肝外胆管癌中染色体9p21区段抑癌基因簇表达异常的研究

目的 研究位于 9号染色体短臂 2 1段的抑癌基因簇所包含的 3个抑癌基因 p14 /ARF、p15 /INK4B和p16 /INK4A在肝外胆管癌组织中的异常表达 ,探讨这 3个抑癌基因的表达异常在肝外胆管癌的发生发展过程中的作用。方法 应用免疫组织化学方法研究肝外胆管癌肿瘤组织、癌旁组织以及胆管炎组织的石蜡切片中p14、p15和 p16蛋白的表达。 结果 肝外胆管癌组织、癌旁组织以及胆管炎组织中 p14 /ARF、p16 /INK4A两个基因表达缺失率两两比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而 p15 /INK4B基因在各组中的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 3个基因的表达异常与肿瘤的组织学类型无关 ,在伴有淋巴结转移 /局部浸润的病例中缺失率明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 p14 /ARF、p16 /INK4A基因表达异常早期参与了肝外胆管癌发生。

5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性。方法 应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2’-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响。结果 5-氮-2’-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmol/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡。

肠腔分流术治疗小儿先天性门静脉海绵样变1例报道

1病例资料 1.1一般资料 患儿,男,4岁。因＂发现血细胞减少1周,发热4天,腹泻1天＂入我院。既往有反复感冒、发热病史。体检：发育正常,心肺无特殊,肝肋下未扪及,脾肋下3 cm,质韧,边界清晰,无压痛。

原发性肝癌术后超声引导下经皮经肝门静脉穿刺化疗安全性分析

目的研究原发性肝癌术后超声引导下经皮经肝门静脉穿刺化疗安全性。方法总结2004年1～10月实施的原发性肝癌术后行超声引导下经皮经肝门静脉穿刺化疗病例，分析其术后常见并发症及其预防及处理措施。结果共有524例原发性肝癌病人在肝切除手术后接受了超声引导下经皮经肝门静脉穿刺化疗，累及实施1865例次。。共发生穿刺操作相关性并发症149例次，并发症发生率为79．89‰（149／1865），其中包括术后穿刺点疼痛118例次（118／1865，63．27‰），肝包膜下出血3例次（3／1865，1．61‰），腹腔出血2例次（2／1865，1．07‰），胆汁漏6例次（6／1865，2．54‰），门静脉血栓形成8例次（8／1865，4．29‰），导管相关性感染4例次（4／1865，2．14‰），气胸3例次（3／1865，1．61‰），导管脱落5例次（5／1865，2．68‰）。化疗相关并发症587例次（587／1865，31．47％），其中包括胃肠道不良反应385例次（385／1865，20．64％），白细胞减少121例次（385／1865，20．64％），转氨酶升高62例次（62／1865，3．32％），皮疹11例次（11／1865，5．90％），其他8例次（8／1865，4．29％）。所有并发症经保守治疗后均痊愈，未有致死性并发症。结论肝癌术后超声引导下经皮经肝门静脉穿刺化疗操作简单、安全，术后并发症发生率在可接受范围。

联合血管切除的胰头癌手术安全性分析及18例手术报道

目的探讨联合血管切除在胰头癌根治术中的作用及其安全性。方法回顾性分析2006年1月-2010年4月我科施行18例联合血管切除的胰十二指肠切除术病例的临床资料。结果门静脉(PV)/肠系膜上静脉(SMV)楔形切除5例,门静脉(PV)/肠系膜上静脉(SMV)部分切除、端端吻合9例,门静脉(SMV)/肠系膜上静脉(PV)部分切除自体血管移植2例,SMV/PV部分切除+肠系膜上动脉(SMA)部分切除2例。手术时间5～9小时;术中出血量50～2000ml;门静脉阻断时间20-45分钟。肿瘤切除类型:R0切除10例、R1切除6例、R2切除2例;术后病理证实有6例血管未受侵犯、6例仅侵犯血管外膜、3例侵犯血管中膜、3例侵犯血管内膜;术后并发症发生率22.2%(4/18),主要并发症有胃潴留(2/18)、胆汁瘘(1/18)、胰瘘(1/18)等,无围手术期死亡。结论与传统的胰十二指肠联合切除术相比,联合血管切除并不会增加术后并发症发生率及死亡率,相反会有助于提高局部较晚期肿瘤的切除率特别是R0切除率,改善病人的生存质量。

