三轴加载条件下路基软土微观结构演化研究

为了从宏、微观角度研究受力全过程中土的微观结构演化及损伤机制,对武汉地区路基软土开展了一系列K0(静止土压力系数)固结不排水三轴剪切试验、扫描电子显微镜试验和压汞试验。基于分维理论和图像处理技术,对微观结构参数进行了分析。研究结果表明:武汉地区路基软土的孔隙具有多重分形特征,并据此确定微孔隙、小孔隙、中孔隙和大孔隙的孔径分界点分别为0.03、0.50和7.00μm。其中孔径为0.50~7.00μm的孔隙整体上具有更强的自相似性,将其定义为特征区间,该区间的表面分形维数随着应变的增加而减小。软土损伤在微观上表现为团聚体解体,并伴随着孔径分布与孔隙形态的演变,孔隙面积比与孔隙形状系数随着应变的增加分别非线性增大和非线性减小。微观结构演化全过程可分为结构微调、损伤发展和结构破坏3个阶段。提出的微观结构因子能够有效揭示软土宏观力学性质的变化。

碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究

在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。

黄芪多糖对雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能的影响

将１０８只１日龄伊莎系蛋用公雏均分为３组：一组为对照，其余２组在３日龄时，于背侧颈部皮下分别注射０．２、０．４ｍＬ黄芪多糖注射液（０．０１ｇ／ｍＬ）１次，再分别于７、２１、３５、４９日龄时采用ＭＴＴ比色法及微量全血培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测外周血Ｔ淋巴细胞转化率的动态变化。结果表明，黄芪多糖对２１、３５日龄雏鸡Ｔ淋巴细胞转化功能有增强作用，且与剂量有相关性，而对７、４９日龄雏鸡的作用不明显。ＭＴＴ比色法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法的检测结果无显著差异（Ｐ＜０．０５）。

地衣芽孢杆菌2709和6816碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及序列分析

用PCR方法从地衣芽孢杆菌 2 70 9和 6 816中扩增了碱性蛋白酶基因 (apr1和apr2 ) ,扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体 pET -2 8a中 ,构建成重组分泌型表达载体pAPR1、pAPR2 .pAPR1、pAPR2中碱性蛋白酶基因在大肠杆菌宿主JM 10 9(DE3)中得到表达 .SDS -PAGE分析显示融合表达产物的分子量均为 30 .5× 10 3 ,同核酸序列测定所推导的值相符 .表达产物分别占细胞总蛋白的 8.0 %和 7.5 % .2 70 9重组菌所得酶活为 12 10u/mL ,6 816重组菌所得酶活为 1175u/mL .研究发现 ,重组的碱性蛋白酶在进入大肠杆菌周质空间时可能存在前肽自动脱落的现象 .同时 ,对地衣芽孢杆菌 2 70 9碱性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析 ,发现与地衣芽孢杆菌 6 816碱性蛋白酶基因的同源性为 98% .图 5参

黄芪多糖对雏鸡外周血中NK细胞活性的影响

黄芪多糖对雏鸡外周血中ＮＫ细胞活性的影响唐雪明刘家国宋大鲁（南京农业大学动物医学院，２１００９５）黄芪是中兽医常用的扶正药物，可“补益元气而托毒”［１］，现代研究还证实了，黄芪可以调节机体免疫功能，在人医临床上常用于抗肿瘤、消除慢性炎症［２］［３］。...

昆山市高血压病疾病经济负担研究及对策分析

目的了解昆山市高血压患病情况及疾病经济负担。方法对昆山市502名高血压患者患病及费用情况进行问卷调查。结果昆山市高血压病的疾病经济负担为1847602573.20元,其中直接经济负担686155227.20元(占37.14%),间接疾病经济负担1161447346.00元(占62.86%)。结论高血压给昆山市带来了沉重的疾病经济负担,有必要利用社区卫生服务平台,构建可持续发展的社会保障体系。

具有工业应用价值的高热稳定性极端酶

主要讨论某些高热稳定性极端酶在生物工程中的重要意义及研究进展。来自嗜热及超嗜热极端微生物的极端酶在高温下显示了良好的热稳定性和活力 ,与目前工业生产中应用的酶相比 ,极端酶有其独特的生物催化功能。一些高热稳定性极端酶已经被纯化 ,它们的基因也被成功地在中温菌中克隆及表达。

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法

通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 .

