全环节案例驱动式生物化学实验教学改革

为了进行新工科建设背景下生物化学实验课程教学改革,分析了当前生物化学实验教学存在的主要问题.开展了前中后全环节案例教学改革,以“通识到专业”教学视频制作为教学前期工作,真实科研情境案例为教学关键环节,“教——研——赛”的递进式实验实践为教学产出导向.实践结果表明,教学改革充分激发了教学活力,培养了学生自主创新能力,促进了教学科研成果互育共享.

苯乳酸与DNA相互作用及其抑菌机制研究

苯乳酸作为新兴的绿色高效抑菌剂,是传统化学防腐剂的理想替代品,在食品发酵工业方面有着广泛的应用。该研究聚焦于苯乳酸与DNA的相互作用以及在苯乳酸胁迫下的关键基因表达变化。发现苯乳酸能够通过氢键作用与范德华力并以插嵌的方式与DNA相互结合。结合分子对接构建了苯乳酸-ctDNA结合模型,结果表明苯乳酸更倾向于插入DNA的CG碱基对之间。最后通过转录组测序分析了苯乳酸胁迫乳酸片球菌DY15后基因表达变化,发现差异基因富集于细胞壁成分与核酸合成修复方面,说明细胞壁与基因组DNA可能是苯乳酸的主要攻击靶点。乳酸菌酸胁迫应答机制的改变说明精氨酸代谢途径也可能是苯乳酸抑菌过程中的关键靶点,通过抑制基因表达从而降低细菌酸耐受性,进而抑制细菌生长。总而言之,该研究解析了苯乳酸的抑菌机制,为后续苯乳酸作为生物抑菌剂的应用提供了理论支撑。

葛根素对卵巢切除大鼠血清E_2、腰椎BMD及骨髓细胞IL-6 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对卵巢切除(去势)大鼠血清E2、腰椎BMD及白细胞介素6(IL-6)mRNA表达水平的影响,探讨葛根素对绝经后骨质疏松的治疗机理。方法 40只健康3月龄雌性SD大鼠,随机分成假手术组、去卵巢(OVX)组、尼尔雌醇组和葛根素组,每组10只。假手术组进行假手术,其余各组通过切除双侧卵巢,术后分别给予尼尔雌醇(0.1 mg/kg体重)和葛根素(0.5 g/kg体重)治疗。3个月后测量腰椎骨密度(BMD),然后处死各组动物,从骨髓细胞中提取总RNA,采用相对半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测IL-6 mRNA表达。结果去势组大鼠血清E2、腰椎BMD值与对照组、尼尔雌醇组和葛根素组比较显著降低(P<0.05)。骨髓细胞白细胞介素6(IL-6)基因表达与对照组、尼尔雌醇组和葛根素组比较显著升高。结论 去势大鼠血清E2和腰椎BMD值显著降低,同时IL-6基因mRNA表达水平显著增高。葛根素可降低IL-6 mRNA表达,提高血清E2和腰椎BMD值。

灵山湾所:营造优质营商环境 打造创新示范高地

营商环境是区域发展的软实力与核心竞争力。近年来,国网山东省电力公司青岛市黄岛区供电公司灵山湾供电所“坚持创新驱动,优化营商环境”角度出发,始终把关注客户需求和期望放在首位,促进了营商环境的整体提升。打造班组特色文化班组文化是班组理念与愿景的沉淀和凝结,是班组持续改进的不竭动力,同时也是班组长远发展的有力支撑。

细菌纤维素高产菌株的筛选和初步鉴定

通过静置富集和分离纯化等步骤从自然腐烂的水果中分离得到6株产细菌纤维素的菌株。从腐烂的芒果中筛选得到1株可产细菌纤维素的混合菌,混合菌产量为湿重617.3 g/L、干重23.9 g/L。经过分离纯化确定该混合菌中只有1株产细菌纤维素菌株M7,在传代培养过程中M7菌株细菌纤维素产量最高且稳定。对M7菌株进行形态特征、生理生化特征和16S rRNA分子序列分析,初步确定M7菌株为葡糖醋杆菌,16S rDNA分子序列已提交至GenBank,序列号为JX303335。

