发酵酒糟在养牛产业中的应用研究进展

酒糟作为酿酒产业的副产物,近年在动物饲料中被广泛应用,其可替代日粮中的部分精料用于畜禽养殖,在一定程度上可缓解畜禽养殖业的饲料短缺问题。酒糟经过微生物发酵后能延长储存时间,而且能提高饲料中粗蛋白质含量及优化氨基酸组成,同时降低粗纤维含量,营养价值较高,提升了酒糟的饲用价值。本文主要对几种发酵酒糟特点、利用方式及发酵酒糟在养牛产业中的应用效果的研究进展进行综述,以期为发酵酒糟饲料化的研发与应用奠定基础。

鸭瘟病毒的分子生物学研究进展

文章介绍了鸭瘟病毒的基因功能、蛋白功能、致病机制、免疫机制方面的研究进展情况,并提出相关研究存在的不足和需要加强研究的方向,为更加深入了解该病毒,从而开发新的治疗方法和策略提供参考。

鸭肠炎病毒和A型产气荚膜梭菌共感染绿壳蛋鸭十二指肠代谢组学分析

旨在探究鸭肠炎病毒(DEV)和A型产气荚膜梭菌(CpA)共感染绿壳蛋鸭114 h时十二指肠的差异代谢物变化。试验选取12只健康绿壳蛋鸭,随机分为对照组(CK)和共感染组(TCD)。通过临床观察、剖检病理观察以及PCR检测确定DEV和CpA共感染成功,再使用液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测CK组和TCD组感染114 h时鸭十二指肠的代谢物变化,筛选潜在差异代谢物及代谢通路。结果表明,与CK组相比,TCD组鸭十二指肠感染114 h时的总差异代谢物29种,主要有5′-s-甲基-5′-硫腺苷、胞苷、脱氧皮质酮21-葡萄糖苷、腐胺和2-氧吲哚、腐胺、柚皮素、2-氧吲哚、吲哚-3-乙醛等;差异代谢物通过KEGG通路富集分析,共显著富集到22条代谢通路,主要有烟酸酯和烟酰胺代谢、半胱氨酸和蛋氨酸的代谢、酪氨酸代谢、色氨酸代谢、甘油磷脂代谢等,其中与机体免疫和炎症相关的有腐胺、柚皮素、2-氧吲哚、吲哚-3-乙醛、5′-s-甲基-5′-硫腺苷、烟酸脂和半胱氨酸-蛋氨酸代谢、色氨酸代谢和烟酰胺代谢等。综上所述,DEV和CpA共感染绿壳蛋鸭后,可能通过影响腐胺和柚皮素等代谢物以及色氨酸代谢和半胱氨酸-蛋氨酸代谢通路来影响绿壳蛋鸭十二指肠的炎症,为阐明DEV和CpA共感染机制提供科学依据。

猪流行性腹泻病毒贵州流行株N基因的克隆、测序与生物信息学分析

为了了解贵州省猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的流行情况,试验对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)贵州流行株(GZ2022)N基因序列进行克隆、测序,并利用DNAStar、ProtParam、ProtScale等生物信息学分析软件对PEDV-GZ2022株N基因的同源性和遗传进化地位,以及N蛋白的分子特征和潜在功能进行分析预测。结果表明:PEDV-GZ2022株N基因大小约为1364 bp,编码441个氨基酸;PEDV-GZ2022株N基因核苷酸序列与GenBank中的PEDV参考毒株N基因的相似性为95.5%~99.8%,与PEDV经典毒株CV777 N基因核苷酸序列的相似性为95.6%,与SDLY2020毒株N基因核苷酸序列的相似性高达99.8%,PEDV-GZ2022毒株与经典毒株CV777关系相隔较远,与PEDV变异株GⅡ-b位于同一分支;PEDV-GZ2022株N蛋白中含有较多的疏水性氨基酸,为疏水性蛋白;该蛋白质存在4个N糖基化位点和37个O糖基化位点,有31个丝氨酸、14个苏氨酸及3个酪氨酸可能被磷酸化,并且抗原指数较好。说明PEDV-GZ2022株为GⅡ-b变异株,PEDV-GZ2022 N蛋白可能具有良好的抗原性,可以作为潜在的诊断抗原。

