珠海地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查正常参考区间建立的临床研究

目的 研究建立珠海地区正常新生儿干血斑样本中11种氨基酸和31种肉碱含量的参考区间,为新生儿遗传代谢病串联质谱筛查的结果解读提供理论依据。方法 20364例新生儿干血斑样本,采用串联质谱技术对其11种氨基酸和31种肉碱含量进行检测,按纳入标准选取18542例新生儿筛查数据,以百分位数法(P_(0.5)~P_(99.5))统计参考区间;采用摘要独立样本t检验比较珠海地区串联质谱检测结果与中国临床机构检测结果的差异;Wilcoxon秩和检验比较珠海地区串联质谱参考区间与上海新华医院的差异。结果 20364例新生儿初筛阳性687例,召回621例,确诊遗传代谢病7例,其中原发性肉碱缺乏症2例, citrin蛋白缺乏症、高甲硫氨酸血症、甲基丙二酸血症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症和极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症各1例。氨基酸代谢病、有机酸代谢病、脂肪酸氧化障碍的发病率分别为0.010%(1/10182)、0.005%(1/20364)和0.020%(1/5091),总发病率为0.034%(1/2909)。18542例新生儿11种氨基酸检测结果与中国临床机构检测结果比较,差异均有统计学意义(P<0.001);18542例新生儿31种肉碱中除异戊烯酰肉碱(C5:1)、己酰肉碱(C6)、辛酰肉碱(C8)、癸二烯酰肉碱(C10:2)、肉豆蔻二烯酰肉碱(C14:2)、3-羟基棕榈酰肉碱(C16OH)、3-羟基棕榈烯酰肉碱(C16:1OH)、3-羟基十八碳酰肉碱(C18OH)、3-羟基十八碳烯酰肉碱(C18:1OH)等指标外,其余肉碱检测结果与中国临床机构检测结果比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。珠海地区新生儿丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、亮氨酸(Leu)、鸟氨酸(Orn)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)、游离肉碱(C0)、己二酰肉碱(C6DC)参考区间下限与新华医院新生儿比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 珠海地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查11种氨基酸和31种肉碱参考区间的建立,为本地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查的结果解读提供了理论依据。

Gap-PCR作为临床一线α-地中海贫血携带者筛查技术的应用评价

目的评价检测中国人3种常见的缺失型α-地中海贫血(地贫)基因的gap-PCR作为临床一线α地贫携带者筛查技术的可行性。方法 以双盲试验对随机抽取的382份血样同时采用gap-PCR分子筛查技术和血液学分析法分别检测α-地贫基因型和α-地贫表型,并以 Southern blot分析法作平行对照分析。结果在382份样品中,用gap-PCR法检出3种常见的α－地贫基因-SEA、α37和、-α^(+2)分别为21、7和3例、据此该市人群中α－地贫的基因携带率为8．12%。在这些阳性样品中有7例和3例分别检出自血液学表型正常(7/10)和缺铁性贫血(3/10)样品。这些结果与 Southern blot分析完全一致。血液学表型筛查法仅检出其中的21例(除2例α－地贫表型阳性未定型外),该法的假阴性率为32.3%。因血液学表型筛查漏检了7例静止型和3例轻型α－地贫样品,故此法总的漏检率为2.62%。结论 与血液学筛查法比较,gap－PCR分子筛查技术更具有特异性和可靠性,是临床上进行α－地贫基因携带者(尤其是静止型α－地贫)筛查的可选用的一线技术。

