侵染中国河北大豆的大豆花叶病毒的鉴定和全基因组序列分析

本研究利用小RNA深度测序技术在河北卢龙大豆叶片上检测到6株大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV),命名为SMV-Gm1~SMV-Gm6。根据小RNA深度测序结果和参考基因组序列设计引物克隆了SMV河北分离物的基因组序列。测序结果经拼接后获得了6个SMV基因组全长序列,大小分别为9588 nt(SMV-Gm1、SMV-Gm3和SMV-Gm5)和9584 nt(SMV-Gm2、SMV-Gm4和SMV-Gm6)。开放阅读框位于基因组第132位至第9332位核苷酸,编码一个多聚蛋白(分子量约为350 kD)。BLAST比对和系统发育分析发现,SMV-Gm1、SMV-Gm3和SMV-Gm5与江苏SMV分离物(登录号:MH919386)的基因组核苷酸序列相似性最高,为98.06%~98.07%,且遗传距离较近,并与江苏、浙江和山西SMV分离物聚为一小簇;SMV-Gm2、SMV-Gm4和SMV-Gm6与韩国SMV分离物(登录号:FJ640954)的基因组核苷酸序列相似性最高,为98.48%~98.51%,且遗传距离较近。

侵染北京、宁夏和内蒙古番茄的番茄黄曲叶病毒的鉴定和全基因组分析

为明确从北京、宁夏和内蒙古采集的15份疑似病毒感染的番茄样本是否感染番茄黄曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV),利用TYLCV的特异性引物对采集的样本进行检测,结果从8个样本中扩增到TYLCV片段,并获得了8个样本TYLCV的全长序列。序列分析发现,样本NS-1、NS-5、NS-8、NS-9、NS-13和NS-14的全长核苷酸序列与北京分离物TYLCV-BJTZ的相似性最高,达99.03%~99.42%;NS-2与陕西分离物TYLCV-JY-2的相似性最高,为99.60%;NS-7与江苏分离物TYLCV-YZ02的相似性最高,为99.35%。表明这8个TYLCV全基因组均为TYLCV的不同分离物。系统进化树分析发现,这8个TYLCV分离物与2017年鉴定的北京分离物聚成一个单独的分支,说明与北京分离物的亲缘关系最近。研究结果显示,TYLCV已经扩散到宁夏和内蒙古,在我国分布范围不断扩大。

在中国广东侵染胜红蓟的中国胜红蓟黄脉病毒的鉴定和全基因组分析

2022年9月在广东省罗定市发现了叶片表现为黄色网状症状的胜红蓟病株。为了明确胜红蓟叶片的黄脉症状是否由双生病毒感染引起,本研究使用检测双生病毒的简并引物PA/PB进行PCR扩增,获得约500 bp的片段。根据该序列设计特异性引物扩增并且克隆得到了病毒DNA-A的全基因组序列。通过BLAST比对发现,获得的DNA-A与中国胜红蓟黄脉病毒(ageratum yellow vein China virus,AYVCNV)海南分离物(OQ421190)的DNA-A的相似性最高,相似度为98.11%。系统进化树分析显示,获得的病毒DNA-A与海南分离物(OQ421190)在同一分支,说明具有较近的亲缘关系。以上研究结果表明侵染胜红蓟的病毒是AYVCNV的分离物。这是关于AYVCNV在广东地区侵染胜红蓟的首次报道,可为当地病毒病的防控提供参考。

双生病毒——一类值得重视的植物病毒

双生病毒是世界范围内广泛发生的一类植物单链DNA病毒,已在多种作物上引起严重危害。重组是导致双生病毒变异和病害流行的重要原因。近年来,在单组份双生病毒中发现有新型卫星DNA分子——DNAβ,DNAβ是病毒致病所必需的。本文就双生病毒的危害性、病毒的重组、DNAβ的发现及与致病性的关系、双生病毒与伴随的小分子DNA形成病害复合体、双生病毒DNA-A和小分子DNA的进化关系等问题进行了简要评述。

