鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。

猪圆环病毒2型感染的血清学分析

应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 0 % ,全省猪的 PCV2感染的平均血清阳性率为 5 8.31% ,其中种猪感染的血清阳性率为 5 9.38% ,断奶后猪感染的血清阳性率为 5 6 .6 5 %。长白种猪感染的血清阳性率为 4 4 .83%、长白仔猪感染的血清阳性率为 6 4 .2 8% ,明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。 PCV2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群 ,其 PRRSV和 Pr V的抗体阳性率低。这些结果说明 ,PCV2在猪群中的感染非常普遍 ,不同品种猪对 PCV2的易感性不同 。

浙江地区传染性法氏囊病毒变异株分离及鉴定

７ 株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织直接在鸡胚成纤维细胞盲传２ ～１５ 代后，均能不同程度产生细胞病变效应（ ＣＰＥ） ，并通过病毒血清中和试验、动物回归试验、电镜观察、琼脂免疫扩散试验，理化特性测定等试验证实七株病原为传染性法氏囊病病毒。在此基础上将７ 个浙江地区的ＩＢＤＶ 野毒株、１ 个四川地区的ＩＢＤＶ 野毒株和２ 个疫苗毒株经病毒—血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。根据交叉中和试验所得的Ｒ 值，应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系，显示传染性法氏囊病病毒的变异存在地或性差异。

传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达

核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4

不同组织嗜性传染性支气管炎病毒核衣壳基因的遗传变异性分析

根据GenBank发表的传染性支气管炎病毒 (infectiousbronchitisvirus,IBV)Beaudette毒株核衣壳 (nucleocap sid ,N)基因序列设计一对特异性引物 ,利用RT -PCR方法分别扩增了疫苗毒株IBV -H5 2、嗜腺胃ZJ971株、嗜肾IBV -X和N株的N基因ORF ,并克隆到质粒载体 pBluescriptSK( +) ,测序后用PCgene和DNAStar软件分析。结果显示 :4株IBV的N基因均含有一个长 12 30bp的ORF ,编码一由 40 9个氨基酸残基组成的N蛋白。嗜肾IBV -X和N毒株的N基因存在HindⅢ酶切位点。与来自GenBank的另外 8株IBV比较 ,ZJ971株与它们的N蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在 88 2 %～ 98 6 %和 91 2 %～ 97 8% ;N株则分别为 86 6 %～ 87 4%和90 5 %～ 91 5 % ;X株分别为 86 3%～ 87 4%和 90 0 %～ 91 5 % ;H5 2分别为 90 4%～ 98 3 %和 92 0 %～98 0 %。ZJ971株、N和X株的N基因的突变特点是散在的点突变。嗜腺胃ZJ971株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是H111D、S117A、V14 2 L、P171A和E4 0 1D ;嗜肾IBV -X和N株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是A4 6S、A4 8P、L189R、N190 S、E2 2 0 D、I2 2 3A、V2 3 6Y、S2 37K、K2 4 0 Q、Q2 86R、T2 99K、R30 1E、E33 4 D、V33 5E、V336P和T351S。

鸡传染性腺胃炎病原分离和初步鉴定

从１９９７年在浙江省建德市发生的一种新的以腺胃肿大为特症的鸡传染病病例中收集的腺胃组织（ＺＪ９７１）为鸡胚接种材料，感染鸡胚第１代可达３３．３％的死亡率，第３代达７５％的死亡率并出现规律性死亡，自第６代开始死亡率达１００％．鸡胚尿囊液经１％胰酶处理后可凝集鸡和鼠的红细胞，电镜观察可见直径９０～１９０ｎｍ的带囊膜和突起的冠状病毒粒子，中和试验结果显示低滴度的ＺＪ９７１可被ＩＢＶ－Ｈ５２和Ｔ株血清中和，ＺＪ９７１对酸、碱、热、乙醚和氯仿敏感，对反复冻融不敏感．这表明，从腺胃病变型鸡群中分离的ＺＪ９７１毒株是冠状病毒科的一个成员．

鸡肾型传染性支气管炎病毒分离及鉴定

从浙江省内大型商品代鸡场和专业户鸡场出现的以肾肿大为主要特征的呼吸道疾病病鸡中分离到六株病毒，易感雏鸡．接种３ｄ后出现一过性呼吸道症状，感染鸡死亡集中在感染后１４～１８ｄ，病死鸡出现肾肿大、苍白呈花斑状、大量尿酸盐沉积．鸡胚感染后出现死亡和产生侏儒胚，鸡胚尿囊液不凝集红细胞，电镜观察可见约１２０ｎｍ的病毒粒子．分离病原在鸡胚中可干扰新城疫病毒Ｌａｓｏｔａ株的繁殖．上述试验证实分离毒株为鸡肾型传染性支气管炎病毒．

鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达

鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%.

