不同作物间共用SSR引物的初步研究

根据相关报道 ,利用互联网在GENEBANK中查询油菜的简单重复序列及其两端序列来设计引物 ,并合成了 2对甘蓝型油菜的SSR引物 (Bn92A ,Bn72A) .通过所建立的降温PCR(TouchdownPCR)方法 ,对来自禾本科 ,十字花科 ,芸香科 ,锦葵科等 12种经济作物的DNA进行PCR扩增 .结果显示 ,PCR扩增产物条带清晰 .所有 12份材料用 2对SSR引物扩增出的主带片段大小一致 ,分别为 15 0bp(Bn92A) ,2 5 0bp(Bn72A) .这与文献报道在甘蓝型油菜中SSR扩增出的片段大小完全一致 .本研究说明 ,各物种基因组间存在着相当大的相似性 ,这

厦门文昌鱼遗传多样性研究

运用分子标记技术 ,对厦门现有文昌鱼(BranchiostomabalcheriGray)海域 (蟹口海域、南线海域、黄厝海域 )文昌鱼种群进行遗传多样性研究。通过10个有效引物的RAPD反应 ,共扩增出238条带 ,其中多态性条带为121,占总扩增条带的50.84 %。Nei指数法分析和UPGMA统计分析表明 :厦门3个海域文昌鱼可分为2个组 ,平均遗传距离为0.11。南线海域文昌鱼和黄厝海域文昌鱼的遗传距离为0.07 ,亲缘关系较近 ,聚类于同一组 ;蟹口海域文昌鱼与南线海域文昌鱼和黄厝海域文昌鱼的遗传距离分别为0.12和0.14 ,亲缘关系较远 ,单独为一组 ,结论与3个海域的文昌鱼形态比较结果一致 ,出现遗传分化。Shannon遗传多样性指数统计结果表明 :蟹口海域种群为0.616 ,南线海域种群为0.497,黄厝海域种群为0.391。厦门文昌鱼种群遗传多样性是各种群的遗传特性与该海域各种环境生态因子长期作用的结果 ,三元线性相关分析发现目前主要生态因素是底质和海水深度 ,3个海域中以蟹口海域的自然环境最为优越(其底质为中粗沙或粗中沙、水深8～15m)。根据以上研究结果 ,本文提出了厦门海域文昌鱼资源的保护建议。

海桑属红树植物遗传多样性和引种关系研究

以海南东寨港红树林自然保护区内无瓣海桑 (Sonneratiaapetala)、海南海桑(S hainanensis)、拟海桑 (S paracaseolaris)、杯萼海桑 (S abla)、大叶海桑(S ovata)、海桑 (S caseolaris)等 6种海桑属红树植物为材料 ,对 1 5个有效引物进行RAPD分析 ,共扩增出 51 2条带 ,其中多态性条带为 2 97,占总扩增条带的58 0 1 % .Nei指数法分析和UPGMA统计分析表明 ,6种海桑属红树植物分为A ,B ,C 3个组 ,平均遗传距离为 0 38.A组包括无瓣海桑、海南海桑、大叶海桑、怀萼海桑 ,其中无瓣海桑、海南海桑、大叶海桑处于同一个亚组 .B组包括拟海桑 .C组包括海桑 .对海南和福建无瓣海桑种群进行RAPD分析 .对Shannon表型多样性指数统计结果表明 ,福建种群为 0 6 6 9,海南种群为 0 6 71 ,各种群遗传变异较大 ,这与无瓣海桑种群广泛的适应性相一致 .对种群间的Shannon表型多样性指数分析表明 ,种群内的遗传变异占整个遗传变异的 93 3% ,而种群间的遗传变异仅占 6 7% .这表明无瓣海桑种群的大部分遗传变异存在于种群内 ,而种群间的遗传变异较小 .由此可见 ,无瓣海桑基因组丰富的多样性 ,是使其由海南成功引种到福建的重要因素 .同时探讨了与无瓣海桑遗传距离较近的海南海桑 ( 0 32 )和大叶海桑 ( 0 2 6 ) 。

