黄芪单体毛蕊异黄酮对血管内皮细胞前列环素和血栓素A_2的影响

目的观察黄芪单体毛蕊异黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)合成前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)的影响。方法以HUVECs为研究对象,用L-DMEM培养基在5%CO2、37℃条件下对HUVECs进行传代培养,至足够数量后对其进行分组处理:(1)空白对照组(不加入任何干预因素);(2)AngⅡ组(加入AngⅡ至终浓度为1×10-6 mol/L);(3)AngⅡ+毛蕊异黄酮不同剂量组(10、1、0.1mg/L),分别培养0、6、12、18、24 h后收集细胞上清进行PGI2、TXA2的检测,检测方法采用ELISA。结果 (1)与空白对照组比较,AngⅡ可以诱导HUVECs合成PGI2和TXA2,并且都具有时间依赖性(r=0.891,P=0.043;r=0.95,P=0.013);(2)与AngⅡ组比较,毛蕊异黄酮0.1 mg/L可以抑制AngⅡ诱导PGI2和TXA2的合成(P<0.05);1 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2合成,抑制TXA2合成(P<0.05);10 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2和TXA2合成(P<0.05)。结论黄芪单体毛蕊异黄酮可以影响AngⅡ所诱导的HUVECs PGI2和TXA2的合成。

羧基肽酶E(CPE)在人乳腺腺癌中的表达和功能(英文)

目的观察乳腺腺癌中羧基肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)介导的神经内分泌肽加工和表达。方法使用RT-PCR、免疫组化、ELISA和Western blot等方法,比较CPE和生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)基因和蛋白质水平在42例乳腺癌和21例癌旁正常组织中的表达。结果乳腺癌组织中的CPE基因表达水平为1 024±237,而癌旁正常组织中CPE基因表达水平为805±83(P<0.01)。与乳腺癌旁正常组织比较,癌组织中CPE蛋白质显示了较高的表达(P<0.01)。乳腺癌组织中的GHRH基因表达水平为1 522±457,而癌旁正常组织中为1 067±437,差异有统计学意义(P<0.01)。与乳腺癌旁正常组织比较,癌组织中GHRH蛋白表达被上调(P<0.01)。结论癌组织中CPE和GHRH高表达提示癌细胞中存在较强的由CPE酶介导的神经内分肽转录后加工能力。

探究PHA-L共诱导的CIK细胞的生物学特性及其联合苦参碱体外抗胃癌效应

目的探讨植物血凝素-L(PHA-L)共诱导制备细胞因子活化的杀伤细胞(CIK)的方法,同时探究新型PHA-CIK细胞联合苦参碱体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性效应。方法通过PHA-L共诱导制备新型CIK细胞即PHA-CIK细胞,并比较分析新型CIK细胞与普通CIK细胞的生物学特性;同时采用CCK-8法分别检测普通CIK细胞组、PHA-CIK细胞组、苦参碱组以及PHA-CIK细胞联合苦参碱组(联合组)体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性。结果制备新型CIK的方法更能促进细胞增殖(P<0.05),且细胞活率保持在90%以上。与普通方法相比,新方法在CD3^+CD8^+比例方面存在显著差异(P<0.05),且杀伤活性增强(P<0.05)。联合组对胃癌MGC-803细胞的杀伤率明显高于PHA-CIK组和苦参碱组,分别是1.6倍和2.3倍,联合组与PHA-CIK组及苦参碱组相比差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论新型PHA-CIK联合苦参碱可显著提高对胃癌细胞的杀伤活性,为中药联合过继性细胞免疫治疗综合治疗肿瘤提供一种新方法。