去势大鼠骨髓细胞IL-6基因表达及骨组织学变化观察

目的观察去势大鼠骨髓细胞白细胞介素-6基因表达和骨组织学的变化。方法健康3月龄雌性SD大鼠48只,24只作为假手术对照组,24只手术切除双侧卵巢。分别于去卵巢后4、6、8、12周取去势组和对照组各6只大鼠骨髓细胞提取RNA(左侧股骨)。PCR方法检测IL-6基因表达和骨组织学(右侧股骨)观察。结果术后4周,实验组骨髓细胞IL-6基因均呈弱表达,6周呈强表达,8和12周表达水平较峰值下降,但仍高于对照组。去势后对照组各时间段IL-6基因表达水平未见变化。术后4、6和8周实验组骨组织学未见明显变化;12周骨髓腔扩大,骨皮质变薄,骨小梁变细,见断裂现象。结论绝经后骨质疏松的发生与IL-6基因水平增强有一定的关系。

JAK2/STAT3信号通路介导薯蓣皂苷元对骨性关节炎软骨细胞代谢的影响

目的：在小鼠骨性关节炎（OA）模型中观察薯蓣皂苷元（Dgn）通过酪氨酸蛋白激酶2／信号转导子和转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路对软骨细胞代谢和线粒体抗氧化应激能力的影响，以及Dgn在此过程中的作用。方法：15只C57BL／6小鼠随机分为健康对照组、模型对照纽和Dgn组，相应处理4周后取材，采用免疫组织化学法观察各组大体标本形态学变化，电子显微镜下观察软骨组织超微结构变化。将模型对照组培养软骨细胞随机分为四组：①模型对照组；②Dgn组；@Dgn＋阻断剂组；④阻断剂对照组。运用蛋白质印迹法检测各纽软骨细胞中P-JAK2、p-STAT3、Bax、琥珀酸脱氢酶（SDH）和细胞色素C氧化酶（COX）蛋白表达，并用比色法测定线粒体中超氧化物歧化酶（SOD）的含量及活性。结果：软骨组织形态学方面，模型对照组软骨细胞变化最明显，Dgn组细胞形态维持较好，软骨细胞膜完整；电镜下观察发现，模型对照组软骨组织标本表面损伤较为严重，而Dgn组软骨组织标本表面平整。与模型对照组比较，Dgn组p-JAK2、PSTAT3蛋白表达水平上升（均P〈0．05），Bax蛋白表达水平降低（P〈0．05），SDH、COX蛋白表达水平、SOD含量均较模型对照组增加（均P〈0．05）；而与Dgn组比较，Dgn＋阻断剂组P．JAK2和P-STAT3蛋白的表达减少，Bax蛋白表达增加，SDH、COX蛋白表达水平及SOD含量降低（均P〈0．05）。结论：JAK2／STAT3信号通路与OA软骨细胞病理变化密切相关。Dgn可以通过激活JAK2／STAT3通路，有效减轻OA病理过程中软骨细胞的线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡，发挥对OA软骨细胞的保护作用。