PEDV结构蛋白颉颃IFN-Ⅰ应答的分子机制研究进展

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)具有很高的发病率和死亡率,尤其是在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)高致病性变异株(GⅡ型毒株)出现以来,更是对全球养猪业构成了巨大威胁。病毒感染宿主之后,宿主会激活抗病毒天然免疫应答机制。干扰素(interferon,IFN)作为一类抵御病毒感染的关键分子,特别是Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)可通过激活各种免疫细胞和共刺激分子来颉颃病毒的增殖。与此同时,为实现在宿主内的持续复制,许多病毒建立了颉颃宿主机体IFN-Ⅰ应答的多种分子机制,进而实现免疫逃逸。PEDV编码的多种结构蛋白可以颉颃宿主IFN-Ⅰ免疫应答。文章综述了PEDV结构蛋白颉颃IFN-Ⅰ免疫应答的分子机制,以期为深入阐释PEDV免疫逃逸的分子机制与开发PEDV新型靶向药物和建立防控新策略提供科学参考。

复合益生菌固态发酵白酒糟条件的研究

本试验旨在探究复合益生菌固态发酵白酒糟的最优条件。选用黑曲霉、粪肠球菌、植物乳杆菌、酿酒酵母复合益生菌发酵白酒糟后,以发酵后白酒糟的粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量和活菌数为指标,探究复合益生菌发酵白酒糟的最优基料组合。在最优发酵基料基础上,对发酵初始pH、发酵时间、发酵温度和菌种接种量进行单因素试验优化,挑选对发酵影响较大的初始pH、发酵时间和菌种接种量3个因素进行3×3正交设计,以发酵后粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量、pH降低值为指标确定最优发酵条件。结果表明:1)在本试验条件下,复合益生菌发酵白酒糟的最优发酵基料组合为77%白酒糟+6%玉米粉+5%麸皮+12%菜籽粕。2)最优发酵条件为发酵初始pH 6、菌种接种量8%、发酵时间5 d。按照最优基料组合和最优条件发酵白酒糟,发现与优化前白酒糟相比,粗蛋白质含量提高34.46%,中性洗涤纤维含量降低35.28%,酸性洗涤纤维含量降低54.02%。而酒糟基料内菜籽粕抗营养因子硫代葡萄糖苷和植酸含量经发酵后分别降低22.92%和22.19%。综上所述,复合益生菌能有效改善白酒糟的品质,为白酒糟资源的合理利用提供理论依据。

中药联合复合益生菌对鸡柔嫩艾美耳球虫的预防作用

【目的】探究中药方剂与复合益生菌联合应用预防柔嫩艾美耳球虫病的作用效果。【方法】试验选择180只12日龄贵农金黄鸡,分成空白对照组、感染组、中药组、益生菌组、中药+益生菌组和莫能菌素组,每组3个重复,每个重复10只鸡。空白对照组和感染组空腹灌服生理盐水(200μL/只),中药组在基础饲粮中添加2%中药方剂,益生菌组空腹灌服复合益生菌(200μL/只),中药+益生菌组空腹灌服复合益生菌(200μL/只)+基础饲粮添加2%中药方剂,莫能菌素组在基础饲粮中添加100 mg/kg莫能菌素。14日龄时,除空白对照组外其余各组经口灌服1×10^(5)个/只柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液。接种球虫和剖杀前称重并统计相对增重率和存活率;感染0、4和8 d采集血液,用ELASA法检测血清生化、免疫和抗氧化指标;试验结束后采集盲肠组织并观察组织病理学变化。【结果】各预防给药组相对增重率均高于感染组,盲肠每克卵囊数均显著低于感染组(P<0.05),其中中药+益生菌组相对增重率最高、盲肠每克卵囊数最低,抗球虫指数(anticoccidial index,ACI)超过莫能菌素组。与感染组相比,感染4 d,中药组、益生菌组和中药+益生菌组血清白蛋白(ALB)和甘油三酯(TG)含量均显著升高(P<0.05),肌酐(CREA)含量显著降低(P<0.05);中药组和中药+益生菌组血清总蛋白(TP)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-6和γ-干扰素(IFN-γ)含量显著升高(P<0.05),谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性均显著下降(P<0.05)。感染8 d,中药组、益生菌组和中药+益生菌组血清TP、ALB含量均显著升高(P<0.05),尿素氮(BUN)含量和AST活性均显著降低(P<0.05);中药组和中药+益生菌组TG、IL-2、IL-6和IFN-γ含量均显著升高(P<0.05),CREA含量和ALT活性均显著下降(P<0.05)。盲肠组织病理学结果显示,感染组和益生菌组有明显病理损伤,中药组和中药+益生菌组组织损伤较轻微。【结论】中药和益生菌联合使用能改善因柔嫩艾美耳球虫感染引起的生长抑制,降低卵囊排出量,提高机体免疫力和抗氧化能力,缓解鸡球虫感染引起的组织损伤,研究结果为鸡球虫病的防治提供参考。