中国人3种常见缺失型α-地中海贫血快速检测及产前诊断

目的 建立一种准确快速并能同时检测中国人 3种常见缺失型 α-地中海贫血 (简称 α-地贫 )的聚合酶链式反应 ( PCR)技术并应用于产前 α-地贫的人群筛查和高危胎儿的产前诊断中。 方法 采用跨越断裂点 PCR( gap- PCR)方案设计 3组 PCR引物 ,并对 PCR反应条件进行优化以扩增代表这 3种 α-地贫存在的特异性 DNA片段。应用血液学分析法对孕妇及其配偶各 6 135例进行 α-地贫表型的初筛 ,gap- PCR法用于 α-地贫表型阳性病例的确诊和 32例 α-地贫高风险胎儿的产前诊断。 结果 一次 PCR同时成功地检出 3种 α-地贫的纯合子、杂合子或双重杂合子 ;孕妇及其配偶中共筛出 5 4 1例携有 - - SEA突变基因 ,及其 Hb Bart s和 Hb H病的高风险胎儿 17例和 15例 ,并对其中的 31例进行了产前诊断 ,5例 Hb Bart s水肿胎儿和 4例 Hb H病胎儿被终止妊娠。 结论 该法简便快速、准确可靠、重复性好 ,适合于人群筛查时检出 α-地贫携带者和高风险重症

益气生髓汤对苯诱发的再生障碍性贫血大鼠红细胞糖酵解酶活性的影响

采用慢性苯中毒法建立大鼠再生障碍性贫血(再障)模型。观察再障大鼠红细胞中己糖激酶(HX)、醛缩酶(ALD)和丙酮酸激酶(PK)3个糖酵解关键酶活性的变化,以及益气生髓汤对其活性的影响。结果:再障大鼠红细胞的3种酶活性变化不显著。胃饲及腹腔注射给药均能明显改善再障大鼠的骨髓和外周血象。与未用药对照组比较,腹腔给药4周后,能明显维持再障组大鼠红细胞中 PK 活性(P<0.05)。提示:再障大鼠红细胞出现的能量代谢紊乱与其 HX、ALD 和 PK 活性无关,而益气生髓汤对再障大鼠确有一定疗效。

中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断

β地中海贫血是一组高度异质性的遗传性血液病。中国人中已发现２１种β地贫基因，其突变类型包括碱基替代、小的缺失和插入。我国南方常见的类型是密码子（ＣＤ）４１－４２（－ＴＣＴＴ）移码突变，ＩＶＳ－２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）突变，ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变，ＴＡＴＡ盒ｎｔ—２８（Ａ→Ｇ）突变和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）移码突变，其基因频率分别为４１．６％、２１．８％、１８．０％和８．０％及３。９％。β地贫的突变类型及频率分布具有明显的地域差异和种族特征。近年来，由于β地贫分子病理的阐明及ＰＣＲ扩增技术结合各种先进的．点突变检测方法的应用和发展，使β地贫的产前基因诊断已逐步走向临床。目前，在应用于这种高度异质性遗传病的各种分子诊断方法中，快速简便的反向点杂交（ＲＤＢ）技术引人注目。

婚前β地中海贫血的大人群筛查及预测性产前诊断

为了阐明珠海市这座新兴的“移民城市”人群中β地贫的携带率及其基因背景并进行预测性产前诊断,作者对婚前检查对象进行该病血液学筛查后,再采用PCR/异源双链分析法和反向点杂交法(RDB)确定阳性病例的基因型,结果 9 854人例行婚检对象中检出 β地贫阳性病例227人,β地贫的携带率为2.30％。227例阳性病例中的223例被确定了基因型,共检出10种β地贫突变并总结出它们的构成比。在上述人群中筛出双方均为β地贫携带者的对象7对(占0.14％),通过婚前指导和遗传咨询,婚后定期随访,对其中6个家庭的高风险胎儿进行了产前诊断。确定重症地贫胎儿2例并分别于确诊后1周和2周内终止妊娠,杂合子3例和正常胎儿1例。这是目前国内首次报告的在婚前检查中进行大人群地贫系统筛查基础上完成的预测性产前诊断。

基因释放剂结合异源双链分析快速检测β地贫最常见的一种突变

β地贫是一种分子病理具有高度异质性的、我国南方最为常见的遗传性血液病.在已发现的23种β地贫突变中,CD41-42(-TCTT)移码突变基因频率最高(达41.6%).根据PCR原理和该突变的特点,作者设计了一对引物进行PCR特异扩增,电泳分析即可检出此种突变.并引进基因释放剂DNA模板快速制备法,从而使此技术更为简便和实用.作者运用此法检测了广东珠海地区114份β地贫样品,CD41-42突变捡出率为40.35%,并成功地应用于产前诊断中.根据实验结果,作者建议在分析未知β地贫突变时,首先采用本法先对CD41-42突变进行初筛,而将RDB和ASO技术作为补充.

