高同型半胱氨酸血症对ApoE^(-/-)鼠心脏内质网应激的影响

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对Apo E-/-鼠心脏内质网应激(ERS)的影响及其可能机制。方法取5周龄雄鼠12只作为正常对照组;另取5周龄雄性Apo E-/-小鼠36只,随机分为3组,Apo E-/-对照组:Apo E-/-小鼠饲以普通饲料配方饮食;高蛋氨酸组:Apo E-/-小鼠饲以高蛋氨酸饮食;干预组:Apo E-/-小鼠饲以高蛋氨酸饮食同时加0.006%叶酸和0.000 4%维生素B12。喂养20周后处死,行主动脉病理切片HE染色观察主动脉是否有斑块形成;取心脏,采用实时荧光定量PCR法检测GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR检测GRP78和CHOP启动子区DNA甲基化水平。结果正常对照组及Apo E-/-对照组斑块不明显,高蛋氨酸组动脉粥样硬化斑块面积明显增大,主动脉内膜可见灶性病变部位隆起突入动脉腔内,干预组动脉粥样硬化斑块面积较高蛋氨酸组有所减轻。与Apo E-/-对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA水平明显升高(P<0.05,P<0.01),干预组GRP78、CHOP mRNA水平较高蛋氨酸组降低(P<0.05)。与Apo E-/-对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP启动子区DNA甲基化水平降低(P<0.01),干预组GRP78、CHOP甲基化水平较高蛋氨酸组有所升高(P<0.05)。结论 HHcy可能通过影响DNA甲基化程度引起ERS相关基因表达改变,进而导致心肌细胞凋亡,补充叶酸与维生素B12可有效缓解HHcy所引起的ERS和凋亡。

ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激

目的:探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1α,ERO1α)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的肝细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)中的作用及机制.方法:培养人肝细胞,用Hcy(100μmol/L)干预,同时设对照组,使用酶联免疫法(ELISA)检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)、X盒结合蛋白-1(X-box binding protein-1,XBP-1)、内质网类似激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic r e t i c u l u m k i n a s e,P E R K)及激活转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的水平;用不同浓度Hcy(0、50、100、200、500μmol/L)和100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12(VB12)干预,运用实时定量PCR和Western blot检测ERO1αm RNA和蛋白水平;构建ERO1α基因重组质粒和RNA干扰片段并感染肝细胞,检测ERO1αm RNA和蛋白表达变化;采用ELISA法检测其对ERS相关蛋白的调控作用.结果:与对照组比较,Hcy组GRP78、ATF6、P E R K、X B P-1水平升高(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01);不同浓度Hcy干预后,肝细胞内ERO1αm RNA及蛋白水平呈下降趋势,且随着Hcy浓度的增加而减少(P<0.01),呈剂量依赖关系;将ERO1α重组质粒转染肝细胞后,ERO1αm RNA及蛋白表达明显增加(P<0.01);将三个不同的ERO1αsi RNA片段转染肝细胞后,ERO1αm RNA及蛋白表达降低(P<0.01),其中si RNA2作用最明显(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+p ERO1α组GRP78、XBP-1、PERK及ATF6均明显降低(P<0.01),而Hcy+si RNA2组均明显升高(P<0.01).结论:Hcy可能通过下调ERO1α引起肝细胞GRP78-XBP-1/PERK/ATF6表达增加促进ERS发生.

学术期刊服务学科发展模式探讨——以《中华超声影像学杂志》为例

学术期刊的质量水平与影响力是衡量一个国家科技事业发展的标志,我国虽是期刊大国,但期刊整体实力和国际影响力还有很大发展前景与空间。关于学术期刊如何服务自身学科发展,笔者根据自身所在期刊的工作实践经验提出以下六个方面措施:(1)依托权威学会,发布行业规范;(2)立足学科热点,引领研究前沿;(3)依托专家团队,严控杂志质量;(4)提高服务意识,读者作者至上;(5)深入挖掘潜能,扶持青年才俊;(6)密切各方合作,实现多方共赢。以期与学术期刊同仁交流探讨,共同促进学术期刊与相应专业学科的共同发展。

天山雪莲菌酸奶中菌株的分离及生理生化鉴定

[目的]分离并鉴定天山雪莲菌酸奶中的菌株。[方法]以天山雪莲菌酸奶为材料,采用酸化MRS培养基、CaCO3分离培养基和YGC培养基,对乳酸菌、醋酸菌和酵母菌进行菌株分离,并依据《伯杰氏细菌鉴定手册》和《酵母菌特性及鉴定手册》,对分离菌株进行生理生化学鉴定。[结果]经过分离和鉴定,获得了干酪乳杆菌、过氧化醋杆菌、醋化醋杆菌、克鲁维酵母属酵母菌株各1株。[结论]天山雪莲菌酸奶中的微生物可产生一些重要的生物学活性物质,这些微生物可作为功能性乳制品开发的优良菌种。

