法尼醇在促氟康唑耐药白念珠菌凋亡中的作用机制

目的:初步探讨法尼醇促进氟康唑耐药白念珠菌凋亡的可能机制。方法:采用药物浓度梯度法构建氟康唑耐药的白念珠菌株,经鉴定后设为氟康唑耐药组;氟康唑敏感的白念珠菌株作为对照组。在2组中加入终浓度为200μmol/L的法尼醇,孵育24 h后采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT法)比色法检测加入法尼醇后氟康唑耐药与敏感白念珠菌的增殖情况。应用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等,检测并比较2组菌株的胱天蛋白酶3(caspase 3)的活化程度、菌株内还原型谷胱甘肽的含量及细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)含量,进而比较不同组菌株在细胞凋亡、细胞内氧化还原及氧化应激水平上的差异。结果:与对照组比较,加入法尼醇后,氟康唑耐药的白念珠菌株增殖下降,其差异具有统计学意义(P=0.0057)。氟康唑耐药组白念珠菌内的还原型谷胱甘肽的含量下降,细胞内ROS含量及胱天蛋白酶3活性上升,且差异均具有统计学意义(分别P=0.011、P=0.023、P=0.036)。结论:法尼醇通过减少耐药菌株细胞内还原型谷胱甘肽的含量,增加胞内ROS含量,增强胱天蛋白酶3活性,使耐药白念珠菌抗氧化能力下降并促使真菌发生细胞凋亡。

51例菊池病患者临床资料回顾性分析

目的 :比较、分析我院近10年收治的菊池病儿童及成人患者的临床特点及其异同,以提高诊断率,减少误诊、误治。方法:回顾性分析51例最终诊断为菊池病患者的临床资料,按照患者是否成年进行分组,比较2组之间的临床特点,并分析误诊、误治的原因。结果:51例患者中儿童组26例,成人组25例,2组中均以男性患者为主,男女比例分别为1.4∶1及1.3∶1。96.1%的患者在发病时有淋巴结肿大表现,且多累及颈部淋巴结(44例,占89.8%),其中成人组右侧颈部淋巴结受累更为多见(36.0%比15.4%,P=0.040 3),没有一例单纯锁骨上淋巴结肿大。82.4%的患者存在发热,2组之间差异无统计学意义(P=0.273 5),发热平均持续(23.5±36.2) d。51例患者中32例(62.7%)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)升高,31例(60.8%)白细胞减少,20例(39.2%)中性粒细胞比例降低。儿童组患者中性粒细胞比例减少更常见(65.4%比12.0%,P<0.000 1),而在LDH、白细胞计数等实验室检查结果之间差异无统计学意义。51例患者中35例(68.6%)曾被误诊,儿童误诊率(22例,84.6%)高于成人误诊率(13例,52.0%)(P=0.012 1)。最终51例经淋巴结活组织检查(活检)后确诊为菊池病,予糖皮质激素治疗后好转。结论:儿童与成人菊池病患者的临床特点相似,多有发热、淋巴结肿大、白细胞减少、LDH增高,此外儿童患者更易出现中性粒细胞比例减少,成人患者更易出现右侧颈部淋巴结肿大。另外,虽然患者几乎都存在淋巴结肿大,但若只累及锁骨上淋巴结,诊断为菊池病的可能性不大。以上可作为初步诊断菊池病的主要参考依据。对于怀疑菊池病的患者都应尽早进行淋巴结活检,避免或减少误诊、误治。

氯喹对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探究氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的作用及机制。方法:用对数生长期的HUVEC进行实验,分为5组,对照组细胞不经药物处理,LPS组用10μg/mL LPS刺激细胞,低、中、高浓度CQ组用10μg/mL LPS和低、中、高浓度CQ(0.1、1和10μmol/L)共同作用细胞。培养24 h后用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测BCL-2、BAX、裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)蛋白的表达。结果:LPS刺激细胞后导致HUVEC活力降低、凋亡增加,同时BCL-2/BAX蛋白比值降低,裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达增高(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值无明显变化(P>0.05);加入CQ作用后,低、中浓度CQ改善了LPS所致的细胞损伤,表现为细胞活力升高和细胞凋亡减少、BCL-2/BAX蛋白比值升高、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达降低(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值仍无明显变化(P>0.05),而高浓度CQ对LPS所致的细胞活力抑制和细胞凋亡无明显改善作用,BCL-2/BAX蛋白比值无明显变化(P>0.05),裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值则有所升高(P<0.05)。结论:低、中浓度CQ可通过抑制细胞凋亡途径减轻LPS对HUVEC造成的损伤,低、中浓度CQ对于自噬没有影响;高浓度CQ可通过激活自噬、促进细胞凋亡途径加重LPS对HUVEC的损伤。

