细胞毒性T淋巴细胞和T白血病细胞利用柔软性逃避穿孔素介导的杀伤

目的细胞毒性淋巴细胞(CTL)释放的穿孔素仅在肿瘤细胞膜表面打孔,而不在CTL表面形成孔洞,这种单向杀伤机制在免疫学角度尚未被阐明。穿孔素打孔既是一个化学过程,也是一个生物力学过程,细胞可利用其柔软性妨碍穿孔素打孔。方法实验室前期研究发现活化的CTL下调FLNA表达,通过柔软性逃避穿孔素介导的杀伤,这种柔软性同样被T白血病细胞用于免疫逃逸。结果和结论本研究在细胞、动物及病人3个水平结合多组学、原子力显微镜等手段,发现ZAP70介导的YAP Y357磷酸化和活化使filamin A下调来诱导柔软性的形成。并且在CTL中,耐药转运蛋白MDR1表达更高,因此CTL比恶性T细胞对YAP抑制剂更具耐药性。YAP的适度抑制使恶性T细胞变硬,但CTL仍然保持一定的柔软性,从而使CTL在杀伤恶性肿瘤细胞时避免自溶。因此,本发现揭示了一种基于机械力的针对T细胞白血病的免疫治疗策略。本研究基于生物机械力学和肿瘤免疫核心问题进行探究,揭示了T白血病细胞免疫逃逸背后的生物力学机制,为开发基于生物机械力学的新型免疫治疗奠定了理论基础。

糖原代谢调控与疾病研究的新进展

糖原是由葡萄糖分子通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成的多糖,是人体内主要的储能形式之一。糖原主要储存在肝(肝糖原)和骨骼肌(肌糖原)中,同时在心肌、肾、脑等组织中也少量存在。机体需要能量时,肝糖原可以分解成葡萄糖,提供给身体各个组织和器官利用,肌糖原则在运动时被骨骼肌消耗供能。除了在维持血糖水平和提供能量方面的重要作用外,糖原代谢还参与调控细胞分化、信号传导和氧化还原等生物学过程。本文主要探讨了糖原代谢在代谢性疾病、肿瘤和免疫细胞应答等过程中的调控机制的最新研究进展,同时总结了糖原代谢的新型调控模式和机制。

泛癌中SMYD3的表达与预后及免疫浸润之间的关系

目的研究SMYD3表达在泛癌中的预后价值,分析SMYD3对于肿瘤组织免疫浸润的影响。方法从TCGA、GTEx、HPA等数据库收集基因表达矩阵以及蛋白质表达等数据。使用Kaplan-Meier算法评价了SMYD3在不同肿瘤中的预后价值。使用ESTIMATE算法和Timer数据库的信息分析SMYD3与免疫浸润的关系。以小鼠黑色素瘤细胞系B16为例,在细胞水平验证SMYD3对抗原提呈基因表达的影响。结果转录组和蛋白组学数据表明SMYD3在肿瘤组织中表达升高,并且SMYD3的高表达和泛癌的不良预后相关(P<0.05);SMYD3抑制了多种免疫细胞的浸润(P<0.05),敲除Smyd3的B16细胞抗原呈递基因表达水平升高(P<0.05)。结论Smyd3是一个重要的肿瘤预后相关基因,其通过下调抗原递呈基因的表达,抑制免疫细胞浸润,诱导肿瘤细胞免疫逃逸。

利用类器官培养构建小鼠肝脏衰老模型

目的利用类器官培养构建体外快速诱导的小鼠肝脏衰老模型。方法通过两步灌注法获取小鼠肝细胞并对其进行类器官培养。通过形态学、qPCR和免疫荧光对类器官进行初步鉴定,通过检测其对LDL的摄取能力判断肝脏类器官的功能。用油酸(OA)处理肝脏类器官,检测其生长情况、衰老相关分泌表型、LDL的摄取能力和肝细胞活性氧(ROS)水平,分析肝脏衰老模型构建是否成功。进一步使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理肝细胞,检测以上表型和功能的变化,利用此模型探究ROS对衰老的影响。结果两步灌注法获取到大量有活性的原代小鼠肝细胞,通过在基质胶中3D培养可获得具有自我复制能力的肝脏类器官,qPCR显示其表达肝脏标志基因,免疫荧光结果显示其高表达白蛋白(ALB),并且肝脏类器官具有对LDL正常的摄取功能。用油酸处理后,肝脏类器官生长减慢,衰老相关分泌表型基因表达上调(P<0.001),对LDL的摄取能力降低(P<0.001),ROS明显上升(P<0.001)。以上表型在使用NAC处理后均得以缓解(P<0.01或P<0.001)。结论油酸处理可在体外成功构建小鼠肝脏的衰老模型,加入NAC后可清除ROS,减缓衰老的发生。

企业纳税筹划风险问题研究

纳税筹划是企业在法律允许范围内最大限度提升经济收益的有效手段,对企业的发展有着不可估量的作用。文章首先介绍了纳税筹划风险的内涵与特点,继而探讨了纳税筹划风险的常见形式,最后就如何防范纳税筹划中的风险提出了针对性的策略,包括提高风险防范意识、明确纳税筹划原则、加强人员培训、建立良好税企关系等。

风险管理视角下高新技术企业内控的构建

随着全球经济化发展的加快,我国高新技术企业所面临的社会环境纷繁复杂、市场竞争日趋激烈,而高新技术企业作为拉动我国经济发展的核心动力,不仅要面对日益复杂的内外部环境,还必须防范各种风险的发生。构建以风险管理为基本导向的内部控制机制,是目前我国中小型高新技术企业必须正视和亟待解决的问题。本文以B公司作为研究对象,对相关的概念进行阐述,并结合第一手资料对B公司在内部控制中存在的问题进行剖析,同时从风险管理的视角,对B公司内部控制的构建与完善提出有价值的策略,为促进我国高新技术企业的发展奠定基础。

人穿孔素在sf9昆虫细胞中的表达和纯化

目的建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法。方法在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素。使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析。采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质;用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性。结果纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性。与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下来的研究以及其他蛋白质的纯化提供一定参考。结论以一种简单的方法在sf9昆虫细胞内表达并纯化出了有活性的人穿孔素。

利用CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的B16细胞株

目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后一个外显子上;用流式细胞测量术、PCR、免疫荧光及活细胞成像来检测CSDE1-EGFP是否插入成功,检验EGFP的荧光强弱与CSDE1的表达高低是否一致;用Transwell小室法、小鼠荷瘤模型实验观察低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株之间的功能差异。结果分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,检测出EGFP表达强弱与CSDE1表达高低一致。观察到CSDE1蛋白表达量不同的B16细胞株在功能上有所差异。结论为研究CSDE1在其他肿瘤细胞内的动态定位以及因表达量不同而产生的功能差异,新型CRISPR/PITCH系统提供了快速有效的直观方法。

CMTM家族在肿瘤中的表达及作用

CMTM家族基因在多种肿瘤中表达沉默或下调，其表达异常与肿瘤的发生发展和转移联系密切，是潜在的抑癌基因。表观遗传学是该家族基因表达异常的重要机制。这一研究发现为肿瘤的临床治疗提供了新的思路。