JAK2/STAT3信号通路介导姜黄素在骨性关节炎软骨细胞代谢中的影响

目的 ：探讨酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活子3（JAK2/STAT3）信号通路对软骨细胞代谢的影响以及线粒体抗氧化应激能力的改变,及JAK2/STAT3信号通路在此过程中的作用以及姜黄素对其影响。方法：选取雄性SPF级C57BL/6小鼠15只,体重10.05~15.00 g,平均12.80 g,随机分为对照组、OA组（Glasson法建立OA模型）及姜黄素＋OA组（在OA组处理的基础上,术后每日腹腔注射100 mg/kg姜黄素）,每组各5只。4周后用脱颈法处死3组小鼠取材,观察各组大体标本形态学变化及采用免疫组织化学法观察标本改变;采用Western blot蛋白印迹法检测各组p-JAK2、p-STAT3和Bax蛋白的表达,同时检测各组线粒体氧化应激指标琥珀酸脱氢酶（SDH）及细胞色素C氧化酶（COX）改变。结果：4周后,在软骨组织标本形态学方面,对照组软骨组织呈半透明状,无肿胀、充血,软骨细胞数量多,胞核呈椭圆形,染色质分布均匀;姜黄素＋OA组关节轻微肿胀,无充血,软骨细胞形态较规则,细胞数量略减少;OA组关节面粗糙,表面变薄、有轻度破损现象,细胞排列稍紊乱,视野下可见核消失,染色不均匀。与对照组相比,OA组和姜黄素＋OA组软骨细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低（P〈0.05）、Bax蛋白表达升高（P〈0.05）,SDH和COX蛋白水平表达均降低（P〈0.05）;与OA组比较,姜黄素＋OA组软骨细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,SDH和COX蛋白水平表达均升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：JAK2/STAT3信号通路与骨性关节炎软骨退变的病理过程密切相关,姜黄素可激活JAK2/STAT3信号通路,增加软骨细胞线粒体抗氧化应激能力,明显缓解关节软骨的退变,降低OA进展水平。

人工关节置换术后假体周围感染与术前贫血的研究进展

假体周围感染是人工关节置换术后最严重的并发症。流行病学调查发现,围术期贫血是造成假体周围感染的独立危险因素,其可通过影响细胞机制及自身免疫功能等多个方面发挥重要影响。既往国内外诸多学者对假体周围感染与术后贫血的关系进行研究,但对假体周围感染与术前贫血的相关性探讨较少。术前贫血可使红细胞表面的C3b受体减少,机体免疫功能降低,血源性感染增加,术后康复时间延长,进而诱发假体周围感染。故对于术前合并贫血的患者,除预防性使用抗生素外,术前应补充铁剂、配合促红细胞生成素积极纠正贫血、治疗影响血红蛋白生成的慢性并发症、提高患者自身的免疫状况、对符合输血指征的患者进行相应的输血治疗,从而更好地预防人工关节置换术后假体周围感染的发生,减少二次或多次翻修的概率。

类风湿关节炎行关节置换术围手术期管理的研究进展

类风湿关节炎是最常见的炎性关节病,尽管目前类风湿关节炎缓解药物不断改进,药效却只能延缓关节功能障碍的进展。人工膝或髋关节置换术现已成为晚期类风湿关节炎患者的惟一选择,经手术治疗后患者的关节功能及畸形问题可得到不同程度改善。但类风湿关节炎的病程持续进展直接影响术后的远期效果,如何完善围手术期管理,将关节置换术与药物治疗有效结合逐渐成为临床工作者关注的重点。本文拟通过对行关节置换术类风湿关节炎患者的术前药物使用、术中手术技巧、假体选择、术后治疗、康复锻炼及并发症等国内外管理现状加以概括总结,为提高此类患者远期疗效及生活质量提供有益帮助。

骨质疏松对椎弓根螺钉稳定性影响的实验研究

目的评价不同骨质疏松程度条件下,椎弓螺钉的稳定性,为椎弓根内固定在合并有骨质疏松症的患者中的选用提供力学理论基础。方法采用新鲜尸体脊柱标本,根据骨密度检测结果,按临床诊断标准分成骨质正常、骨量减少、骨质疏松和重度骨质疏松四个水平。然后,每个骨密度水平,植入普通椎弓根螺钉24枚,进行螺钉轴向拔出实验,测定最大拔出力、刚度和能量吸收值三项指标,对所测指标进行骨密度水平间的对比分析。结果骨密度水平从正常下降到重度疏松程度,最大拔出力、刚度均随之下降,组间比较均存在显著性差异(P<0.05)。正常骨密度水平的能量吸收值显著高于骨质疏松、重度疏松(P<0.05),但与骨量减少水平相比并无统计学差异(P>0.05)。另外,骨量减少水平的能量吸收值显著性高于重度骨质疏松水平(P<0.05),但与骨质疏松水平相比较无显著性差异(P>0.05)。结论反映椎体骨质质量的骨密度是决定椎弓根螺钉稳定性的重要因素。