番茄花叶病毒番茄分离物与烟草花叶病毒蚕豆分离物生物学、血清学比较及PCR特异性检测

对番茄花叶病毒番茄分离物（ＴｏＭＶ－Ｔｏ－Ｓ１）和烟草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ９３５Ａ）进行了生物学和血清学比较。人工接种６科２０种植物，这两个分离物均能侵染其中的３科１４种植物，但在普通烟（白肋烟、黄苗榆）上的症状差异较大，前者在这些植物上引起局部症状，后者为系统症状。在琼脂双扩散试验中，两者与ＴｏＭＶ－Ｔｏ－Ｓ１抗血清和４种ＴＭＶ抗血清均形成沉淀线，但沉淀线之间产生刺角，说明ＴｏＭＶ－Ｔｏ－Ｓ１和ＴＭＶ－Ｂ９３５Ａ虽有血清关系，但亦有差异。胶内交叉吸附试验也证明两者之间有血清学差异。根据已报道的ＴｏＭＶ－Ｌ株系和ＴＭＶＵ１株系ＣＰ基因的３′端非编码区序列设计了ＴｏＭＶ和ＴＭＶ特异引物，采用ＰＣＲ方法，这些引物能够特异性的检测区分ＴｏＭＶ－Ｔｏ－Ｓ１和ＴＭＶ－Ｂ９３５Ａ。

十字花科蔬菜上黄瓜花叶病毒分离物的比较研究

对从杭州市郊青菜、萝卜、花椰菜上分离的6个CMV分离物进行了生物学、血清学及双链RNA比较研究。生物学测定结果表明,不同分离物在所测定的6种十字花科蔬菜上的致病力有差异。6种分离物颗粒形态、衣壳蛋白分子量和血清学方面无差异,且都属血清型Ⅰ。dsRNA分析结果表明,6个分离物的dsRNAl,2,3和4在PAGE中迁移率相似,但在1.5kb～0.4kb之间有多条量相对较少的条带,这些条带在不同分离物之间差异较大。6个分离物均含有卫星RNA。

侵染丝瓜的黄瓜花叶病毒研究

１９９３年６月从温州市郊区丝瓜病株上获得一病毒分离物Ｌ－９３，人工摩擦接种５科２２种植物，Ｌ－９３能侵染５科１８种植物。Ｌ－９３在多种葫芦科植物上具有很强的侵染力。提纯病毒粒体为球形，直径约２８ｎｍ。在琼脂双扩散试验中，Ｌ－９３与ＣＭＶ抗血清具有密切的血清学关系。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其衣壳蛋白亚基分子质量为２９０００ｕ，分析植物组织中ｄｓＲＮＡ，发现有４条ｄｓＲＮＡ条带，长度分别为含３．３，３．０，２．２和０．９×１０３ｂ。根据以上结果，Ｌ－９３被鉴定为黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）。种子传毒试验表明，ＣＭＶ不能通过丝瓜种子传毒。在交互保护试验中，弱毒株系ＣＭＶＰｌ对Ｌ－９３侵染具有很好的保护效果，保护率达８９％，保护接种植株中，Ｌ－９３浓度明显低于未保护植株。

蚕豆萎蔫病毒ELISA检测系统建立及其应用

从制备的蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清中提纯ＩｇＧ，并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测ＢＢＷＶ的方法。ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测时包被ＩｇＧ以２６．９μｇ／ｍｌ效果最好，ＨＲＰ－ＩｇＧ结合物以１８００～１１６００效果最佳。ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测ＢＢＷＶ病叶粗汁液的最大稀释度为１３２０，检测提纯病毒的最低浓度为０．７４４μｇ／ｍｌ。田间病样测定表明，ＢＢＷＶ在蚕豆、豌豆、豇豆、大豆、茄子和辣椒等作物上发生很普遍，在菜豆上也有零星发生，而在莴苣、芹菜、白菜、萝卜、花椰菜上未测到ＢＢＷＶ。ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测结果与生物学检测结果基本相符，符合率达９７．６％。