α-地中海贫血的表型筛查和基因诊断

α-地中海贫血(简称α-地贫)是由于α珠蛋白基因的缺失或功能障碍导致α珠蛋白链完全缺如或合成不足所引起的遗传性血液病。它是世界上最常见的一类单基因遗传病之一。我国南方也是此病的高发区。据报道,广东和广西2省人群中α-地贫携带率高达8.30％和14.95％。该病的分子病理具有很大的异质性,主要为α-珠蛋白基因大片断的缺失(即缺失型,用--/或-α/表示)。

人类乳头瘤病毒的分子诊断和基因分型

HPV为一组异质性病毒 ,迄今为止已发现 10 0多种基因型。其感染在人类皮肤、肛门 生殖道肿瘤特别是宫颈癌的发生、发展过程中起着重要的作用。而HPV的诊断完全依赖于临床标本中HPV DNA的检测。直接核酸杂交和基于PCR技术为目前应用最为广泛的HPV检测方法。前者以HCⅡ为代表 ,此法比较成熟 ,但存在灵敏度较低、漏诊率较高且不能进行HPV基因分型等问题 ;而以PCR结合反向杂交分析为代表的PCR检测技术 ,虽具有其他方法无可比拟的优点 ,但在临床诊断和流行病学研究中的作用尚有待作进一步的评价。

DNA甲基化分析技术的研究进展

在生物中 ,特别是在真核生物中 ,DNA甲基化已成为阐明正常和病理基因表达现象的重要机制 ,因而已成为当前分子生物学的研究热点之一。由之而产生的 DNA甲基化分析技术也有了长足的发展。目前至少已报道了三类 10种此类技术。而近几年迅速发展起来的以 HSO3-转化为基础的各种 DNA甲基化检测技术 ,因其具有简便可行、准确灵敏等诸多优点 ,最令人瞩目。本文仅就这些方法的原理。

异常血红蛋白的筛查及其分子诊断

目的应用高效液相色谱法(HPLC)检测异常血红蛋白(Hb)并对各异常Hb进行分子诊断。方法收集6 297例血样,采用HPLC检测各种异常Hb,应用Sanger测序法对各异常Hb进行DNA测序。结果共发现7种异常Hb,分别为Hb E(37例)、Hb Q(18例,其中3例为Hb Q-Hb H)、Hb S(2例)、Hb C(2例)、Hb D-Iran(3例)、Hb J-Bangkok(8例)、Hb J-Mexico(2例)。经DNA测序,Hb E、Hb Q、Hb C及Hb J-Bangkok得到确诊;2例Hb S中1例为Hb S纯合子,另1例为Hb G-Makassar;3例Hb D-Iran中2例为Hb G-Taipei,1例为Hb G-Coushatta;2例Hb J-Mexico被证实为Hb Ube-2。结论虽然HPLC能快速检测异常Hb,但只能进行"假设性诊断",确诊还需通过分子生物学方法。

逐步回归分析快速鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血

目的快速鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血。方法利用红细胞指数建立鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血的逐步回归方程,并用盲法分析评价其准确鉴别性。结果该方程鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血的准确度为86.82%,对地中海贫血和缺铁性贫血预测的灵敏度、特异度、约登指数分别为94.29%、79.66%、73.9和76.92%、90.52%、67.4。结论红细胞指数逐步回归方程鉴别诊断地中海贫血与缺铁性贫血简便、快速、敏感,适合基层单位开展。