机体炎症因子和氧化应激标志物介导姜黄素抑制骨性关节炎的作用机制

目的：探讨骨性关节炎（OA）关节软骨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、CD47、L-选择素及高级氧化蛋白产物（AOPP）表达的变化以及姜黄素（Cur）的干预作用。方珐：建立C57BIM6小鼠OA模型，20只小鼠随机分为手术对照组、模型对照组、Cur25组和Cur50组（术后分别每日接受25μmol／L和50μmol／L浓度姜黄素腹腔注射）。4周后取材，采用免疫组织化学法观察各组大体标本形态学变化，电子显微镜下观察软骨组织超微结构；培养各组软骨细胞，运用蛋白质印迹法检测各组MMP-2、MCP-1和CD47表达，ELISA和分光光度法检测L-选择素水平及AOPP浓度变化。结果：软骨组织标本形态学变化模型对照组最明显，Cur25组次之；与手术对照组比较，模型对照组、Cur25组、cur50组软骨细胞MMP-2、MCP-1表达均增多（均P〈0．05），CD47表达均下降（均P〈0．05），L．选择素水平及AOPP浓度均增加（均P〈0．05）；与模型对照组比较，Cur25组和Cur50组软骨细胞MMP-2、MCP-1、L-选择素及AOPP的表达下降（均P〈0．05），CIM7的表达上升（均P〈0．05），且与Cur25组比较，Cur50组的上述变化更为显著（均P〈0．05）。结论：MMP-2、MCP—1、CD47、L-选择素及AOPP的异常表达与OA软骨退变的病理过程相关。姜黄素可缓解关节软骨的退变，减轻软骨炎症，提高软骨细胞的代谢活性，且此作用与姜黄素的浓度有关。

SIRT1信号通路介导薯蓣皂苷元在骨性关节炎软骨细胞代谢中的作用机制

目的:在小鼠骨性关节炎(osteoarthritis,OA)模型中观察沉默信息转录调控因子1(sirtuin type 1,SIRT1)信号通路对软骨细胞代谢的影响以及线粒体抗氧化应激能力的改变,探讨SIRT1信号通路及薯蓣皂苷元(diosgenin,Dgn)在OA过程中的作用。方法:选择10只C57BL/6小鼠(13.5~18.0 g)建立OA模型,4周后取材,培养软骨细胞并随机分为4组:OA组、Dgn+OA组、Dgn+Sirtinol(SIRT1通路阻断剂)+OA组及Sirtinol+OA组。运用Western印迹法检测各组细胞SIRT1,乙酰化-调节叉头转录因子1(acetylation-regulated transcription factor 1,Ac-FOXO1)和Bax蛋白的表达,同时检测各组线粒体氧化应激指标琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)、细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平的改变。结果:与OA组比较,Dgn明显增高SIRT1表达水平(P<0.05),降低Ac-FOXO1和Bax蛋白表达水平(P<0.05),SDH和COX蛋白表达水平及SOD含量均升高(P<0.05);而与OA+Dgn组相比,Sirtinol明显降低SIRT1的表达,增高Ac-FOXO1蛋白和Bax蛋白表达水平,降低SDH和COX蛋白表达水平及SOD含量(P<0.05)。结论:SIRT1信号通路和OA中软骨细胞变化密切相关,Dgn通过激活SIRT1通路,有效减轻OA病理过程中软骨细胞的线粒体氧化应激损伤,从而发挥抗OA中软骨细胞保护作用。

微生物合成黄酮类化合物的研究进展

目前,工业生产黄酮类化合物面临价格昂贵等一系列问题,因此用微生物廉价生产黄酮类化合物具有重要意义。近年来系统代谢工程的出现,提供了一个全新的角度来解决传统受限制的生物工业过程。介绍了利用代谢流调控、强化前体物质积累等代谢工程策略,实现微生物法生产黄酮类化合物的国际研究状况,希望对解决目前大规模生产黄酮类物质存在的限制和挑战提供参考。