多药耐药1基因法尼醇促氟康唑耐药白念珠菌凋亡机制初探

目的:进一步研究多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因过表达在法尼醇促进氟康唑耐药白念珠菌凋亡过程中的机制。方法:从美国国家生物技术信息中心搜索获得MDR1基因的mRNA,利用双酶切法将MDR1基因的ORF插入质粒pCaEXP的MET3启动子后面,构建可过表达MDR1基因的pCaEXP-MDR1重组质粒。利用醋酸锂法将重组质粒转染至白念珠菌,制备MDR1过表达的白念珠菌作为实验组,转染pCaEXP空质粒的白念珠菌作为对照组。在2组中加入200μmol/L浓度的法尼醇培养后,采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测2组生长曲线,应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测并比较2组菌株的胱天蛋白酶3(caspase 3)的活化程度,菌株内谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量及细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)含量,进而比较不同组菌株在细胞凋亡、细胞内氧化还原及氧化应激水平上的差异。结果:与对照组比较,加入法尼醇后,MDR1过表达的实验组白念珠菌的繁殖生长曲线明显下降,其差异在24 h后有统计学意义(P=0.0392)。实验组细胞内还原型GSH的含量(P=0.0001)及氧化型GSH含量(P=0.0044)下降,ROS含量(P=0.0038)及胱天蛋白酶3活性(P=0.0290)上升。结论:MDR1表达的增加使法尼醇显著减少白念珠菌细胞内GSH的含量,增加细胞内ROS含量,细胞抗氧化能力下降,胱天蛋白酶3活性增加,促使白念珠菌凋亡。

流感高发季,让我们一起了解流感的防治

秋去冬来,流感高发季节到来,接下来让笔者带大家了解一下流感防治的相关知识。1.流感是什么,流感,就是我们常说的流行感冒,主要引起我们如咽痛、咳嗽、肌肉酸痛等症状。它是由流感病毒引起的,目前分甲型、乙型、丙型和丁型这四型。其中,甲、乙两型是最常见,就是我们俗称的“甲流”“乙流”,可引起流感暴发。

2型糖尿病合并甲状腺功能异常患者凝血功能的回顾性研究

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)合并甲状腺功能异常与患者凝血功能的关系。方法:收集215例T2MD合并甲状腺功能异常患者[其中89例甲状腺功能亢进(甲亢)、126例甲状腺功能减退(甲减)]以及225例单纯T2MD患者的甲状腺功能和凝血功能资料,分析甲状腺功能异常与T2DM患者凝血功能的关系,并且就空腹血糖、甲状腺功能与出凝血相关指标之间的关联性进行分析。结果:T2DM合并甲亢组的凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)与单纯T2DM组相比显著缩短(P<0.05),而活化部分凝血活酶时间(APTT)在2组之间的差异无统计学意义(P>0.05),合并甲亢组的血纤蛋白原(FIB)水平显著升高(P<0.05)。与单纯T2DM组相比,T2DM合并甲减患者除TT延长(P<0.05)外,其他指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。空腹血糖与凝血功能PT之间呈负相关(r=-0.409,P<0.05),与FIB呈正相关(r=0.356,P<0.05);而促甲状腺素(TSH)与PT呈正相关(r=0.334,P<0.05),与FIB呈负相关(r=-0.465,P<0.05)。结论:甲状腺功能异常对T2MD患者凝血功能有一定的影响,合并甲亢可以加重T2MD的高凝状态,合并甲减则相对纤溶亢进。同时血糖不控制可能造成高凝事件的发生。