利用mRNA差别显示技术分离盐胁迫下红树植物白骨壤耐盐相关cDNA

从福建龙海红树林自然保护区采集白骨壤的隐胎生果实 ,在实验室分别置于 0‰盐度海水和 5 0‰盐度海水进行沙培。分别取叶片 ,提取纯化RNA。通过锚定引物OligodT1 2 GC反转录和 8个 10核苷酸随机引物进行PCR扩增 ,经 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现了 3个差异DNA片段只在高盐培养条件的白骨壤基因组中表达 ,而在无盐培养条件中没有出现。这 3个差异cDNA片段分别命名为csrg1(6 0 0bp)、csrg2 (5 5 0bp)、csrg3(4 80bp)。 3个差异cDNA片段的RNA杂交结果显示 ,只有csrg1片段存在明显差异 高盐中有杂交斑点 ,无盐中无杂交斑点 ;而其余 2个片段在高盐和无盐条件下都没有杂交斑点出现。从而表明csrg1就是耐盐相关cDNA。进一步将csrg1片段克隆 ,并进行DNA序列分析。全序列在GenBank中查询后 ,未发现相关同源片段。耐盐相关cDNA片段的获得 ,将为分离全长耐盐基因 。

水稻细胞质雄性不育系小孢子发育过程中的同工酶分析

以新选育出的籼型水稻细胞质雄性不育系马协 A及其相应保持系马协 B为材料 ,分别取不育系和保持系处于花粉母细胞形成期、减数分裂 4分体时期、单核期、2核期、3核期的花药进行过氧化物酶同工酶、细胞色素氧化酶同工酶电泳分析及酶活性测定分析 .不育系与相应保持系比较发现 ,不育系过氧化物酶同工酶电泳酶谱带型丰富 ,酶活性较高 ;细胞色素氧化酶同工酶电泳酶谱带型较少 ,酶活性较低 .这些现象是从单核期花药开始表现 ,并随发育时期深入而明显地表现出来 .这与细胞学方法观测的结果 ,马协型不育系败育情况相吻合 .同时探讨了水稻 CMS的生理学和生物化学机理 ,以及同工酶分析在鉴定

中国红树科7种红树植物遗传多样性分析

以红树、红海榄、秋茄、角果木、木榄、海莲、尖瓣海莲等 7种红树科植物为材料 ,采用改进的CTAB法获得了纯度较高、得率高、片段完整的基因组DNA。通过筛选出的 1 5个有效引物进行RAPD分析 ,探讨了 7种红树植物间的亲缘关系。 1 5个有效引物共扩增出 61 7条DNA带 ,其中多态性条带 41 5条 ,占总扩增条带的 67 2 6%。利用Nei指数法得出 7个分类群间的遗传一致度和遗传距离 ,并运用UPGMA法进行聚类分析。 7个分类群分为A、B两个大组 ,平均遗传距离为 0 41。将得出的 7个分类群的DNA分子分类系统图 ,与传统的分类进行比较 ,发现结果相符。同时获得一个OPG0 5— 90 0的差异片段可作为区分海莲和尖瓣海莲的分子标记。

福建九龙江口红树植物分子分类的研究

运用RAPD技术对福建九龙江口龙海红树林自然保护区浮宫种苗园内白骨壤(Avicenniamarina)、桐花树(Aegicerascorniculatum)、无瓣海桑(Sonneratiaapetala)、秋茄(Kandeliacandel)、木榄(Bruguieragymnorrhiza)、海莲(B.sexangula)、尖瓣海莲(B.sexangulavar.rhyn chopetala)等7种红树植物进行了遗传多样性分析。从30个10 mer随机引物中筛选出15个有效引物 ,利用这15个有效引物共扩增出630条DNA带 ,其中多态性条带535条 ,占总扩增条带的84.92 %。利用Nei指数法得出7种红树植物间的遗传一致度和遗传距离 ,并运用UPGA统计分析法对红树植物的7个种间的亲缘关系进行聚类分析。7个种分为A、B两个大组。白骨壤、桐花树、无瓣海桑同属于A组。秋茄、木榄、海莲、尖瓣海莲分子聚类在B组。分子聚类结果和传统的分类学相吻合 ,由此表明这15个有效引物的RAPD分子标记技术能较为客观地反应出红树植物种间的遗传亲缘关系 ,并为从分子水平研究红树植物遗传多样性、保护。

α-微管蛋白与玉米细胞质雄性不育的相关性研究

采用两个核背景(Mo17,77)的同核异质、同质异核细胞质雄性不育系及正常品系为材料,以合成的α 微管蛋白基因片段为探针,对玉米细胞质雄性不育系转育前后的mRNA进行Northern杂交分析,首次直接从转录水平上比较了玉米细胞质雄性不育系在败育前后α 微管蛋白基因转录量的差异.结果表明,玉米细胞质雄性不育系α 微管蛋白基因在败育前后的转录量存在着明显的差异,败育前的相对转录量大于败育后的相对转录量,证明了α 微管蛋白基因在花粉发育中起着重要作用,与玉米细胞质雄性不育性密切相关.