应用高效液相色谱法检测β-地中海贫血及异常血红蛋白

目的应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)准确、快速检测β-地中海贫血及各种异常血红蛋白,分析β-地中海贫血及异常血红蛋白病在人群中的发生情况。方法全自动血细胞分析仪检测红细胞指数;HPLC测定Hb A2和Hb F;采用碱性琼脂糖凝胶电泳进行血红蛋白电泳对各异常血红蛋白进行鉴定;RDB法分析β-地贫基因型。结果应用HPLC分析了2 841份标本,其中β-地中海贫血轻型578例(20.34%),β-地贫重型和中间型各4例。同时发现7种异常血红蛋白,分别为Hb E(17例,其中1例为Hb E合并β-地中海贫血)、Hb Q(7例,其中1例为Hb Q/Hb H)、Hb S(1例Hb S纯合子和1例Hb S杂合子)、Hb D-Iran(2例)、Hb Manitoba(1例)、Hb J-Bangkok(2例)和Hb C(1例)。结论 HPLC是一种用于检测β-地中海贫血及异常血红蛋白的理想实验工具,能为各种血红蛋白病提供快速而又准确的诊断依据。

不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用

目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)、探针熔解曲线法(probe melting curve assay,PMCA)检测常见α-地贫和β-地贫基因突变。两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时,采用DNA测序分析法确诊。所有产前诊断结果均进行验证或随访。结果 :经STMP+RDB、PMCA检测突变谱不同,α-地贫和β-地贫各有1例结果不同。另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA,其差异性在标本受母血污染时有提示作用。结论:两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊断,是必要和可行的,两者具有互补性,可确保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷。

静止型α-地中海贫血红细胞指标临界值的确定及其应用

目的探讨并评估红细胞相关指标及其临界值用于筛查静止型α-地中海贫血(α-地贫)的临床价值。方法以77例单纯性静止型α-地贫患者和151例健康成人为研究对象,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)确定静止型α-地贫筛查指标及其临界值。结果 MCV、MCH、MCHC的ROC曲线下面积分别为0.857,0.858,0.740,均有筛查价值,其最佳临界值分别为82.0fl、28.0 pg和341.5 g/L;MCV≤82.0 fl或MCH≤28.0 pg平行模式筛查静止型α-地贫的灵敏度、特异度和漏诊率分别为93.5%、72.8%和6.49%。结论采用MCV≤82.0 fl或MCH≤28.0 pg平行模式可有效检出静止型α-地贫,为地贫高发区进行遗传咨询提供了一定的科学依据。

单管多重PCR结合RDB技术在α-地贫产前诊断中的应用

目的基因诊断结果在α-地贫的产前诊断中具有决定意义。采取两种不同技术原理的方法验证产前诊断结果,是保证产前诊断结果可靠性的基本要求。本文探讨检测常见非缺失型α-地贫的RDB技术作为单管多重PCR技术产前诊断α-地贫验证方法的可行性。方法采用双盲法,对73例α-地贫产前诊断的标本分别采用针对中国人3种常见缺失型α-地贫突变的单管多重gap-PCR技术和针对常见3种非缺失α-地贫点突变的RDB法进行分析,根据单管多重PCR技术扩增产物电泳图谱和RDB膜条上显色的斑点分别判断某一个标本缺失型和非缺失α-地贫的突变类型,且与引产或出生后胎儿脐带血中HbBart′s定量结果进行比对。结果单管多重PCR和RDB技术均能分别准确检出常见缺失型和非缺失型α-地贫各种突变类型。如将两者结合分析,还能提供相互佐证的重要信息:对于--SEA、-α3.7和-α4.2自身或相互组合的各种基因型标本,其RDB膜条的杂交斑点均不显色;而--SEA与αCSα、αQSα和αWSα组合的基因型标本该突变的正常对照点不显色。α-地贫产前诊断结果与胎儿脐带血电泳结果完全吻合。结论单管多重PCR结合RDB技术同时应用于α-地贫的基因诊断,可保证产前诊断的可靠性,值得在临床遗传诊断实验室中推广应用。

2009～2014年珠海市腹泻儿童沙门菌感染的流行病学特征

目的了解2009～2014年珠海市腹泻儿童感染沙门菌的流行病学特征。方法对2009～2014年珠海市妇幼保健院4 395例门诊和住院感染性腹泻患儿送检的粪便标本进行沙门菌分离、培养、生化鉴定和血清学分型,并进行统计学分析。结果共检出30种血清型沙门菌546株,分离率为12.42%,小于3岁的婴幼儿沙门菌阳性病例占93.22%,男女患儿分离率差异无统计学意义（χ2=0.572,P〉0.05）。6、7月是沙门菌感染的高峰时期,分离率分别为16.40%和16.09%。鼠伤寒沙门菌（50.92%）、肠炎沙门菌（13.55%）和斯坦利沙门菌（10.26%）为沙门菌优势血清型。结论沙门菌是珠海地区儿童感染性腹泻的主要病原菌,血清型以鼠伤寒沙门菌为主,其感染与年龄和气候密切相关。

