人胰岛素样生长因子受体及其生长因子在原发性肝癌中同时过量表达

人胰岛素样生长因子II(IGFⅡ)是一种胚胎性生长因子,与肝、肌、肾细胞生长有关,但其详细功能仍不明,我们曾于1988年报道了人原发性肝癌中IGFⅡ的过量表达,以后又进行了IGFⅡ基因工程的表达研究。

胎肝及肝癌组织中IGF-IR的表达研究

应用RT-PCR技术,从胎肝中克隆出IGF-IRβ亚基的cDNA,序列分析证明同已报道的人胎盘膜IGF-IR cDNA顺序相同,提示IGF-IR在胎肝的分化发育过程中具有生理意义,应用这一IGF-IR cDNA探针进行Northern印迹杂交分析,发现肝癌组织IGF-IR过量表达,明显高于相应的癌旁肝组织和正常肝组织,表明IGF-IR参与原发性肝癌的发生或发展,认为肝细胞膜上的IGF-IR与其配基结合,可通过自分泌/旁分泌(Autocrine/Paracrine)方式。一方面促进胎肝的分化,另一方面参与肝细胞的恶性转化,肝细胞过量表达IGF-IR是引起恶性转化的重要因素之一。

酵母LAG1同源的人类长寿保障新基因LASS2的克隆和功能研究

目的 分离和克隆肝癌相关基因。方法 我们用高通量功能筛选和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法从人肝cDNA文库中克隆到一个与酵母长寿保障基因LAG1高度同源的人类新基因LASS2 (homosapienslongevityassurancehomologue 2ofyeastLAG1)。结果 LASS2在正常人肝组织和肾组织中高表达 ,其表达谱不同于早先在人中克隆到的另一个与酵母LAG1高度同源的人类长寿保障基因LAG1Hs- 1。放射杂交基因定位显示LASS2位于人类染色体 1q11,酵母双杂交和GST结合实验发现LASS2蛋白能与细胞中的几个膜相关受体或转运体相互作用 ;另外 ,LASS2在体外对人肝癌细胞的克隆形成具有抑制作用 ,提示该基因可能参与细胞的生长调控。结论 LASS2是一个新的肝癌相关基因。

大鼠早期肝纤维化α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA及相应胶原蛋白表达的初步研究

应用Northern杂交及免疫组化方法.观察CC1_4诱导的大鼠肝纤维化形成不同阶段α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达与相应Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白ColⅠ、ColⅢ及前Ⅲ型胶原端肽(PⅢP)表达间的变化规律及其相互关系。结果表明:①肝纤维化时α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达增强,早期以α_1(Ⅲ)mRNA为主;α_1(Ⅰ)及α_1(Ⅲ)前胶原mRNA均于3～4周时呈一过性下降。②Ito细胞是肝纤维化过程中产生Col Ⅰ、ColⅢ及PⅢP的主要来源,肝细胞亦具有一定的合成ColⅢ及PⅢP的能力。③应用Northern杂交技术检测前胶原mRNA表达,能从基因水平了解肝内胶原含量的变化,能更敏感地反映肝纤维化的倾向。

人原发性肝细胞癌和癌旁组织ets-2,IGF-Ⅱ,C-myc和N-ras表达的研究

本文研究了12对人原发性肝细胞癌(PHC)和癌旁组织ets-2,IGF-Ⅱ,C-myc和N-ras的表达。在12对标本中,至少有1种以上的癌基因表达增加。ets-2表达最多见,12对标本中均有表达,以3.5和2.4 kb的条带为主,而正常对照肝表达4.5,3.5和2.4 kb条带,以4.5和3.5 kb条带为主。6例癌旁组织ets-2的表达高于PHC。IGF-Ⅱ在3对标本中表达为5.0和2.0 kb的胚胎型转录物;1例标本癌旁组织有5.0和2.0 kb IGF-Ⅱ表达而PHC中却没有表达.N-ras在8/12 PHC和6/12癌旁组织表达为4.0 kb的条带,2例癌旁组织N-ras的表达高于PHC.9/12 PHC和6/12的癌旁组织有4.0 kb C-myc表达条带,其中1例癌旁组织C-myc的表达高于PHC.在2例PHG,除4.0 kb条带外还有2.2 kb的C-myc的表达。