等离子诱变选育木糖醇高产菌及发酵条件优化

以热带假丝酵母Y-14(Tropical candida)为出发菌株,采用等离子体对其进行诱变,得到最佳诱变条件:在功率120 W下处理150s,致死率达到96%。诱变后经过筛选得到1株高产木糖醇的菌株Y-117,与出发菌株相比,其木糖醇产量提高了30.4%。在单因素试验的基础上,通过响应面分析试验对菌株Y-117的发酵条件进行优化,得到最佳条件:初始木糖添加量105g/L、温度30.5℃、摇床转速190r/min。在此条件下,Y-117的木糖醇产量为76.45g/L,比出发菌株高42%。

更正"ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激"[世界华人消化杂志2014;22(34):5228-5234]

1更正《世界华人消化杂志》2014年12月第22卷第34期第5228-5234页《ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激》一文做出如下更正:第5231页图3中的B图应为图1.

THP-1单核细胞向泡沫细胞分化过程中FABP4表达量的变化

目的观察并检测脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达改变及其DNA启动子区甲基化变化,探讨FABP4在单核源性泡沫细胞形成中的作用。方法体外培养THP-1单核细胞,分别经佛波酯(PMA)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测三种细胞中FABP4的mRNA和蛋白表达;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)法检测FABP4 DNA甲基化水平。结果 THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,与单核细胞相比FABP4 mRNA表达量分别增加了3.87倍和2.08倍(P<0.01);蛋白表达量分别增加了1.21倍和0.69倍(P<0.01);各组之间FABP4甲基化水平无明显差异(P>0.05)。结论FABP4可能参与了THP-1单核细胞向巨噬细胞和泡沫细胞的分化过程,其机制可能与FABP4 DNA甲基化无关。

生物转化法生产木糖醇的研究进展

对木糖醇的性质、应用、转化菌种及代谢途径进行了总结。分析了影响生物转化法生产木糖醇的主要因素,并对木糖醇生产前景进行了展望。

NO水平下降通过氧化应激引起人胎盘滋养细胞凋亡

目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L-NAME对细胞存活率的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞中NO的含量;利用透射电镜、流式细胞术和Annexin-V FITC染色检测L-NAME对HTR-8细胞凋亡的影响;Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与对照组比较,100、500、1 000μmol·L-1L-NAME组细胞存活率及NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01);Annexin-V FITC染色和流式分析均显示L-NAME能诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性;NO水平与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.5210);透射电镜结果显示:与对照组比较,实验组细胞核形态不规则,核膜固缩呈不规则状,染色质凝集或边集,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或溶解,甚至消失,形成空泡,尤其在100μmol·L-1L-NAME组可见凋亡小体;同时,HTR-8细胞内T-AOC、SOD水平明显降低(P<0.05),MDA的含量明显升高(P<0.05);细胞凋亡数与T-AOC(r=-0.3212)、SOD(r=-0.2779)水平均呈负相关,与MDA(r=0.2807)含量呈正相关。结论氧化应激在NO水平降低引起的人胎盘滋养细胞凋亡中起重要作用。

ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究

目的探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy和100μmol·L-1Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0μmol·L-1Hcy)。油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量。结果成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加。结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用。

高同型半胱氨酸血症经内质网途径影响ApoE-/-鼠肝细胞凋亡

目的观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠肝细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法 36只ApoE-/-小鼠随机分为3组,每组12只:①ApoE-/-对照组(ApoE-/-group):普通饮食饲养;②蛋氨酸饮食组(methionine diet group):普通饮食+1.7%蛋氨酸饲养;③干预组(treatment group):普通饮食+1.7%蛋氨酸+0.006%叶酸及0.0004%VitB12饲养。另取12只正常C57 BL/6J小鼠给予普通饮食,作为正常对照组(normal control group)。饲养20周后,ELISA测定血清同型半胱氨酸(Hcy)浓度和肝组织Caspase-12含量;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;DAPI染色法观察肝组织细胞核形态;电镜观察肝脏组织细胞超微结构。结果与正常对照组和ApoE-/-对照组相比,蛋氨酸饮食组Hcy浓度分别增高2.4倍(P<0.01)和2.5倍(P<0.01);ALT活性分别增高2.0倍(P<0.05)和1.2倍(P<0.05);各组AST活性无明显差异;肝组织切片DAPI染色及电镜结果显示,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞出现凋亡的形态学改变,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞线粒体肿胀、浓缩,内质网大量增生,可见细胞凋亡前体及凋亡小体;Caspase-12活性检测显示蛋氨酸饮食组较正常对照组增高(P<0.05)。与蛋氨酸饮食组比较,干预组小鼠血清Hcy浓度降低,Caspase-12活性下降,肝细胞病理变化减轻,血清ALT活性明显降低。结论 HHcy可能通过影响ApoE-/-鼠内质网功能改变,引起肝细胞凋亡。