急诊医师使用超声仪判断左心功能的准确性评价

目的探讨急诊科医生使用便携式超声评估左心室收缩功能的准确性。方法前瞻性、观察性研究，连续选取2011年11月至2012年2月期间以急性呼吸困难主诉收入上海交通大学医学院附属新华医院急诊科的81例患者，排除创伤和急性心肌梗死患者。4名急诊科医生经过强化超声心动图培训后，使用便携式超声仪对81例患者行床旁超声心动图检查，获取左胸骨旁长短轴、心尖四腔和剑突下二维图像，使用目测法估计左心室射血分数，将患者左心室收缩功能分为正常、轻中度减低和严重减低三个类别，与超声科医生的超声心动图测量结果相比较。使用SPSS13．0统计软件进行kappa检验来分析二者的诊断一致性。结果以超声科医生测量的左心室射血分数为“金标准”，急诊科医生区分左心室收缩功能正常和减低的准确率为89％，急诊科医生判断患者左心室收缩功能减低的阳性预测值为83％，阴性预测值为93％，急诊科医生和超声科医生诊断一致性检验kappa系数为0．77（95％CI：0．70～0．84，P〈0．01）。对左心室收缩功能三个不同类别的判断，急诊科医生的准确率为84％，诊断一致性检验kappa系数为0．71（95％CI：0．64—0．78，P〈0．01）。结论急诊科医生经过超声心动图强化培训后，使用便携式超声仪能够准确地评估左心室收缩功能。

血栓调节蛋白表皮生长因子样结构功能域在毕赤酵母中的表达

目的 :构建血栓调节蛋白表皮生长因子样结构功能域(thrombomodulin-domain 2,TM-D2)的毕赤酵母表达体系,以获得重组TM-D2蛋白。方法:以人cDNA序列为模板,用PCR扩增出TM-D2片段,并将其插入pPICZaB质粒,构建重组表达质粒TM-D2-pPICZaB,重组质粒电击转化入毕赤酵母菌株GS115,用甲醇诱导酵母进行蛋白表达,行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白印迹法鉴定蛋白表达及纯化情况。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和质粒测序证实,TM-D2片段已正确克隆到表达载体中;SDS-PAGE和蛋白印迹法检测结果证实,上清液中含His-tag的重组TM-D2的表达,且其相对分子质量约为55 000。结论:TM-D2-pPICZaB初步判断TM-D2蛋白可在毕赤酵母中表达。

薄层沥青混凝土罩面在普通公路路面修复养护中的应用

薄层沥青混凝土罩面作为一种常见的公路路面修复养护材料,广泛应用于普通公路的修复养护工程中。为探讨优化薄层沥青混凝土罩面施工效果的技术方法,对薄层沥青混凝土罩面技术进行概述,对普通公路路面修复养护需求进行分析,提出薄层沥青混凝土罩面在普通公路路面修复养护中的优化策略。通过系统的施工流程和优化材料选择,可以确保薄层沥青混凝土罩面的质量和持久性。同时,配合科技创新和智能化应用,以及环境保护与可持续性的考量,可以进一步提升薄层沥青混凝土罩面在公路路面修复养护中的效果和质量。

血栓调节蛋白内皮生长因子样结构域和富含丝氨酸/苏氨酸结构域在大肠埃希菌中的表达

目的:通过构建血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)的内皮生长因子样结构域(D2)、富含丝氨酸/苏氨酸结构域(D3)及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大肠埃希菌表达体系,以获得TM-D23-GFP融合蛋白。方法:从美国国家生物技术信息中心查询TM的D23结构域、GFP的氨基酸序列,进行密码子优化和全基因合成,利用双酶切法将目标基因插入表达载体PET30a中,转化DE3菌株、诱导表达,通过镍离子-亚胺二乙酸-琼脂糖凝胶树脂(Ni-iminodicitic acid-sefinose resin,Ni-IDA)亲和层析、Q Sepharose TM FF离子交换层析纯化,最终得到TM-D23-GFP融合蛋白。结果:经酶切和测序鉴定证实,TM-D23片段已正确插入PET30a表达载体中;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测结果证实,含His-tag标签的TM-D23-GFP融合蛋白成功表达,且其相对分子质量约为60 000。结论:构建的TMD23-GFP融合蛋白可在DE3表达菌株中进行表达,为后期融合蛋白的功能研究打下基础。