两种方法建立大鼠骨性关节炎模型中软骨细胞变化比较

为了比较常规手术法及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)干预法构建大鼠骨性关节炎模型的差异,探寻骨性关节炎前期动物研究中简捷有效的模型建立方法。通过选取36只SPF级SD大鼠雄性随机分为健康对照组(control group)、假手术组(sham-operated group)、手术组(operated group)和TNF-α干预组(TNF-αgroup),4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT比色法检测不同处理后对软骨细胞活力的影响;红胞调之原位检测(TUNEL)法检测软骨细胞凋亡率;蛋白印迹法(western blot)检测炎症因子MCP-1、MMP9及ICAM1的表达水平变化。结果表明:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测提示经各组不同方法处理后软骨细胞活力未见明显改变,TUNEL法检测结果提示:各组之间相比较统计分析后,与对照组比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P <0. 01),手术组和TNF-α干预组两者之间无显著差异(P> 0. 05);与假手术组相比,手术组和TNF-α干预组处理后,软骨细胞凋亡率显著升高(P <0. 01);对照组与假手术组、手术组和TNF-α干预组之间分别比较,软骨细胞凋亡率无明显变化(P> 0. 05)。Western blot结果表明:分别与对照组和假手术组相比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞MCP-1、MMP9及ICAM1表达水平增高(P <0. 01),手术组和TNF-α干预组之间各指标改变无统计学差异(P> 0. 05)。可见给予TNF-α干预可促使软骨细胞凋亡率及炎症因子指标增高,其对软骨细胞的影响与手术组相似,可成为一种简捷有效的大鼠骨性关节炎模型建立方法。

骨保留型股骨柄假体在全髋关节置换术中的临床应用

目的 :探讨生物型全髋关节置换术采用Tri-Lock骨保留型股骨柄体在伴有股骨头颈短缩的髋臼内陷中的手术技巧和临床疗效。方法:2013年1月至2015年12月采用全髋关节置换术治疗10例(12髋)的髋臼内陷症患者,男5例(6髋),女5例(6髋);年龄42.5~67.5(51.6±3.0)岁。髋臼全部采用生物型假体陶瓷内衬,股骨头采用全陶瓷头。手术均采用后外侧切口,术后每年随访1次,置换术后行X线片检查评估假体柄位置,Harris评分评估髋关节功能。结果:10例患者术后获随访,时间8~48(33.0±3.5)个月。术中、术后无血管、神经损伤及骨折并发症发生。10例(12髋)术后均立即实现了髋臼及股骨柄的生物性压配。术后3个月X线片上均获广泛性骨长入,均可达到骨性固定,无松动和再次内陷发生。髋关节活动范围由术前(45.8±7.5)°增加至末次随访时的(90.0±6.5)°,其中屈曲增加至(89.0±6.0)°,外展增加至(35.5±7.3)°,内旋增加至(31.8±6.6)°,外旋增加至(32.6±5.2)°。Harris髋关节评分由术前45.7±7.5改善至末次随访91.5±8.5(t=144.832,P<0.05)。结论:结合髋臼处理方法,Tri-Lock骨保留型股骨柄体在治疗伴有股骨头颈短缩的髋臼内陷症多合并严重髋关节周围软组织挛缩的患者中,可得到良好压配和保留更多骨质,术中需精细进行髋臼重建和软组织分层松解,术后中短期随访效果安全、满意。