新生儿疾病筛查网络平台在新生儿疾病筛查中的应用

目的探讨基于网络构建新生儿疾病筛查信息化管理平台,实现在全市架构下统一实施新生儿疾病筛查技术服务和信息管理新模式及其作用。方法自主研发"新生儿疾病筛查信息管理系统",为本市所有分娩医院提供筛查技术服务和信息共享管理平台,并对应用该系统前后新生儿疾病筛查率、随访率、治疗率等方面进行对比分析。结果成功构建该信息化管理平台,实现从采血、传递、检查、报告、查询、跟踪随访的全过程信息化管理。实现了新生儿基础资料和检查文件自动导入,疾病筛查、确诊和治疗等信息共享。启用该系统后对所有新生儿筛查结果实现自助短信告知筛查结果,疑似病例自动短信召回,重点加强对阳性患儿长期的治疗和随访,使本市新生儿疾病筛查随访率、治疗率明显提高。对筛查相关机构进行质控和评价体系,保持筛查技术的先进性,取得该系统著作权证书号2010SR017295。结论启用该系统后,实现本市新生儿系列筛查全覆盖,最大范围减少失访。该信息平台可以让基层工作人员从繁重的手工登记统计工作中解脱出来,将更多的时间和精力投入到更好地为孕产妇和新生儿服务中去。该信息平台可以解决广大家长及时获得新筛结果的迫切需求,更好的为家长服务。该信息平台使本市儿童保健规范化、系统化、科学化,极大地提高了本市保健的整体管理水平。

三种红细胞渗透脆性试验用于地中海贫血筛查的临床应用评价

目的 评价临床上常用的 3种红细胞渗透脆性试验作为临床地中海贫血 (地贫 )筛查技术的准确性及其应用价值。方法 以双盲试验对临床送检的 45 3份血样分别采用 3种红细胞渗透脆性试验、分子筛查手段和铁代谢状态分析检测红细胞溶血率、珠蛋白基因型和缺铁性贫血。结果 以分子筛查方法结合铁代谢状态作为诊断地贫和缺铁性贫血的金标准 ,双管、改良的单管和两管红细胞渗透脆性试验筛查地贫的有效率分别为 90 .3 %、86.8%和 85 .4% ;特异性分别为 99.4%、99.4%和 10 0 % ;敏感度分别为 88.6%、84.3 %和 77.7% ;总的误诊率分别为 9.7%、13 .2 %和 14 .6% ;对孕妇血样漏检率分别高达 2 7.7%、3 4.4%和 3 7.7%。结论 三种红细胞脆性试验均能较好地筛出地贫 ,其中以双管法最佳、单管法次之 ,两管法居末 ,但这些方法均不宜作为妊娠期筛查地贫的技术手段。

肺炎支原体抗体两种检测方法的对比分析

目的探讨被动凝集法（PPA）和间接免疫荧光法（IIFA）在肺炎支原体（MP）感染早期诊断中的应用价值。方法对该院儿科2015年1-12月疑因MP感染的2 517例住院患儿采用PPA和IIFA检测血清MP-IgM的结果进行回顾性分析,比较两种方法检测MP-IgM阳性率的差异。结果 PPA和IIFA各检出MP-IgM阳性976例和614例,阳性检出率分别为38.77%和24.39%,PPA阳性检出率明显高于IIFA,差异有统计学意义（P〈0.05）。两法的阳性符合率为80.29%,阴性符合率为74.61%,总符合率为76.00%。同时采用两种方法检测MP-IgM,阳性检出率可达到43.58%,敏感性明显高于任一单一方法。结论 PPA检测MP-IgM较IIFA敏感,两者联合检测可以提高MP感染诊断的阳性率。