红树植物白骨壤甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆与功能研究

甜菜碱在植物体内以胆碱为底物,经两步酶催化反应合成,其中催化第二步反应的是甜菜碱醛脱氢酶(Betaine A l-dehyde Dehydrogenase,BADH).为研究甜菜碱醛脱氢酶基因在酵母中是否具有生物学功能,通过PCR-RACE技术从红树植物白骨壤(Avicennia marina)中分离得到BADH基因,将其转入酿酒酵母AH109中.通过对重组酵母生长曲线的测定,发现重组酵母对NaC l的耐受度由转化前的9%提高到14%,表明白骨壤BADH基因在酵母中能得到有效表达出具生物学活性的蛋白质.

九龙江口红树植物分子分类的初步研究

本研究工作以福建九龙江口龙海红树林自然保护区浮宫种苗园内 7种红树植物为材料 ,采用改进的CTAB法获得了纯度较高 (A2 60 /A2 80 在 1 .6～ 2 .0之间 ) ,得率高 (DNA平均得率约为 1 2 0× 1 0 -6m/m ,FreshWeight) ,片段完整 (片段大小约为2 3kb左右 )的基因组DNA ,并运用RAPD技术对这 7种红树植物进行了遗传多样性分析 .从 30个 1 0 mer随机引物中筛选出 9个有效引物 ,并利用这 9个有效引物共扩增出 35 2条DNA带 .利用UPGMA法对红树植物的 7个种间的亲缘关系进行聚类分析 ,得出 7个种的DNA分子分类系统图 ,并与传统的分类进行比较 ,发现结果相符 ,从而确定了RAPD技术用于红树植物分子分类研究的可行性 ,并为从分子水平研究红树植物遗传多样性 ,保护。

水稻马协细胞质雄性不育系及其保持系线粒体体外热分析

以新选育出的水稻细胞质雄性不育系马协Ａ及其相应保持系协青早（简称马协Ｂ）为材料，分别从它们黄化苗中提取线粒体．一方面于体外测定线粒体能量代谢谱，进行热化学分析，得到一系列热力学参数和动力学参数，建立起反映线粒体体外能量代谢模式的热动力学方程．通过对不育系和保持系的比较发现，不育系线粒体在能量释放大小、代谢时间、能量代谢阶段的复杂性上明显低于保持系，从而得出不育系线粒体能量代谢水平低，造成供能匮乏从而导致不育；同时进行线粒体ＤＳＣ（差示扫描量热法）分析，发现不育系能量代谢的释活能（Ｅ）、释活指数（ｎ）明显比相应保持系高，从而可得出，不育系能量代谢水平低，形成原因可能是不育系线粒体中参与能量代谢的酶系统活性较低．

农作物枯萎病的研究进展

对中国农作物枯萎病的研究进行综述.主要包括枯萎病的发生与危害、寄主范围、致病力分化、病原菌鉴定、生理小种、生理研究、生化防治等.

通过Cyt b基因同源序列比较评估厦门文昌鱼的分类学地位

白氏文昌鱼Branchiostomabelcheri (Gray)在我国和日本沿海均有分布 ,由于南、北方文昌鱼形态学上有一定差异 ,且二者间存在一些过渡类型 ,其分类地位问题仍有待进一步澄清。本文测定了厦门欧厝海域产的文昌鱼mtDNACytb基因序列 ,并与日本产的文昌鱼以及另外产于大西洋的两种文昌鱼Cytb基因序列比较。分子系统学分析结果表明 :厦门欧厝海域产的文昌鱼与日本产的文昌鱼平均遗传距离为 2 1 12 % ,达到了种间分化的水平 ;经过对已有文献和文昌鱼地理分布的综合分析 ,作者建议将原来的白氏文昌鱼青岛亚种B belcheritsingtauense提升为种 ,南、北方所产文昌鱼分别作为两个独立的种存在 ,即南方的B belcheri (Gray)和北方的B

道地药材建泽泻的RAPD研究

目的 为了探讨道地药材与非道地药材之间遗传变异的大小 ,并建立道地药材的品质鉴定方法。方法 运用了随机扩增多态 DNA( RAPD)技术 ,对福建、江西、四川产的泽泻科植物泽泻 Alisma orientalis进行了研究。结果 同种异地药材所形成的不同的居群 ,具有不同的遗传特征。结论 RAPD技术可作为鉴别道地药材的参考方法。