去势大鼠骨髓体外培养破骨细胞变化观察及骨髓组织液IL-6和TNF-α测定分析

目的观察去势大鼠骨髓源性破骨细胞形成的动态变化和骨髓细胞白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量变化。方法健康Wistar雌性大白鼠60只,分为实验组(去卵巢组)和对照组(假手术组),每组30只。分别于术后2、4、6、8、12周取去卵巢组和对照组各只大鼠骨髓细胞进行细胞培养,作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数。提取骨髓组织上清液。用放射免疫方法,测定IL-6的TNF-α含量。结果术后2、4周去卵巢组破骨细胞形成数多于同期对照组,6周去卵巢组破骨细胞形成达到高峰,显著多于同期对照组P<0.01。8周去卵巢组破骨细胞数较6周有所下降,但仍明显高于对照组。与破骨细胞变化相对应的实验组术后4周骨髓提取液IL-6和TNF-α含量明显高于对照组(分别为19.12±4.08,0.98±0.56),6～8周实验组骨髓组织提取液IL-6和TNF-α含量显著高于对照组(IL-6测定值分别为25.78±4.24,26.87±6.34,TNF-α测定值为1.12±0.31,1.14±0.4)。第12周IL-6和TNF-α水平明显下降,但仍高于对照组。结论大鼠去卵巢后骨髓细胞分化破骨细胞明显增加,呈时间相关动态过程,第6周达高峰。骨髓提取液IL-6和TNF-α含量6～8周达高峰。提示去卵巢后骨髓组织提取液IL-6和TNF-α含量升高,增强骨髓微环境中IL-6和TNF-α介导的生物信号,进而使骨髓源性破骨细胞形成增多是可能导致骨吸引亢进的重要原因。

EphB/EphrinB信号通路对成骨分化能力的影响

目的探讨EphB/EphrinB信号通路对去势小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨分化能力和绝经后骨质疏松动物模型骨量的影响。方法将24只8周龄健康雌性BALB/c小鼠随机分为去势组(OVX组)和假手术组(Sham组),检测小鼠BMSCs中EphB/EphrinB信号通路表达水平。(2)将去势小鼠分为4组,分别进行腹腔注射相应Eph受体激动剂:EfnB1-Fc及EfnB2-Fc,Eph受体抑制剂EphB2-Fc,对照组腹腔注射human IgG-Fc。各组分别于术后10周将小鼠脱颈处死,在Micro-CT分析下比较股骨骨质情况。去势组和假手术组小鼠取股骨与胫骨骨髓,经密度梯度离心法分离培养并鉴定其骨髓间充质干细胞至P3用于实验,各组BMSCs在成骨诱导条件下7 d后,通过Realtime PCR检测成骨相关基因(Runx2、ALP、Osterix)及破骨细胞分化相关基因(OPG、RANKL)的表达水平,成骨分化14、21 d后,采用ALP染色和茜素红染色观察成骨分化能力。结果与假手术组(Sham组)相比较,去势组(OVX组)中EfnA2、EphB4、EfnB2、EfnB1及EphA4表达显著增高(P<0.01);Sham组中EphA2及EfnB2表达显著降低(P<0.01)。10周后Micro-CT结果显示,与去势对照Fc组比较,Sham组、EfnB1-Fc、EfnB2-Fc及EphB2-Fc去势组骨小梁结构均较完整、骨小梁密度较好(P<0.01);与EfnB1-Fc、EfnB2-Fc去势组相比较,Sham组和EphB2-Fc去势组的骨密度及骨体积分数均明显增高(P<0.01)。Realtime PCR检测成骨相关基因提示,与去势对照Fc组比较,EfnB1-Fc、EfnB2-Fc和EphB2-Fc去势组中ALP与Osterix的表达明显升高(P<0.01);EfnB1-Fc和EphB2-Fc可显著提高BMSCs成骨分化中ALP的活性和骨基质矿化能力,以EphB2-Fc效果最为显著(P<0.01)。与去势对照Fc组比较,EfnB1-Fc、EfnB2-Fc和EphB2-Fc去势组中RANKL的表达未见明显差异(P>0.05),但OPG的表达明显升高(P<0.01),其中,EfnB1-Fc去势组与EphB2-Fc去势组中OPG/RANKL的比率升高最为明显(P<0.01)。结论EphB2/EfnB1双向信号通路可逆转去势所导致的骨量减少,上调ALP与Osterix的表达,促进BMSCs的成骨分化能力,并可通过调节OPG/RNAKL比率影响去势骨髓间充质干细胞的功能,从而间接影响破骨细胞系的分化。