载5-氟尿嘧啶两亲多糖纳米粒的制备及其对肝癌细胞HepG2的杀伤作用

背景与目的:生物可降解载药纳米微粒作为新型药物靶向传输和缓释/控释载体,可延长药物的生物半衰期,减轻药物的毒副作用,而且具有良好的生物相容性。本实验制备可生物降解的载5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)葡聚糖接枝聚乳酸共聚物(5-FU/DEX-g-PLA),探讨其对人肝癌细胞HepG2的体内外杀伤作用。方法:利用分子自组装技术制备5-FU/DEX-g-PLA载药纳米微粒,透射电镜观察纳米粒形态,分光光度法计算载药率,MTT法观察对HepG2细胞的体外杀伤作用,动物实验观察其体内抑瘤效应。结果:5-FU/DEX-g-PLA纳米微粒呈球形,粒径约50nm,药物包封率约9.3%。体内药物代谢动力学数据显示,5-FU纳米制剂在血液中维持时间长于5-FU裸药;MTT结果显示,5-FU纳米组细胞生长抑制率(58.8%)与5-FU裸药组(58.0%)差异无显著性(P>0.05);体内抑瘤实验显示,5-FU纳米组肿瘤抑制率(73.1%)显著高于5-FU裸药组(57.5%)。结论:5-FU/DEX-g-PLA纳米微粒可有效抑制肝癌细胞的生长。

两亲多糖纳米胶束作为药物缓释载体的制备及释药研究

【目的】合成葡聚糖接枝聚乳酸(DEX-g-PLA)两亲多糖共聚物,检测其纳米胶束的相关参数,初步探讨其纳米胶束在药物缓释方面的应用。【方法】采用偶联法合成DEX-g-PLA。用透射电子显微镜观察所形成胶束的形态;用动态光散射仪观察纳米胶束有效粒径的变化。体外药物释放实验考察其对不同水溶性药物的缓释作用。MTT法考察其生物相容性。【结果】DEX-g-PLA纳米胶束,呈球形,粒径在50～190nm之间,其有效粒径随聚乳酸含量的增加而增大。载药纳米胶束对疏水性维生素B2的缓释效果优于亲水性的5-氟尿嘧啶。MTT结果显示该纳米胶束具有良好的生物相容性。【结论】DEX-g-PLA纳米胶束具有良好的生物相容性,对疏水性药物的缓释作用优于亲水性药物,有望成为新型药物缓释载体。

PTEN和mTOR信号转导通路在胆管癌发展中作用的研究

目的研究PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号转导通路中mTOR和PTEN蛋白在胆管癌中的表达及其在胆管癌发生、发展中的作用。方法用免疫组织化学方法和RT-PCR法,检测胆管癌中mTOR和PTEN的表达。结果与正常组织相比,免疫组化法和RT-PCR两种方法结果均显示,胆管癌中的mTOR表达明显增加,而PTEN的表达明显下降;两者呈负相关(r=-0.8 6 2,P<0.0 1)。结论PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号转导通路中重要的调节位点和节点PTEN在胆管癌中的表达明显降低,而mTOR的表达明显增高。提示该信号转导通路在介导胆管癌的发生、发展的过程中起重要作用。