实验性雏鸭隐孢子虫病病理学研究

30只10日龄无隐孢子虫感染的雏鸭口腔和气管内接种隐孢子虫卵囊,于接种后不同时期观察临床症状和扑杀,进行病理组织学和电镜观察。结果表明:隐孢子虫仅寄生于雏鸭呼吸系统、法氏囊皱褶粘膜上皮细胞的游离面和法氏囊固有层内淋巴滤泡的皮质和髓质交界处未分化上皮细胞表面,引起上皮细胞大量增殖、坏死、剥脱及真性细胞浸润,导致雏鸭细胞增生性气管炎、支气管肺炎和法氏囊炎。

两系超级杂交稻Y两优1号母本直播制种技术

2008和2009年连续2a在湖南绥宁县武阳制种基地进行两系超级杂交水稻Y两优1号(Y58S/9311)母本直播制种14hm2,平均单产2.93t/hm2,最高单产4.2t/hm2,种子纯度99%以上。提出了该组合母本直播制种优质高产的配套技术。

传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文)

用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关.

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的遗传稳定性与免疫原性

将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) JD1 、JD2 、NB变异毒株直接适应于鸡胚成纤维细胞上致弱。 3个毒株2 1代和 3 5～ 3 8代细胞毒分别连续回归鸡体 5代。结果表明 ,IBDV JD1 株 2 1～ 3 5代、JD2 株 3 7代、NB株 3 8代细胞毒对雏鸡已基本失去致病力 ,是毒力相对稳定的弱毒株。 IBDV JD1 、JD2 、NB变异株弱毒以 3 0 0 0TCID5 0 、50 0 0 TCID5 0 、1 0 0 0 0 TCID5 0 、1 50 0 0 TCID5 0 4个不同免疫剂量免疫 SPF鸡后的攻毒试验结果表明 ,JD1 、NB毒株的免疫效果明显优于 B87、Bursine3毒株疫苗 ,具有优良的免疫原性。JD1 、NB毒株的最佳免疫剂量分别为 50 0 0 TCID5 0 、3 0 0 0 TCID5 0 。抗体消长规律表明 ,JD1 株疫苗一次免疫后的有效保护期为 2 1 4d,最低有效中和抗体保护效价为 1∶ 4 0 71。

浙江地区传染性法氏囊病病毒野毒株的血清亚型分析

７个浙江地区的ＩＢＤＶ野毒株、１个四川地区的ＩＢＤＶ野毒株和２个疫苗毒株经病毒血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。根据交叉中和试验所得的Ｒ值，应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系，显示传染性法氏囊病病毒的变异存在地域性差异。

中国地方品种鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析(英文)

鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维茵商品肉鸡IL 2cDNA .仙居鸡、丝羽乌骨鸡和艾维茵商品肉鸡IL 2基因的编码区均由 42 9nt组成 ,编码一个由 143个氨基酸组成的前体蛋白 .基因 5′端含有 17个核苷酸 ,3′端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3′ UTR中含有 5个重复的“ATTTA”序列 .编码蛋白氨基酸与来自GenBank的Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8～ 3 2位 .而这一区域仙居鸡和丝羽乌骨鸡的编码氨基酸序列与Kestrel来杭鸡相同 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡相同 .基因系统进化树分析表明 ,仙居鸡、丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡具有很近的亲缘关系 .中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 13

广东省粮食高产创建活动实践与成效

对2008—2011年广东省粮食高产创建活动进行综述,包括组织措施、管理措施、技术措施等方面;总结了粮食高产创建的成效,从全省粮食单产和总产、农业生产方式转变和农民收入等方面进行说明;对下一步深入推进广东粮食高产创建、进一步提高水稻单产水平提出了加大资金投入力度、完善高产创建机制、创新创建思路的建议。