人原发性肝细胞癌和癌旁组织HBV X基因产物表达和ets-2、IGF-Ⅱ、C-myc及N-ras表达的对比研究

本文采用RNA杂交和免疫印迹法检测了7对原发性肝癌(PHC)和癌旁组织及血清中HBxAg、ets-2、IGF-Ⅱ、C-myc和N-ras的表达。结果表明,在肝组织内HBxAg表达为17和28Kd的特异性条带。在3例血清中,可见到17Kd HBxAg。在有HBxAg表达的肝组织内,常有多种痛基因如ets-2,IGF-Ⅱ、C-myc和/或N-ras同时表达增加的现象,提示HBxAg的非特异性反式激活作用。在部分癌旁组织有癌基因表达高于癌组织的现象。文内讨论了HBxAg与癌基因表达相互关系及在PHC发生中的可能作用。

生物节律相关基因Cry1与肝癌的相关性探讨

目的研究生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展的相关性。方法逆转录PCR、Northernblot和免疫组织化学方法检测Cry1在各种肿瘤细胞系、人正常组织及人肝癌与配对的癌旁组织中的表达。构建Cry1重组的真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721。生长曲线和软琼脂克隆形成试验检测Cry1过表达的SMMC-7721细胞的体外增殖速度。逆转录PCR检测与Cry1相互作用的生物节律基因在Cry1过表达的SMMC-7721中的表达。结果Cry1在人各种正常组织中均有不同程度的表达。Cry1在人肝癌癌旁组织中的表达水平高于癌组织中的表达。过表达Cry1对SMMC-7721细胞的体外增殖没有明显影响。结论生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展可能有一定的相关性。

人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体反义基因对肝癌细胞恶性表型的影响

目的 研究人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体 (IGF ⅡR)反义基因对SMMC 772 1人肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法构建IGF ⅡR正、反义基因真核表达质粒 ,用磷酸钙 DNA共沉淀的方法 ,导入SMMC 772 1人肝癌细胞株 ,经G41 8培养基筛选稳定的抗性细胞。采用Northern杂交检测对转染细胞内源性IGF ⅡR基因转录的抑制 ,观察转染细胞克隆形成率 ,细胞生长曲线 ,软琼脂生长及裸鼠致瘤能力的变化。结果 IGF ⅡR反义基因转染肝癌细胞的内源性IGF ⅡR基因转录受到有效抑制 ,转染细胞克隆形成率明显降低 ,并失去在软琼脂上生长的能力 ,裸鼠致瘤性明显降低 ,但细胞生长曲线无明显变化。结论 IGF ⅡR反义基因可以有效阻断IGF Ⅱ至IGF ⅡR的自泌 旁泌生长刺激信号环路 ,一定程度地抑制肝癌细胞的恶性表型。

肝素和PDGF对人肾小球系膜细胞基质合成和分泌的影响

目的：探讨肝素和血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）胶原合成和分泌以及纤连蛋白（ＦＮ）、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：应用３Ｈ－脯氨酸掺入、胶原酶消化法测定胶原含量；采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＦＮ、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ。结果：对照组、肝素组及ＰＤＧＦ组细胞内胶原含量分别为（１．２５０±０．５０１）％，（０．８０９±０．１６１）％和（２．６９０±０．５９７）％，而其培养液中的含量分别为（１．６０８±０．５１２）％，（０．１２２±０．０８９）％和（３．８７０±０．６４７）％。上述结果显示肝素对该细胞合成和分泌胶原有抑制作用（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），而ＰＤＧＦ则具有明显促进作用（Ｐ均＜０．０１）。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析结果显示肝素可抑制ＭｓＣＦＮ、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ则可明显增强其表达。结论：肝素对人肾小球ＭｓＣ基质的合成和分泌有抑制作用，而ＰＤＧＦ则具有促进作用，其作用机制均发生在基因转录水平上。