ERO1α及其 DNA 甲基化在同型半胱氨酸抑制肝细胞增殖中的作用

目的探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-α,ERO1α)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)抑制肝细胞增殖中的作用。方法以0μmol·L-1Hcy为正常对照组(NC group),以100μmol·L-1Hcy为干预组(Hcy group),干预肝细胞48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测肝细胞增殖活力的变化;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot分别检测ERO1αmRNA和蛋白表达水平;构建ERO1α真核表达质粒,转染肝细胞后,荧光显微镜下观察转染效率并以qRTPCR及Western blot验证ERO1α是否过表达,后用MTT法检测肝细胞增殖活力的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt MS-PCR)检测ERO1αDNA甲基化水平。结果与正常对照组相比,Hcy干预组肝细胞内ERO1αmRNA及蛋白表达水平降低,且细胞增殖活力减弱(P<0.01)。测序结果证明ERO1α重组质粒构建成功,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白大量表达,qRT-PCR及Western blot验证结果显示ERO1α过表达(P<0.01),而MTT法结果表明ERO1α过表达可缓解Hcy导致的肝细胞增殖抑制(P<0.01)。Hcy刺激后ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Hcy通过下调ERO1α表达抑制肝细胞增殖,而ERO1α启动子区DNA甲基化是其重要的调控机制。

MST1在同型半胱氨酸促肝细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 h.Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P<0.01).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P<0.01),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组肝组织MST1 m RNA及蛋白表达水平增高(P<0.05或P<0.01),A p o E-/-干预组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平较A p o E-/-高蛋氨酸组有所降低(P<0.05).细胞水平:(1)与正常对照组相比,HHcy组肝细胞凋亡水平增高(P<0.01),干预组较HHcy组有所减轻(P<0.05);(2)与正常对照组相比,HHcy组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平增高(P<0.01),干预组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平较HHcy组有所降低(P<0.05).结论:在HHcy促肝细胞凋亡过程中MST1表达上调,且叶酸和维生素B12可以抑制其表达上调.

微生物发酵法生产γ-氨基丁酸的研究进展

生产γ-氨基丁酸(GABA)的微生物主要包括酵母菌(Saccharomyces)、乳酸菌(Lactobacillus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、曲霉菌(Aspergillus)等,且随着食品安全级GABA工业化生产的实现,其含量测定方法的研究越来越受到重视。对微生物发酵法生产GABA过程中涉及的发酵菌种及GABA含量测定方法进行了综述,以期对微生物发酵法生产GABA的研究提供有益的参考。

全酶法酿制青稞清酒的工艺研究

探讨了以青稞为原料,全酶法酿造青稞清酒的生产工艺,并研究了影响清酒质量的3个主要因素:耐高温α-淀粉酶、糖化酶、酸性蛋白酶的添加量。根据试验结果的响应面分析得到最佳条件:耐高温α-粉酶的添加量21 U/g,糖化酶的添加量210 U/g,酸性蛋白酶的添加量21 U/g。

高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达

目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P<0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P<0.01,P<0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P<0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P<0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P<0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P<0.01;r=-0.5501,P<0.01;r=-0.7772,P<0.01;r=-0.6785,P<0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。

汉魏六朝仙歌创作的文学史意义

汉魏六朝仙歌是中古道教文学的重要文体形式,构成中古道教文学史的诗史分支;汉魏六朝仙歌以其独具的宗教旨趣、审美旨趣、艺术旨趣影响中古文人的生命意识、美学意识和文学意识,推动了传统文学史与道教文学史的平行发展。

“五年一贯制”师范专科生心理健康状况调查分析及对策

为了分析“五年一贯制”师范专科生心理健康状况．为开展心理健康教育提供科学依据，本文采用症状自评量表（SCL-90）按整群抽样，抽取东华理工大学行知分院“五年一贯制”师范专科612名学生进行心理健康状况测评。并进行比较分析。结果被试中有明显心理健康问题的总数为166人次，检出率为27．1％，各个因子分均高于全国成人常模．也高于大学生常模。因而加强“五年一贯制”师范专科生心理健康教育已是一项非常重要而又迫在眉睫的工作。

miR-125b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs),并分为空白对照组(0μmol·L-1Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-125b的表达变化;利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性;生物信息学分析miR-125b启动子区Cp G岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR(nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化;并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol·L-1Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性(P<0.01);miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0.01);以miR-125b基因上游3 700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的CpG岛,且在Hcy干预下miR-125b的甲基化水平增强(P<0.01);而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。

浅析如何构建和谐班集体

构建和谐班集体是构建和谐校园和和谐社会的重要载体，本文从提高班主任的基本素质和管理水平、增强学生的集体荣誉感、创建和谐的师生关系、建立健全的班级管理制度等方面就如何构建和谐班集体提出几点策略。