丁酸钠对嗜水气单胞菌生长及毒力的影响

【目的】探究丁酸钠对嗜水气单胞菌生长和毒力的影响,评估丁酸钠对嗜水气单胞菌的抑菌活性,并探索其作用机制。【方法】通过微量肉汤稀释法测定丁酸钠对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),采用泳动和集群运动试验检测丁酸钠对嗜水气单胞菌的运动状态的影响,使用酶活性和溶血性试验检测丁酸钠对嗜水气单胞菌的脂肪酶、蛋白酶和溶血性的影响,生物膜试验检测丁酸钠对嗜水气单胞菌生物膜的抑制作用,实时荧光定量PCR技术检测丁酸钠对嗜水气单胞菌毒力和群体感应系统的相关基因表达的影响。【结果】丁酸钠对3株嗜水气单胞菌的MIC均>512 mg/L;丁酸钠浓度≤512 mg/L时,不影响3株嗜水气单胞菌的生长。当丁酸钠浓度≥64 mg/L时,除对GZ-SS2019的集群运动能力无显著影响(P>0.05)外,均能显著抑制3株嗜水气单胞菌的运动能力(P<0.05),此浓度下还显著抑制3株嗜水气单胞菌生物膜的形成(P<0.05)。在丁酸钠浓度为128 mg/L时,对3株嗜水气单胞菌脂肪酶活性无显著影响(P>0.05),却显著抑制3株嗜水气单胞菌蛋白酶活性(P<0.05);而丁酸钠浓度≥32 mg/L时,除对GZDX-01的抑制效果不显著(P>0.05)外,能显著降低其余2株嗜水气单胞菌溶血率(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,丁酸钠浓度≥128 mg/L时能显著降低群体感应系统luxS和ahyR基因表达量(P<0.05);溶血相关基因aerA表达量显著下降(P<0.05),此外ompW、ompA、fur基因表达量也显著下降(P<0.05)。【结论】丁酸钠浓度≤512 mg/L时不影响嗜水气单胞菌的生长,但能有效干扰嗜水气单胞菌的运动状态、酶活性、溶血性及生物膜的形成,以及毒力基因和群体感应系统相关基因的表达,其中丁酸钠浓度≥128 mg/L时效果较好。

贵州省影响羊口蹄疫和小反刍免疫效果分析

为研究贵州省不同地区、养殖方式、海拔和温度对羊A、O、Asia I型FMD和PPR免疫抗体阳性率的影响。采用酶联免疫吸附实验对2015~2020年本实验室收集的贵州省9个市(州)515个养殖场的羊血清(共计8869份)进行上述疫病的免疫抗体检测,并对检测结果使用易侕统计软件和R语言进行分析。统计结果表明:羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫抗体平均阳性率分别为42.57%、87.99%、73.64%和64.45%。R语言分析结果表明:羊A、O、Asia I型FMD和PPR免疫抗体阳性率在贵州省的不同地区中差异不显著(P>0.05);不同养殖方式对羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫效果影响差异不显著(P>0.05);不同海拔对羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫效果影响差异不显著(P>0.05);不同温度对羊A、O型FMD的免疫效果影响差异极显著(P<0.01)。结果提示,贵州省羊O、Asia I型FMD免疫抗体阳性率达到国家农业部动物疫病监测合格要求,羊A型FMD与PPR免疫抗体阳性率未达到国家农业部动物疫病监测合格要求;温度对羊A、O型FMD的免疫效果影响较大。本研究为贵州省羊A、O、Asia I型FMD疫苗合理免疫程序的制定提供一定的理论依据。