马铃薯Y病毒组病毒高产量提取方法的建立

本文报道了高产量提取芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）、莴苣花叶病毒（ＬＭＶ）、芋花叶病毒（ＤＭＶ）和大豆花叶病毒（ＳＭＶ）的提取方法。本方法通过使用高盐浓度的磷酸盐缓冲液以及在缓冲液中加入氯化镁和脲，并用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为澄清剂，替代常规使用的氯仿和正丁醇，成功的提取到了大量病毒粒子，上述四种病毒提取的得率分别是ＴｕＭＶ为１７３．３ｍｇ／ｋｇ病叶，ＬＭＶ为９６ｍｇ／ｋｇ病叶，ＳＭＶ为１９９．２ｍｇ／ｋｇ病叶，ＤＭＶ为１７６．６ｍｇ／ｋｇ病叶。

线粒体DNA的研究进展及其法医学应用

线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)是存在于细胞质内的环状DNA。它的存在早在三十多年前就有人提出。如今,关于线粒体的研究领域是生物医学中发展最快的学科之一。它的发展基于一些很基本且有趣的问题的提出,这些问题主要是关于线粒体是如何进化,如何产生能量。另外,在疾病中线粒体基因如何发生突变、细胞凋亡如何受到它的调节、以及衰老如何对线粒体DNA发生影响等问题都有待解答,而且对这些问题的探讨将会对诸如人类学、法医学以及疾病的治疗有很大的用途。

大豆花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用

大豆花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用周雪平，濮祖芹，方中达，储瑞银，陈章良（南京农业大学植物保护学系南京２１００１４）关键词大豆花叶病毒，外壳蛋白基因，分子杂交分布于世界各国大豆种植区的大豆花叶病毒（ＳＭＶ），能引起大豆花叶病，造成大豆减...

烟草花叶病毒蚕豆株系外壳蛋白基因及3'端非编码区的克隆与序列分析

根据烟草花叶病毒（Ｔｏｂａｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＴＭＶ）Ｕ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）序列，人工合成引物，用ＲＴ法合成ｃＤＮＡ后，通过ＰＣＲ技术扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３＇端非编码区。ＤＮＡ序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４８０个碱基，编码１５８个氨基酸，３＇端非编码区全长２０４个碱基，与ＴＭＶ－Ｕ１株系的同源率为１００％。将ＣＰ基因及３＇端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带，Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应。

侵染番茄的番茄花叶病毒的研究

从种传番茄苗中获得一病毒分离物Ｔｏ－Ｓｌ，人工摩擦接种７科２４种植物，Ｔｏ～Ｓｌ能侵染４科１５种植物，在番茄上产生花叶，在白肋烟上为局部枯斑。Ｔｏ－Ｓｌ的钝化温度为８５～９０℃，稀释限点为１０￣（－６）～１０￣（－７）．体外保毒期在一个月以上。病毒粒体杆状，长度主要分布于２８１～３００ｎｍ之间，平均长度２８８ｎｍ。病毒衣壳蛋白亚基只有一条多肽链，分子量为２１ｋＤａ。ｄｓＲＮＡ分析测得其基因组长度为６．４ｋｂ。琼胎糖双扩散和胶内交叉吸附试验证明，Ｔｏ－Ｓｌ与ＴＭＶ有血清关系，但有一定的差异，病毒粒体电泳分析也表明Ｔｏ－Ｓｌ与ＴＭＶ粒体有差异。在交叉保护试验中，ＴＭＶ和Ｔｏ－Ｓｌ之间均无保护作用。根据以上试验结果Ｔｏ－Ｓｌ被鉴定为番茄花叶病毒。这是我国首次系统报道番茄上番茄花叶病毒的侵染。

侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和Ｂ－９３４．人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似。Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０￣（－３）－１０￣（－４），体外保毒期分别为５天和４天。两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，提纯病毒粒子球形，平均直径２５ｎｍ。病毒外壳蛋白均由两种亚基组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ，感病叶片组织中观察到了无定形的泡状内含体，在琼脂双扩散试验中，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均能与蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清（血清型Ⅱ）形成清晰沉淀线。根据以上特性，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均被鉴定为蚕豆萎蔫病毒，且都属血清型Ⅱ．初步调查表明杭州郊区豌豆病毒病均由ＢＢＷＶ引起，蚕豆病毒病主要有ＢＢＷＶ和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）。