吸烟者肺肿瘤ras原癌基因活化的检测

从有长期吸烟嗜好的肺癌患者的手术标本（鳞状上皮癌）提取高分子量的癌细胞基因组DNA，对小鼠成纤维细胞（NIH／3T3）进行转染，获二轮转化细胞，发现二轮转化率是一轮的3倍．证实在转染过程中转化灶出现的多少，与所用DNA的量有关，二轮转化细胞可在软琼脂上培养存活，接种裸鼠（BALB／c）于注射部位长出肿瘤。表明该二轮转化细胞具有肿瘤细胞的特性，用32P标记的人Alu重复序列和ras癌基因家族探针分别与一轮、二轮转化细胞和裸鼠肿瘤细胞的DNA进行Southern印迹转移和分子杂交。结果在三者细胞的DNA中都见有与Alu杂交的阳性条带，从而证明在转染过程中人体特有的Alu重复序列已整合到转化细胞的基因组中，并确定了转化细胞中的转化基因之一的属性为Ha－ras癌基因，本工作提示吸烟可能是人体原癌基因（C－Ha－ras）活化和肺鳞癌发生的重要原因。

Ⅲ型胶原在人和大鼠肝纤维化中的意义

为了深入研究Ⅲ型胶原在纤维化中的意义，本工作应用核酸分子杂交和免疫组化技术，对人体慢性肝病和大鼠肝纤维化模型（早期）肝组织中Ⅲ型胶原蛋白不同阶段的表达产物（前胶原ｍＲＮＡ、前胶原端肽和胶原蛋白）作定性、定量和定位检测，同时对Ⅰ型胶原作相应观察，兼以结蛋白和α－平滑肌肌动蛋白分别作为贮脂细胞和肌成纤维细胞的标记。结果显示肝纤维化早期和活动期主要是Ⅲ型胶原合成增多，并证明间质细胞特别是炎症活动区窦旁贮脂细胞及其相关细胞是肝纤维化时主要的胶原生成细胞。

CCl_4诱导大鼠肝纤维化过程中α1（Ⅰ）、α1（Ⅲ）及α1（Ⅳ）前胶原基因表达的动态观察

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对ＣＣｌ４诱导大鼠肝纤维化过程中α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）３种前胶原ｍＲＮＡ的表达状况进行观察。结果证实α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）３种前胶原ｍＲＮＡ的表达均有增加，但三者的变化并不同步。纤维化早期首先是α１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ表达增加。随后是α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ，后者在整个肝纤维化过程中呈优势性表达。α１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的增加又滞后于α１（Ⅲ）且上升缓慢，至第２０周时才逐渐与α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ含量相近。可能是由于存在反馈性抑制的缘故，使得前胶原基因表达的上调并非呈直线递增而是曲线上升。

多结节原发性肝癌和癌旁组织中多个癌基因表达的分析

为寻找肝癌发生过程中较为重要的癌基因，并用于基因诊断作者应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分析８例多结节肝癌及相应癌旁组织中的ＩＧＦ－Ⅱ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ３种癌基因的表达水平，结果发现３种癌基因在８例癌结节中呈不同程度的过量表达。其中１例的各个癌结节中３个癌基因表达程度基本平行。ＩＧＦ－Ⅱ和ｃ－ｍｙｃ在癌旁组织呈过量表达，其中３例ＩＧＦ－Ⅱ的表达超过癌组织，而Ｎ－ｒａｓ在癌旁组织的表达都接近正常。提示ＩＧＦ－Ⅱ和ｃ－ｍｙｃ基因与肝细胞增生有关，而Ｎ－ｒａｓ过量表达具有诊断意义。

胃癌c-myc c-Ha-ras基因DNA甲基化与病理的关系

以限制性内切酶HpaⅡ／MspⅠ消化、Southernblot方法，分析22例进展期胃癌手术标本的癌灶、癌旁和外周正常组织细胞内c－myc、c－Ha－ras癌基因位点的DNA甲基化状态，并与其组织病理学变化相比较。结果发现1例正常组织、13例癌旁和10例癌灶细胞c－myc基因和自显影较清楚的10组标本中的4例癌旁、5例癌灶细胞内c－Ha－ras基因呈低甲基化状态。以上改变与肿瘤大体形态、组织类型、癌细胞分化程度、淋巴结转移及癌细胞浸润深度等病理学改变无明显相关性。

信使RNA差异显示法比较正常结肠粘膜与结肠癌的基因表达

信使ＲＮＡ差异显示技术是Ｌｉａｎｇ等［１］１９９２年首创的用于鉴别在某一细胞系、组织或某个发展阶段中特异表达的基因的新方法。其特点在于能迅速方便地获得大量候选的分子生物学信息。该技术在结肠癌研究中的应用尚未见报道。我们将该技术用于比较正常结肠粘膜与结...