单宁酸对嗜水气单胞菌转录组影响的研究

嗜水气单胞菌作为水产养殖业中的主要病原菌,严重危害该产业的发展。为探究单宁酸对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其转录组的影响,本实验将单宁酸2倍倍比稀释(8μg/mL~8 192μg/mL)后,测定单宁酸对嗜水气单胞菌ATCC 7966株的最小抑菌浓度(MIC);将嗜水气单胞菌分别与不同浓度的单宁酸共培养,根据所测细菌OD600nm值(共测24 h),绘制细菌的生长曲线。结果显示,单宁酸对嗜水气单胞菌的MIC为2 048μg/mL;浓度低于64μg/mL (临界值)单宁酸处理后不影响嗜水气单胞菌的生长。因此本实验采用64μg/mL的单宁酸与嗜水气单胞菌ATCC 7966株共培养,每组重复4次,12 h后提取各组嗜水气单胞菌总RNA,反转录为cDNA后构建cDNA文库,再利用随机引物,经PCR扩增、定量后,采用Illumina HiSeq测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。通过计算每个样品中r RNA的占比(rRNA%)及碱基的错误率对测序数据质控;采用Bowtie2将获得的各组嗜水气单胞菌测序数据与GenBank中嗜水气单胞菌ATCC 7966株参考基因组比对,分析它们之间的相似性。结果显示,各组测序样品的r RNA%和碱基错误率均分别低于0.8%和0.024%,且与参考基因组的相似性均大于99%,表明测序数据可靠,可以用于后续分析。采用edgeR、DESeq2和DESeq软件筛选并分析各组嗜水气单胞菌转录水平差异及显著差异的基因,采用Goatools和KOBAS软件对转录水平显著差异基因进行GO功能注释与KEGG信号通路的富集分析,利用RT-q PCR对转录水平显著上调和显著下调的各4个基因验证。结果显示:与对照组相比,单宁酸处理组嗜水气单胞菌中转录水平显著上调的基因144个,显著下调的基因104个,转录水平显著变化的基因主要集中在嗜水气单胞菌的VI型分泌系统(T6SS)、铁调控和Ton B系统、ABC转运蛋白系统相关蛋白的编码基因。GO功能注释结果显示,单宁酸处理嗜水气单胞菌后共显著富集到88个GO term,38个生物学过程(BP)、10个细胞组分(CC)、40个分子功能(MF),主要涉及蛋白质折叠、亮氨酸生物合成和代谢、铁载体生物合成和代谢、铁硫簇结合、金属簇结合、铁载体跨膜转运活性等。KEGG富集分析结果显示,单宁酸处理嗜水气单胞菌后的转录显著差异基因富集到5条信号通路,包括铁载体蛋白生物合成、硫胺素代谢、C5-支链二元酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成及脂质与动脉粥样硬化等。RT-q PCR验证结果显示,RNA-Seq与RT-q PCR结果基本一致。本研究首次分析了单宁酸处理嗜水气单胞菌后的转录组数据的变化,证实单宁酸主要影响嗜水气单胞菌支链氨基酸、铁载体及硫胺素的生物合成和代谢等信号通路,从而影响该菌的生理生化功能甚至毒力。本研究为全面探究单宁酸在防治嗜水气单胞菌感染中的作用及作用机制奠定了实验基础,同时也为探寻嗜水气单胞菌抗生素的替代品提供新思路。

A型产气荚膜梭菌感染鸭回肠代谢组学分析

旨在应用非靶向代谢组学技术探究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type A,CpA)感染鸭回肠差异代谢物变化特征。试验选取CpA感染37日龄健康雏鸭,采用剖检病理观察和PCR检测确定CpA感染成功后,使用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测对照组和CpA感染组感染66、90、114 h时鸭回肠的代谢组学,筛选并分析潜在的差异代谢物及相关代谢通路,最后选取对照组和CpA感染114 h组差异代谢物验证。结果表明:经剖检病理观察和病原核酸检测确定成功构建了鸭CpA感染模型;PCA图中回肠样本有部分重叠,提示感染组与对照组鸭回肠间可能存在相同的离子化合物;感染鸭66、90和114 h总差异代谢物种类分别有14、16和24种,富集的代谢通路分别有13、14和28条,主要集中在花生四烯酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、酪氨酸代谢等;同时差异代谢物验证结果显示,感染114 h回肠缬氨酸和丙氨酸含量变化趋势均与非靶向代谢组学检测结果一致。综上所述,CpA感染鸭的致病机制可能通过影响相关氨基酸的代谢通路,调控相关代谢产物的合成。