蚕豆萎蔫病毒纯化和病毒蛋白质及RNA组份分析

属蚕豆萎蔫病毒（ＥＢＷＶ）血清Ⅱ型的分离物Ｂ－９３４接种昆诺黎，采收的病叶先用含蔗糖的高浓度磷酸钾盐缓冲液，后用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理，成功地提取到了大量病毒粒子，提纯病毒得率为１３４ｍｇ／ｋｇ病叶。提纯病毒在电镜下可观察到大量球状病毒粒子，直径约２５ｎｍ。提纯的ＢＢＷＶ经甘油梯度超离心后可观察到３个组份，分别称Ｔ、Ｂ和Ｍ组份，其中Ｔ为空壳蛋白，Ｂ和Ｍ为核蛋白。各组份经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，证明其外壳蛋白均由两条多肽链组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ。病毒颗粒中ＲＮＡ组份分析及病叶组织中ｄｓＲＮＡ分析均表明，ＢＢＷＶ病毒基因组由两条单链ＲＮＡ分子组成，分子量约为２．２×１０￣６和１．５×１０￣６。电泳分析表明，ＢＢＷＶ病毒粒子电泳后产生类似于豇豆花叶病毒组（Ｃｏｍｏｖｉｒｕｓｅｓ）的两个电泳型。

黄瓜花叶病毒（CMV）土壤非介体传播研究

对黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）土壤非介体传播的试验结果表明，土壤非介体传播是ＣＭＶ传播的新途径，不同作物间的传播效率有差异，一般ＣＭＶ传入根部后多数地上部不表现症状，但根系生长明显受到影响。文章还分析了ＣＭＶ能够以土壤非介体方式传播的原因。

侵染蚕豆的烟草花叶病毒研究

１９９３年４月从杭州蚕豆田病株上分离获得病毒分离物Ｂ－９３５Ａ，汁液摩擦接种５科１９种植物，Ｂ－９３５Ａ能侵染３科１２种植物。被侵染的蚕豆产生黄斑、花叶，后期叶片黄化并有坏死；在菜豆上产生局部枯斑。Ｂ－９３５Ａ的钝化温度为８５－９０℃，稀释限点为１０￣（－５）－１０￣（－７）病毒粒体杆状，平均长度约３００ｎｍ，病毒的衣壳蛋白亚基只有一条多肽链，分子量约为１７．５ｋＤ，包裹的核酸为申链ＲＮＡ，长约６．４ｋｂ．琼脂双扩散试验和免疫电镜试验表明，Ｂ－９２５Ａ与烟草花叶病毒（ＴＭＶ）有十分密切的血清学关系。根据以上试验结果，Ｂ－９３５Ａ被鉴定为烟草花叶病毒的蚕豆株系。这是国内外首次报道从蚕豆上分离到ＴＭＶ，也是我国首次从豆科作物上分离到的一个ＴＭＶ株系。

抗病毒基因工程与转基因植物释放的环境风险评估

全面介绍了抗病毒转基因植物释放的风险性，包括重组（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）、衣壳转移（ｔｒａｎｓｏａｐ－ｓｉｄａｔｉｏｎ）和协生作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）等；并指出，我国应对抗病毒转基因植物释放产生的风险进行系统评估，在缺乏对可能产生的风险的认识之前，应控制进行大规模的田间试验。

豌豆病毒病病原研究

1986年至1990年,从豌豆田中采集了150余份病毒病样本,鉴定出蚕豆萎蔫病毒(BB-WV)、芜菁花叶病毒(TuMV)、马铃薯Y病毒组分离物、黄瓜花叶病毒(CMV)、莴苣花叶病毒(LMV)、大豆花叶病毒(SMV)、豌豆花叶病毒(PMV)、菜豆黄花叶病毒(BYMV)和苜蓿花叶病毒(AMV)等9种病毒。样本中,BBWV所占的比例最高,达59.2％,其次为CMV,占15.5％。BBWV常与CMV复合侵染豌豆,LMV发生也较普遍。田间调查表明,豌豆病毒病发病率因种植地区及品种不同而有差异,平均发病率为12.4％。

双链RNA技术在植物病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤，并列举了ｄｓＲＮＡ在植物病毒研究中的应用，其主要应用有（１）用于检测植物病毒；（２）用于病毒株系分化；（３）用于病毒卫星ＲＮＡ及亚基因组ＲＮＡ研究；（４）用于侵染性测定及病毒基因组功能研究等。