Celecoxib对胆囊癌细胞GBC-SD增殖的抑制作用

目的 研究Celecoxib对人胆囊癌细胞GBC SD生长和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用免疫细胞化学SABC法检测GBC SD环氧合酶 2 (Cox 2 )蛋白表达 ,采用四唑氮蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测前列腺素E2 (PGE2 )含量。结果 Celecoxib可下调GBC SD细胞Cox 2蛋白表达。Celecoxib抑制GBC SD细胞增殖作用呈时间依赖性 ,作用 2天后就有轻度抑制 ,第 3、第 4和第 5天抑制作用已相当明显 (P <0 .0 5 ,与对照组相比 ) ,并且这种增殖抑制作用能被 2 0 0 pg/mlPGE2 拮抗。Celecoxib诱导GBC SD细胞G1 S期阻滞 ,4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib组G0 G1期细胞含量比对照组 ( 0 μmol/L)明显增高 ,而S期和G2 /M期细胞含量比对照组明显降低 (P <0 .0 5 )。 4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和 2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib处理 4 8h后GBC SD细胞凋亡率明显上升。 结论 Celecoxib通过Cox 2和PGE2 途径抑制GBC SD细胞生长和诱导凋亡。

重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能

【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导入到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞,转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNIS mRNA水平,转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致。实验组转染后48h,在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNIS mRNA高水平表达,对照组基本无hNIS mRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰,实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后,能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能,为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础。

反义调控DNA甲基转移酶3b基因对人胆管癌细胞QBC939生长的影响

目的观察转染反义DNMT3 b基因真核表达质粒对人胆管癌细胞QBC 9 3 9生长的影响,初步探讨DNMT3 b基因在胆管癌发生中的作用。方法构建反义DNMT3 b基因真核表达质粒,用脂质体介导法将其转入人胆管癌细胞株QBC 9 3 9;W estern blot检测转染前后DNMT3 b蛋白表达的变化;MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力;流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果转染反义基因能使DNMT3 b蛋白表达水平降低;转染反义DNMT3 b基因不能抑制QBC939的生长曲线,对其软琼脂克隆形成率亦无影响(P=0.7 1 7);转染反义DNMT3 b基因不能改变QBC 9 3 9的细胞周期和促进细胞凋亡(P=0.0 8 9)。结论转染反义DNMT3 b基因真核表达质粒可下调DNMT3 b在QBC 9 3 9细胞中的表达水平,但对QBC 9 3 9的生长和增殖无影响,也不能改变QBC 9 3 9的细胞周期和促进细胞凋亡的发生。

原发性肝癌多学科治疗模式

我国是原发性肝癌的高发区，其发病数占全球总数的40％以上。在过去的五十余年中，我国肝癌工作者在肝癌的基础和临床研究方面都取得了卓越的成绩，尤其是在肝癌的早期诊断和外科治疗等方面取得了重大的进步，肝癌手术切除后5年生存率在不同的报道可以达到40％～70％。但十余年来，

奥美拉唑预防腹部外科重症并发应激性溃疡42例

目的 :探讨奥美拉唑在预防腹部外科重症并发应激性溃疡中的作用。方法 :腹部外科重症患者 86例 ,随机分为治疗组 42例 ,给予奥美拉唑 40mg ,iv。对照组 44例 ,给予西咪替丁 0 .8g加入 10 %葡萄糖注射液或 0 .9%氯化钠注射液 2 5 0～ 5 0 0mL ,静脉滴注。两组均每天 1次 ,连用 7～ 10d ;比较两组临床效果。结果 :治疗组与对照组发生应激性溃疡分别为 1例 (2 .4% )和 8例 (18.2 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :奥美拉唑能有效预防腹部外科重症并发应激性溃疡。

外科教学查房中多元化教学模式的探讨

教学查房过程是让学生将理论知识转化到实际应用的有效渠道,恰当整合与运用多元化模式教学,提高教学查房效率,已成为重要的研究课题。我们采用包括传统教学法、PBL教学法、互动教学法、多媒体教学等多元化的教学模式,能更好地提高教学查房质量。

去甲基化修饰诱导人胆管癌细胞中RASSF1A基因表达

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胆管癌细胞株QBC-939中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响。方法用5μmol/L的5-Aza-CdR对QBC-939细胞进行化学干预24 h,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变,RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化,Western blot检测RASSF1A蛋白的表达。结果经5-Aza-CdR化学干预后,RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(280 bp)和蛋白质条带(40 kD),而对照组中没有相应条带出现。结论DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人胆管癌细胞系QBC-939中的表达。