RAPD法在金线莲的鉴别研究中的应用

目的 金线莲母 (金线莲 )与金线莲公 (无线金线莲 )是否为同一种植物 Anoectochilus roxburghii历来有争议 ,为了准确鉴别这两种植物并搞清楚二者之间遗传变异。方法 本文运用 RAPD技术 ,对同一采集地的具有不同叶面特征的金线莲进行了 DNA指纹鉴定。结果 两者的 DNA指纹图谱具有部分共同的位点 ,但又有各自的特征性位点。

枯萎病尖孢镰刀菌的RAPD-PCR多态性分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD PCR),对采自我省不同地区、不同寄主和同一寄主不同植株的瓜类枯萎病原菌尖孢镰刀菌进行遗传多样性分析,筛选到6个多态性随机引物,共产生了72条RAPD带,其中86.11%具有多态性;通过聚类分析,将供试菌株分为4个RAPD组,确定了菌株间的亲缘关系,为瓜类枯萎病原菌尖孢镰刀菌的分类提供有利的分子证据.

大蒜种质资源遗传多样性的分子标记研究

本研究利用RAPD和ISSR两种分子标记技术,对中国10个不同地区的大蒜品种进行了种质资源遗传多样性研究.从30个RAPD引物当中,筛选出11个具有多态性的引物,共扩增出多态性带224条,多态性条带比率为41.18%,从12个ISSR引物中筛选出5个具多态性的ISSR引物,共扩增出多态性带121条,多态性条带比率为50.21%.对RAPD和ISSR两种标记分别运用Nei指数法,计算出10个大蒜品种的平均遗传距离为0.28和0.32.根据这两种标记的结果,采用UPGMA进行聚类分析,得到与生物学分类地位基本一致的结果.结果表明,在实验稳定性上,ISSR优于RAPD,且ISSR比RAPD能检测到更多的遗传变异,RAPD和ISSR两种标记可用于大蒜种质遗传多样性的研究.

辣椒枯萎病原菌分离鉴定及其在植株体内的分布

调查了福建漳州地区的辣椒枯萎病的危害症状,采用常规病原菌分离方法和Booth镰刀菌鉴定方法,初步确定其病原菌为尖孢镰刀菌(FusariumoxysporiumSchl.).对不同发病级别的辣椒植株体内的镰刀菌的分布状况的研究结果表明,辣椒枯萎病原菌在植株体内的数量分布随部位和病情不同而发生变化,健株上未分离到镰刀菌,辣椒枯萎病原菌主要集中在感病植株的茎基部,病株的含菌量为2级>3级>1级,2级病株的含菌量达30.76×104cfu/g鲜质量;是1级病株的102.53倍,是3级含菌量的12.06倍.病原菌的专化型和致病机理有待于进一步的研究.

10种棕榈科植物的RAPD分析

用RAPD法对厦门植物园引种栽培的4属10种棕榈科植物样本进行了基因组DNA多态性分析.从29个随机引物中筛选出9个有效引物共获得RAPD谱带558条,多态性谱带占71.32%.利用UPGMA法对10种棕榈科植物聚类分析,得其DNA的分子分类系统图.结果表明,棕榈属、琼棕属和鱼尾葵属聚类成一组,蒲葵属另成一组;棕榈属、琼棕属和蒲葵属中6种掌状叶型植物的平均遗传距离为0.47,羽状叶型的4种鱼尾葵属植物间的平均遗传距离为0.55;而羽状叶植物与掌状叶植物间的遗传距离达0.72.在同一属内,棕榈属内两种距离最近,蒲葵属两种最远.尽管分子分类结果与形态分类结果存在一定差异,但RAPD分子标记技术对棕榈等引种植物的分类鉴定和遗传多样性评价是有效可行的.

通气量对西瓜枯萎病病原尖孢镰刀菌生长的影响

采用摇床转速和装液量来控制不同通气量,对西瓜枯萎病尖孢镰刀菌株X.1.7 030527 02进行培养,研究结果表明:当装液量相同时,尖孢镰刀菌孢子生长量随转速的增加而增加,而当转速<60r/min和>150r/min时,尖孢镰刀菌孢子生长量随装液量的变化差异不大,当转速90～120r/min时,尖孢镰刀菌孢子生长量随的装液量增加而减少.装液量越大,平均孢子萌发率越高,100mL/250mL装液量的平均孢子萌发率最高,比50mL/250mL和25mL/250mL分别高1.6%和4.05%.摇床转速对孢子萌发率表现在转速低孢子萌发率高的趋势.菌丝体生长量受通气量(装液量和转速)变化影响较小.