母乳喂养对母婴健康远期影响的研究进展

母乳喂养能对母婴的远期健康产生深远影响,不但可以降低儿童在婴儿期湿疹、皮炎、哮喘和婴儿猝死综合征等疾病的发生几率,还可以减少其在青少年甚至成人期发生肥胖、糖尿病、淋巴瘤和白血病的可能性,并有助于儿童未来的体格生长、认知能力、社会适应能力、行为、气质和注意力等的正常发育,减少注意缺陷多动障碍的发生。此外,母乳喂养也使乳母得到许多意想不到的健康益处,它减少了乳母罹患疾病的机会,使其在将来发生乳腺癌等躯体疾病以及抑郁等精神疾病的可能性也大大降低。

水稻抗倒性研究进展

综述了近年来国内外关于水稻倒伏的类型、水稻倒伏构成因素以及提高水稻抗倒伏能力的各种措施,展望了水稻抗倒性研究的方向。

传染性腺胃炎病毒ZJ_(971)株的一些生物学特性

传染性腺胃炎病毒 (暂定名 )ZJ971毒株经鸡胚传代 ,可致鸡胚矮小并干扰新城疫在鸡胚中的复制。感染胚尿囊液经 1%的胰酶处理后可凝集鸡和鼠的红细胞。电镜观察可见 80～ 190nm大小的冠状病毒粒子。ZJ971毒株对热 (56℃ )、酸 (pH3)、碱 (pH12 )、乙醚和氯仿敏感 ,对反复冻融、胰酶不敏感。ZJ971毒株与传染性支气管炎病毒M4 1、T、Gray、Holte毒株病毒血清交叉中和的抗原相关R值分别为 :0 0 0 13、0 0 0 0 6、0 0 0 0 5、0 0 0 0 3。人工感染鸡生长发育障碍、胸腺萎缩 ,腺胃指数、腺肌胃指数增加 ,囊体指数下降。上述结果初步显示ZJ971毒株是不同于鸡传染性支气管炎病毒的冠状病毒 ,并首次在实验动物感染成功。

2009—2010年广东省晚造弱感光类型杂交水稻品种区域试验

对2009、2010年晚造参加广东省弱感类型杂交水稻新品种区域试验的博Ⅱ优691、振优616、博优615、博Ⅱ优615、粤香优169、博Ⅱ优312、锦优633、万金优122、龙优225、园丰优7148等10个新组合进行评述,从产量、米质、抗病性以及主要农艺性状等方面进行综合评价,鉴定出振优616、粤香优169等优质、高产组合,为广东弱感光型水稻的品种审定提供了依据,并对参试的10个组合在广东生态区域内的应用提出了建议。

注意缺陷障碍儿童的家庭环境和父母心理状况

目的:探讨注意缺陷障碍儿童的家庭环境和父母心理状况,为注意缺陷障碍的预防和治疗提供理论依据。方法:选择2004-01/2004-10在青岛大学医学院附属医院儿童保健门诊就诊的95例注意缺陷障碍儿童作为注意缺陷障碍组。随机抽选青岛市两所普通小学1～6年级的40例无注意缺陷障碍的学生作为对照组。采用家庭环境量表-中文版(FES-CV,问卷包括90道是非题,评价亲密度、情感表达、矛盾性、独立性、成功性、知识性、娱乐性、道德宗教观、组织性及控制性等10个家庭特征)和症状自评量表(SCL-90,包括躯体化、强迫、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性9个症状因子,共90个题目,每题采用5级评分,症状从轻到严重分别给予1～5分,得分越高表明症状越明显)分别对注意缺陷障碍患儿和正常对照组儿童的家庭环境和父母心理状况进行测试研究。结果:发放家庭环境量表-中文版问卷135份,回收完整问卷135份进入结果分析;发放父母症状自评量表问卷270份,回收完整问卷256份进入结果分析。①注意缺陷障碍组儿童家庭的亲密度、知识性、娱乐性、组织性、控制性分数均低于对照组家庭(P均<0.05),而矛盾性分数高于对照组(P<0.05)。②注意缺陷障碍组儿童父母的强迫、人际关系、忧郁、敌对、恐怖和偏执因子分数均高于对照组儿童父母(P均<0.05)。③注意缺陷障碍组儿童母亲的躯体化、强迫、人际关系、忧郁、焦虑、敌对、精神病7个因子分数均高于对照组儿童母亲(P均<0.05)。④注意缺陷障碍组儿童父亲的人际关系和敌对2个因子分数高于对照组儿童父亲(P均<0.05)。结论:注意缺陷障碍儿童处于相对不良的家庭环境中,其父母的心理状况欠佳。为注意缺陷障碍儿童创造良好的家庭环境,改善其父母的心理状况对于改善注意缺陷障碍儿童的预后是很必要的。