胰腺癌手术相关热点问题

胰腺癌近年来在世界范围内，发生率有明显增高的趋势。其起病隐匿、病情进展快、恶性程度高。缺乏有效的早期诊断手段，病人就诊时往往已经是中晚期。各种治疗效果不理想，病人预后差。手术仍然是胰腺癌唯一有希望获得根治性治疗的一种方法：同时化疗、放疗、物理治疗、生物治疗和中医治疗也是胰腺癌治疗中的重要的辅助治疗方法。

胰十二指肠切除术的改进及疗效观察

目的探讨胰十二指肠切除术技术改进的可行性、安全性及疗效。方法2004年1月至2007年6月,我科实施胰十二指肠切除术73例,并在手术中采用改良的端端套入式胰肠吻合和改良的胃肠吻合技术。观察术后各种并发症的发生率,对该改进方式的可操作性、安全性进行评估。结果73例病人均未发生围手术期死亡。手术并发症共18例次,发生率与报道的传统方法相近。结论在胰十二指肠切除术手术过程中,与传统的手术方法相比,胰肠单层吻合和胃肠双层吻合技术结合生物胶的应用可以有效地缩短手术时间,减少胰漏、预防肠漏等严重并发症的发生。该技术简单易行,安全可靠,具有一定的临床推广价值。

术后脓毒症患者早期肠内营养的应用

目的探讨早期肠内营养与延迟肠内营养对术后脓毒症患者预后的影响。方法回顾性分析7年内我院ICU收治腹部手术后脓毒症患者的临床资料。其中20例实施早期肠内营养(EEN),32例行肠外营养(PN)+延迟肠内营养(DEN)。分析两组患者机械通气率、持续性肾替代治疗(CRRT)治疗时间、住ICU时间及住院死亡率的差异。结果与DEN组比较,EEN组机械通气率低、CRRT治疗时间及住ICU时间缩短;住院死亡率无显著差异。结论肠内营养是脓毒症患者重要的营养支持方式,早期肠内营养安全可行,可部分改善临床预后。

肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的:研究肝外胆管癌染色体3p21.3区段的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH),探讨染色体3p21.3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系,定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因。方法:用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568,D3S1621,D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率,分析其与临床病理因素之间的关系。结果:24例肝外胆管癌组织中,四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7.23%和15.63%。其中D3S1621位点的LOH最高(45.83%,11/24),并与TNM分期、是否伴有局部/淋巴结转移相关(p<0.05)。结论:染色体3p21.3区段D3S1621位点高频率杂合性缺失,提示3p21.3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因,并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。

胰管空肠黏膜吻合对胰十二指肠切除术后胰瘘发生率的影响

目的探讨胰管空肠黏膜对黏膜吻合术对胰十二指肠切除术后胰肠吻合口瘘发生率的影响。方法回顾性分析我院120例胰十二指肠切除术患者的临床资料,胰肠吻合分别采用套入式胰肠吻合和胰管空肠黏膜对黏膜吻合两种术式,其中套入式胰肠吻合组66例,胰管空肠黏膜对黏膜吻合54例,分别观察两组术后胰瘘发生的情况及临床效果。结果两组患者在性别、术前黄疸、术前低蛋白血症以及病种良恶性、淋巴结有无转移方面无统计学差异;在年龄、术前血红蛋白(Hb)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)水平以及手术时间、术后住院时间的差异均无统计学意义。套入式吻合组术后出现并发症9例(13.6%),其中胰瘘4例(6.1%),围手术期死亡2例;胰管空肠黏膜对黏膜吻合组术后出现并发症8例(14.8%),其中胰瘘2例(3.7%),围手术期死亡1例,两组患者胰瘘发生率无统计学差异,围手术期死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于套入式胰肠吻合,胰管空肠黏膜对黏膜吻合术并不能降低胰十二指肠切除术后胰瘘的发生率。