嗜水气单胞菌群体感应系统及其抑制剂应用研究进展

近年来随着抗生素在水产养殖业的滥用,导致细菌耐药性的产生,因此,需要绿色、安全、高效的新型策略来缓解耐药问题。群体感应作为一种通讯机制,根据细菌细胞间的密度来调节其行为和生理反应,其中许多活性物质能通过群体感应系统在不抑制病原菌生长的情况下影响病原菌的致病性,同时减缓耐药的产生。因此,近年来抑制细菌群体感应系统的抑制剂成为研究热点。嗜水气单胞菌作为水产养殖业中的主要条件病原菌,严重危害着水产养殖业的发展。笔者介绍了嗜水气单胞菌群体感应系统的作用机制,对细菌生物被膜的调节,以及群体感应系统抑制剂中草药和益生菌在防控嗜水气单胞菌中的应用,旨在分析嗜水气单胞菌群体感应抑制在未来的发展潜力,为水产养殖业中嗜水气单胞菌的防控提供一定的参考。

刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌效果及作用机制

【目的】探讨刺梨渣提取物对水产养殖业中主要病原菌嗜水气单胞菌的抑菌作用和机制。【方法】通过微量稀释法和平板计数法测定刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC),通过集群运动实验检测刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌集群运动的影响,通过脂肪酶和蛋白酶活性实验检测刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌脂肪酶活性和蛋白酶活性的影响,通过溶血实验测定刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌溶血性的影响,此外通过结晶紫法检测生物膜的形成,以及荧光定量RT-PCR检测毒力和调控系统的相关基因表达情况。【结果】刺梨渣提取物对3株嗜水气单胞菌的MIC为128 mg/mL;其中嗜水气单胞菌ATCC7966的MBC为256 mg/mL,其余两株嗜水气单胞菌的MBC均>512 mg/mL。刺梨渣提取物浓度低于8 mg/mL时,不影响菌株生长;刺梨渣提取物≥4 mg/mL时,对生物膜形成、蛋白酶活性和溶血活性都具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖抑制,但对脂肪酶的活性影响较小。荧光定量RT-PCR结果发现刺梨渣提取物能引起嗜水气单胞菌群体感应(QS)系统中luxS和ahyr基因表达显著下调;同时气溶素aerA表达量也显著下降。【结论】刺梨渣提取物能抑制嗜水气单胞菌生长及运动能力、酶活性、溶血活性、生物膜的形成以及相关毒力基因的表达,表明刺梨渣提取物是一种潜在的嗜水气单胞菌替抗物。

绵羊肺炎支原体的研究进展

文章介绍了绵羊肺炎支原体的病原特征、致病性及致病机理、疫苗研制情况,并提出加强研究的方向,为该病的防治及疫苗开发提供参考。

贵州省牛口蹄疫免疫抗体检测分析

为研究贵州省不同地区、养殖方式、海拔和温度对牛O、A及Asia 1型FMD免疫抗体阳性率的影响。采用酶联免疫吸附试验对2017-2020年收集的贵州省各市(州)282个养殖场的牛血清(共计3215份)进行上述疫病的免疫抗体检测分析。结果表明,牛O、A及Asia 1型FMD的免疫抗体阳性率分别为81.90%、67.85%和71.14%。R语言分析结果表明,牛O、A及Asia 1型FMD免疫抗体阳性率在贵州省的不同地区中差异不显著(P>0.05);不同养殖方式对牛O型FMD的免疫效果影响差异显著(P<0.05);不同海拔对牛O、A和Asia 1型FMD的免疫效果影响差异不显著(P>0.05);不同温度对Asia 1型FMD的免疫效果影响差异极显著(P<0.01)。结果提示,贵州省牛O型FMD的免疫抗体阳性率达到国家农业农村部动物疫病监测合格要求;不同养殖方式对牛O型FMD的免疫效果影响差异显著;不同温度对Asia 1型FMD的免疫效果影响差异极显著;贵州省所具有的天然海拔条件有利于牛Asia 1型FMD免疫防控。该研究为贵州省牛O、A及Asia 1型FMD疫苗合理免疫程序的制定提供一定的理论依据。