133例急性白血骨病髓涂片嗜酸粒细胞的观察

１３３例急性白血骨病髓涂片嗜酸粒细胞的观察陶元，周筱梅，梅勇（四川省卫生管理干部学院，成都６１００４１）关键词急性白血病，嗜酸粒细胞，骨髓不同类型急性白血病（ＡＬ）骨髓涂片中嗜酸粒细胞的数量和形态变化国外早有报道，特别是Ｍ２和Ｍ４ＥＯ型的有染色体异常...

人肝细胞癌中整合蛋白α5β1表达的生物学意义

为了探讨整合蛋白α5β1在肝细胞癌中表达状况及其生物学意义，本文应用Northern，印迹杂交、免疫组化及图像分析技术对肝癌细胞株7721、人肝细胞癌(HCC)组织作整合蛋白α5β1表达分析。结果表明，整合蛋白α5、β1 mRNA在肝癌细胞中表达量明显低于正常肝细胞，且与肝癌的分化程度相关；肝癌浸润部位癌细胞整合蛋白α5β1表达减少；伴肝内转移组其原发灶内α5、β1表达水平较无肝内转移组明显下降，但其静脉内癌栓外周部癌细胞表达增强。结果提示，整合蛋白α5β1的表达对HCC分化、浸润、转移起重要作用。

人肺癌基因组DNA对NIH/3T3细胞的转化作用

从未用过抗癌细胞毒药物的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的手术标本(鳞状上皮癌)提取癌细胞基因组总DNA。对小鼠成纤维(NIH/3T3)细胞行转染实验。获二轮转化细胞,发现二轮转化率是一轮的2.7倍。在转染过程中转化灶出现的多少,与所用DNA的量有一定关系。 二轮转化细胞能在软琼脂上存活生长,接种裸鼠能长出肿瘤,分离肿瘤组织细胞,体外培养传代存活。表明该二轮转化细胞具有肿瘤细胞的特性。 取一轮、二轮转化细胞和裸鼠肿瘤细胞的DNA分别与放射性^(32)P标记的人体特有的Alu重复序列和ras家族基因探针进行Southern印迹转移和分子杂交。结果在三者细胞的DNA中都见有与Alu杂交的条带。这表明在转染过 程中人体特有的Alu重复序列已整合到转化细胞的基因组中。并确定了转化细胞中的转化基因之一的属性为Ha-ras癌基因。本工作提示吸烟可能是人肺鳞癌发生和Ha-ras活化的重要因素。

细胞因子TGF－β_1、PDGF－BB、bFGF在人肝纤维化中的作用

研究和探讨转化生长因子（ＴＧＦ）－β１、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－ＢＢ、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在人肝纤维化中的作用，进一步阐明人体慢性肝病纤维化发生机制。外科切除的肝细胞标本按病变活动程度分为活动性、非活动性或轻度活动性以及对照组，以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分子杂交法测肝组织ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ，以免疫组化法显示组织原位ＰＤＧＦ－ＢＢ，ｂＦＧＦ及其相关细胞，并作半定量分析。结果：（１）肝病组织内ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ含量随肝病活动程度而增高（Ｐ＜０．０１）；（２）组织原位ＰＤＧＦ－ＢＢ、ｂＦＧＦ多肽定位及阳性细胞半定量显示，活动性肝病时两者均增高，阳性细胞所在部位与单核巨噬细胞以及胶原生成细胞一致，与Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积也有密切关系。结论：本实验提示细胞因子ＴＧＦ－β１、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ｂＦＧＦ在人肝纤维化中起着关键的调节作用。