCA。

间日疟原虫、恶性疟原虫和伯氏疟原虫各期的提纯和分离

用纤维素(Cellulose,CF-11)过滤去除白细胞后再用 Percoll 密度梯度离心方法提纯分离间日疟(P.v.)、恶性疟(P.f.)和伯氏疟(P.b.)3种疟原虫。经纤维素过滤后,P.v.病人血和P.b.感染鼠血中白细胞去除率分别平均达 94.7％和 75.4％,而且不影响原虫密度和各期构成比。多个 Percoll 不连续梯度离心测试3种疟原虫裂殖体、滋养体、环状体和未感染红细胞的相对平均密度(kg/L):P.v.分别为 1.059、1.072、1.096 和 1.099;P.f.分别为 1.070、1.079、1.10 和 1.10,配子体 1.085;P.b.分别为 1.059、1.062、1.103 和 1.104。并据此选择各自合适的 Percoll 梯度分离3 种疟原虫,将裂殖体、滋养体同环状体分开,获取原虫纯度(原虫数/100 个红细胞),P.v.由分离前 0.8％至分离后 93.5％,P.f.由2.3％至100％,P.b.由 30.6％至93％,分别提高 113.8、43.4和 2倍。

基于自动控制的土壤灌溉系统研究

为促进中国农业自动化发展,减轻农业人力资源耗费,本文设计出一种基于自动控制的土壤灌溉器。此灌溉器是通过分析土壤水分测量特点及介电特性,根据频域反射计测量原理得到土壤含水率的,最后其通过控制单元对所测土壤含水量与植物土壤含水定额的偏差和偏差的变化率进行模糊化处理与决策来判断灌水与否。

筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究——Ⅳ、杂交瘤细胞融合条件的探索及技术方法的建立

对杂交瘤细胞融合基本条件和因素进行比较,理会到骨髓瘤细胞系、牛血清、不同时间更换HAT选择培养基、PEG和HAT主要试剂的质量对融合率和单克隆抗体阳性检出率有明显影响,并对各种因素进行分析。通过摸索,建立和稳定单抗技术方法,融合率达50～95％。

筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究——Ⅰ、间日、恶性和伯氏三种疟原虫各期提纯分离方法研究

用纤维素(CF—11 cellulose)过滤去除白细胞后再用Percoll密度梯度离心方法提纯分离间日(Pv),恶性(pf)和伯氏(pb)三种疟原虫。经纤维素过滤后,pv病人血和pb感染鼠血中白细胞去除率分别平均达94.7％和75.4％,而且不影响原虫密度和各期构成比。多个Percoll连续梯度离心测试三种疟原虫裂殖期、滋养期、环状期和未感染红细胞的相对平均密度(kg/L):pv分别为1.059、1.072、1.096和1.099;pf分别为1.070、1.079、1.10和1.10,配子期1.085;pb分别为1.059、1.062、1.103和1.104。并据此选择各自合适的Percoll梯度分离三种疟原虫,将裂殖和滋养期同环状期分开,获取原虫纯度(原虫数/100红细胞)在pv由分离前0.8％至分离后达93.5％,pf由2.3％至100％,pb由3O.6％至93.0％,分别提高113.8、43.4和2.0倍。

筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究 Ⅲ.间日疟原虫和食蟹猴疟原虫颗粒性与可溶性抗原以及不同免疫途径和方法对BALB/C鼠的免疫效果

通过对问日(PV)和食蟹猴(PC)疟原虫颗粒和可溶性抗原以及不同免疫途径和方法对BALB/C鼠的免疫效果进行比较研究,探索出有效、简便的免疫方法。采用可溶性抗原(剂量:100μg/鼠)加佛氏完全佐剂(FCA)腹腔注射基础免疫2次,间隔2～3周,于融合前3天加强免疫,即能达到良好免疫效果。

抗间日疟原虫单克隆抗体的筛选、制备及鉴定

自从１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ创立淋巴细胞杂交瘤技术之后，现该技术已成功应用于寄生虫的生物学、诊断学和免疫治疗学的研究［１－２］。为开展对间日疟原虫的免疫诊断，我们应用该技术，制备了抗间日疟原虫单克隆抗体，并对其特异性进行分析。１材料和...

一种基于机器视觉的机械工件识别系统设计

本文针对机械工件识别,提出利用机器视觉识别的观点。在工业和图像处理行业起到示范作用。如付诸现实将节省大量人力资源。

一种新型的华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒

一种新型的华支睾吸虫病快速ＥＮＩＳＡ诊断试剂盒．检查华支睾吸虫病人血清４５３份．非流行区健康对照者血清３５６份．敏感性为９２．１％（４７／４５３）．特异性９８．３％（３５０／３５６）。试剂盒配备齐全．微量检测（血清用量２０～１０微升）．开盒即用、操作简便、整个检测过程约需１５ｍｉｎ．肉眼判断结果．重复性和稳定性良好，特别适合基层医疗卫生单位和现场使用。

应用多聚酶链反应技术检测疟原虫的初步研究

根据编码恶性疟原虫(P．f)红细胞结合抗原(EBA-175)的部分DNA片段和间日疟原虫(P．v．)小亚基核糖体RNA基因序列设计合成恶性疟原虫和间日疟原虫的特异性引物各一对并进行多聚酶链反应(PCR)检测恶性疟和间日疟病人标本。扩增产物经琼脂糖电泳分析，可见在P．f.样本中扩增出特异的492bp大小的DNA片段，P．v．样本中扩增出特异的714bp大小的DNA片段。而在健康人血的白细胞、伯氏疟原虫样本和食触猴疟原虫样本中均不能扩增出以上片段。其结果与镜检符合率分别达95％和93.3％以上，表明该方法是一种特异、敏感的检测方法。