高屈曲假体加延长杆在晚期类风湿关节炎伴重度膝外翻畸形和严重骨质疏松患者中的临床疗效研究

目的探讨晚期类风湿关节炎(RA)伴重度膝外翻畸形和严重骨质疏松患者膝关节置换术假体选择及临床效果。方法选取2008—2014年兰州军区总医院全军骨科中心关节外科采用髌旁内侧入路、常规截骨加单纯外侧软组织松解方法治疗晚期RA伴重度膝外翻畸形和严重骨质疏松患者27例(32膝)。18例(20膝)采用不保留后十字韧带型后稳定型常规假体:Nex Gen HF-Flex常规膝(后稳定型组),9例(12膝)采用Nex Gen HF-Flex常规膝+延长杆(后稳定型+延长杆组)。采用术前及末次随访时膝关节屈曲挛缩、关节活动度、股胫角等评价手术效果。结果手术时间60~120 min,平均75 min。随访时间2.0~7.5年,平均4.9年。后稳定型组和后稳定型+延长杆组末次随访时膝关节屈曲挛缩较术前减少、关节活动度较术前提高(P<0.05)。术前及末次随访时,后稳定型组与后稳定型+延长杆组膝关节屈曲挛缩、关节活动度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。所有患者外翻畸形得到纠正,后稳定型组和后稳定型+延长杆组末次随访时股胫角较术前减小(P<0.05)。术前及末次随访时,后稳定型组与后稳定型+延长杆组股胫角比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3例(3膝)有膝关节外侧不稳症状,给予膝关节支具保护;2例(3膝)术后1个月出现下肢静脉血栓,给予放置下腔静脉滤网;1例(1膝)术后发生腓总神经麻痹。其余患者随访期间未发生假体感染、假体周围骨折、异位骨化、假体松动及外翻等术后并发症。结论对晚期RA伴重度膝外翻畸形和严重骨质疏松患者在假体选择方面,后稳定型假体与后稳定型假体+延长杆在纠正外翻屈曲畸形、关节活动度和股胫角疗效等方面,未见差异,所有患者近期疗效满意,但对于此类患者而言,后稳定型假体+延长杆组稳定性较好,受RA病程进展影响较低。

TNF-α在构建大鼠骨性关节炎模型中对内质网应激的影响探讨

目的观察不同剂量肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)在构建大鼠骨性关节炎(osteoarthritis,OA)模型中对内质网应激的影响,初步探讨大鼠骨性关节炎病理过程中内质网应激的作用。方法将20只SPF级SD雄性大鼠随机分为健康对照组、TNF-α1ng/m L干预组、TNF-α5ng/m L干预组和TNF-α10ng/m L干预组,分别给予不同剂量TNF-α处理,4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT法检测不同剂量TNF-α对软骨细胞活力的影响;ELISA法检测内皮细胞粘附分子-1(endothelial cell adhesion molecule-1,s ICAM-1)含量变化,TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)检测炎症因子MMP9、ICAM1的表达以及内质网应激指标IRE1、p-IRE1、GRP78的水平变化。结果 MTT法检测提示加入不同剂量的TNF-α后软骨细胞活力未见明显改变;TUNEL法检测结果提示,与对照组相比,TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P<0.01),并呈浓度依赖性促进细胞凋亡;Western blot结果表明,与对照组相比,软骨细胞的p-IRE1、IRE1、GRP78、MMP9及ICAM1的表达水平呈TNF-α浓度依赖性升高(P<0.01)。结论在TNF-α构建大鼠骨性关节炎模型中,炎症因子与内质网应激指标均发生显著改变,内质网应激可能在大鼠骨性关节炎的发生发展过程中发挥重要影响,且当TNF-α浓度为10 ng/m L时,其对炎性因子及内质网指标的作用效果最为显著。