黄芪毛蕊异黄酮对转化生长因子β1诱导内皮细胞转分化的影响

目的:探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人脐静脉内皮细胞转分化的影响,以阐明黄芪毛蕊异黄酮对肾脏纤维化的保护作用。方法:人脐静脉内皮细胞系ECV-304为研究对象,体外培养ECV-304细胞株,分为正常对照组,TGF-β1组(10μg/L),TGF-β1+毛蕊异黄酮低、中、高剂量组(0.1、1、10mg/L)。各组细胞培养72h后,采用荧光倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,Western Blot检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果:与正常对照组相比,TGF-β1组细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态,TGF-β1明显促进α-SMA蛋白的表达(P<0.01);毛蕊异黄酮与TGF-β1共培养后可明显抑制TGF-β1诱导的细胞形态学改变及α-SMA的表达(P<0.05),高剂量组比低、中剂量组有更强的抑制效应,低剂量组抑制效应最弱。结论:黄芪单体毛蕊异黄酮可以抑制TGF-β1诱导的内皮细胞(ECV-304)向肌成纤维细胞转化,具有保护内皮细胞的作用,从而为防治慢性肾脏病提供了依据。

新的生长激素释放激素类似肽Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys的重组和比较活性(英文)

目的:为了寻找高活性和长半衰期生的GHRH类似肽。方法:通过使用独特的酸敏感水解位点Asp-Pro的原核表达系统,构建了新的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys类似肽。通过重组细菌裂解、包含体洗涤、乙醇分级沉淀、酸水解、SP-SephadexC-25和SephadexG-10柱层析等技术,纯化了高纯度的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽。通过使用SDS-PAGE、离子化质谱、雌大鼠垂体和人流产胎儿垂体,测定了多肽的纯度、分子量、生长激素释放活性。结果:Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽分子量5373Da与实际值吻合,0.1～10μg/ml的肽剂量不论是对人垂体还是大鼠垂体都增加了垂体生长激素的释放,大鼠垂体生长激素的释放具有剂量依赖性。与标准的hGHRH(1-40)肽比较,新的类似肽有较高的GH释放活性。结果也显示了,Pro-GHRH(1-44)Gly-Gly-Cys与Pro-hGHRH(1-44)肽的GH释放活性无统计学差异。结论:新的类似肽有较好的生长激素释放活性、功能选择性和种属特异性。

黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ET-1／NO的影响

目的探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF—α诱导的人脐静脉内皮细胞（ECV-304）的一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）的影响。方法用DMEM培养液在37℃、5％CO2条件下对ECV304细胞株进行扩增至足够数量后，调细胞密度为1×10^5，并分为7组：A组：空白组，不加任何诱导剂；B组：TNF—α（40ng／ml）诱导组；C组：TNF—α（40ng／m1）＋氯沙坦钾（105mol／1）；D组：TNF—α（40ng／m1）＋毛蕊异黄酮（0．1mg／ml）；E组：TNF—α（40ng／ml）＋毛蕊异黄酮（1mg／ml）；F组：TNF—α（40ng／ml）＋毛蕊异黄酮（10mg／ml）；G组：TNF—α（40ng／ml）＋毛蕊异黄酮（20mg／ml）。分别于孵育6小时、24小时后时收集上清液，用ELISA检测上清液中一氧化氮（NO）、内皮素1（ET-1）的含量。结果①与空白组比较，TNF—α降低了ECV-304NO水平（P〈0．001）、提高了ET—1水平（P〈0．001）；②氯沙坦钾提高了ECV-304NO水平（P〈0．001）、降低了ET—1水平（P〈0．001）；③毛蕊异黄酮（0．1mg/ml～10mg／ml）能够促进ECV-304细胞NO的产生（P〈0．001）、降低ET—1的产生（P〈0．001）；④氯沙坦钾和毛蕊异黄酮（20mg／ml）对ECV-304细胞ET-1和NO水平的影响无明显差异（（P〉0．05）；⑤毛蕊异黄酮浓度（在0．1mg／ml-20mg／ml内）与ECV-304ET—1的分泌呈负相关性（r=-0．02、P〈0．001）；与ECV-304NO的分泌呈正相关性（r=0．0075、P〈0．001）。结论黄芪毛蕊异黄酮单体可以促进TNF—α诱导的内皮细胞NO分泌，抑制ET—1分泌，并在一定浓度内（0．1mg／ml-20mg／ml）呈浓度依赖性。