噬菌体在鱼类病原菌防治中的应用研究进展

随着鱼类养殖的高密度、大规模发展,细菌性疾病的暴发成为难以避免的问题。当前对抗细菌性疾病的主要手段是使用抗生素,但随之而来的是抗生素耐药和环境污染问题,选择适合鱼类抗生素替代物显得尤为重要。噬菌体作为一种特异性强和不易产生耐药性的抗生素替代物,广泛应用于治疗各种细菌性疾病。论文综述了噬菌体在鱼类养殖业中的应用研究进展和当前存在的问题及解决策略,给噬菌体在鱼类的应用发展提供一定的参考。

山羊痘病毒粒子的电子显微镜观察

本研究室2003年以来对山羊痘病毒感染多种细胞进行了透射电镜观察。在感染的皮肤和黏膜上皮细胞浆中观察到大量不同成熟阶段的典型山羊痘病毒粒子,病毒粒子也见于巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞胞浆内,甚至少量散在血管腔中。用山羊痘病毒分离物感染鸡胚绒毛尿囊膜形成痘斑,其上皮细胞和成纤维细胞中也可见成熟和不成熟的病毒粒子,同时感染BHK-21细胞也观察到典型的山羊痘病毒粒子。

仔猪腹泻源大肠杆菌贵州株K_(88)菌毛研究

通过玻片凝集试验、抗D_甘露糖微量血凝试验 (MRMH)、离体细胞粘附试验、菌体蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS_PAGE)和免疫印迹、质粒DNA提取及电泳等 ,分析了仔猪腹泻源大肠杆菌贵州株 (4 0 9_11)所产K88菌毛的血凝谱、对肠上皮细胞粘附特性、菌毛蛋白亚单位分子量 ,并对其K88基因进行了初步定位。结果表明 :其所产K88菌毛的血凝谱能凝集豚鼠和鸡红细胞 ;能介导细菌粘附于仔猪离体肠上皮细胞 ,这种粘附作用能被特异的K88抗血清阻断 ;菌毛蛋白亚单位的分子量为2 35 0 0Da;K88基因位于一个分子量为 85kb(5 4× 10 6Da)的大质粒上。当菌株于 18℃生长时 。

贵州省山羊痘病例的病原学鉴定与病理学观察

为对近年来发生在贵州省部分地区疑似山羊痘的疫情做出确诊，取疑似山羊痘病羊皮肤及黏膜痘疹，处理后接种Vero—E6细胞，可观察到明显的细胞病变；反向间接血凝试验显示，细胞培养液血凝效价为2^2～2^5，阳性率达100％（5／5）；以山羊痘病毒P32基因的1对特异性引物，从9份痘疹样本（共10份）及2株分离株PCR扩增出963bp的特异性DNA条带；取感染细胞培养物接种成年健康山羊，山羊出现了典型的临床症状和病理变化，接种10日龄鸡胚绒毛尿囊膜也能表现出明显的痘斑病变，痘斑出现率可达40％；病羊上皮细胞呈不同程度的水泡变性，胞浆内含多量嗜酸性包涵体；细胞内存在圆形或卵圆形、有囊膜、大小约为310nm×204nm的病毒粒子。结果表明，近年来发生在贵州省部分地区的山羊疫情是山羊痘所致。

斑点叉尾致病性嗜水气单胞菌的分离

从贵州乌江库区某渔场发病的斑点叉尾中分离出4株细菌。经形态学、染色特性、溶血性和生理生化特性鉴定,分离到3株嗜水气单胞菌。实验接种到鲤和小白鼠分别于48h和72h全部死亡,并从实验鲤鱼和小白鼠中回收到分离菌。药敏试验表明,它们对常用抗生素呈不同程度的敏感性。