Bacillus licheniformis 6816碱性蛋白酶基因在E.coli中的克隆和表达

用PCR方法从地衣芽孢杆菌 6 816中扩增了碱性蛋白酶基因 (apr) ,扩增的 1 14kb的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET - 2 0b中 ,构建成重组分泌型表达载体pAPR1。pAPR1中碱性蛋白酶基因在大肠杆菌宿主JM10 9(DE3)中得到表达。SDS -PAGE分析显示融合表达产物的分子量为 30kD ,同核酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白的 7 5 % ,重组菌的酶活比出发菌株提高了 3 3倍。研究发现 。

应用乳酸脱氢酶释放法研究黄芪多糖对雏鸡外周血中自然杀伤细胞活性的影响

将１０８羽１日龄伊莎系蛋用公雏均分为三组，一组为对照组，其余两组在雏鸡３日龄时，于背侧颈部皮下分别注射不同剂量的黄芪多糖注射液１次，再分别于雏鸡７、２１、３５、４９日龄时采用乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放法测定雏鸡外周血中自然杀伤细胞（ＮＫ）活力的动态变化。注射剂量０，４ｍｌ／羽能极显著（Ｐ＜０．０１）地提高３５日龄雏鸡ＮＫ活力，０．２ｍｌ／羽能显著（Ｐ＜０．０５）提高３５日龄雏ＮＫ活力。结果表明，黄芪多糖能发挥免疫促进剂作用，提高雏鸡细胞免疫功能，加速机体免疫功能的发育完善，且与剂量有相关性。

地衣芽孢杆菌感受态细胞的形成及高效电转化

芽孢杆菌在营养缺乏的饥饿状态下 ,细胞易产生感受态因子 ,处于生长芽孢时期的芽孢杆菌更容易产生感受态。基于此原则利用芽孢杆菌极限营养培养基通过体外处理诱导使地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒pAPR的高效电转化方法。当质粒DNA浓度为 1 .5μg/ml、转化时电压为 1 750V的时候 ,可以得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子。而常规电转化的最高仅为 2 0个转化子。为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化提供了模型 。

整合型碱性蛋白酶基因工程菌中抗性基因的敲除

利用大肠杆菌载体pET 2 8a和穿梭载体 pHY30 0PL构建了敲除载体 pHK ,通过DNA变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程菌BP0 71中的卡那霉素抗性基因 (Kanr) ,得到 11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆 ,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验 。

DNA聚合酶基因pfu的克隆及初步表达

通过分子克隆技术从嗜热极端微生物Pyrococcusfuriosus中克隆出高热稳定性的 pfuDNA聚合酶基因 ,琼脂糖凝胶电泳显示基因片段的长度为 2 .3kb ,将其转化入大肠杆菌中并获得初步表达 .重组酶成功地扩增了 80 0bp的DNA片段 .

生物学发明及其专利保护

本文参考中国专利法,欧洲专利法及美国、日本的相关专利法条文和有关国际公约讨论了生物学发明及其获得专利保护的一般方法和原则,以期帮助有关企业和科研机构能有效地对相应地发明进行专利保护。

利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案

在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。

水稻秸秆还田时间对土壤真菌群落结构的影响

为揭示水稻秸秆还田对土壤真菌群落结构的长期影响,采用荧光定量PCR和PCR-DGGE技术分析了秸秆还田90,180,270 d和360 d的土壤真菌基因丰度和群落结构组成演变趋势,并利用冗余分析(RDA)研究土壤真菌群落结构变化与环境因子的关系。结果表明:随着秸秆还田时间的增加,土壤真菌群体数量和多样性指数(H、R和E)显著增加,在360 d时达到最高。对DGGE图谱的特征条带进行胶回收、测序,系统进化分析表明,土壤真菌主要种群包括:接合菌(Zygomycete sp.)、盐腐霉菌(Pythium salinum)、肉盘菌(Uncultured Sarcosomataceae)、牛粪盘菌(Ascobolus stercorarius)、大链壶菌(Lagenidium giganteum)、青霉菌(Penicillium sp.)、曲霉属真菌(Aspergillus sp.)和疏绵状丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、灰绿曲霉菌(Aspergillus glaucus)、禾谷多粘菌(Polymyxa graminis)和枝顶孢霉菌(Acremonium sp.),其中青霉菌(Penicillium sp.)、曲霉属真菌(Aspergillus sp.)和枝顶孢霉菌(Acremonium sp.)具有纤维素降解能力,而枝顶孢霉菌(Acremonium sp.)在90 d时成为新的优势菌群。RDA分析表明,90 d和180 d秸秆还田与对照土壤的真菌群落结构较为类似,270 d和360 d的秸秆还田与对照土壤的真菌群落结构发生了明显变化。土壤有机碳、pH和速效磷是引起土壤真菌群落结构及多样性变异的主要因素。

古细菌Pyrococcus furiosus高嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达

该文将大肠杆菌表达载体pKK223-3中含tac启动子的片段以BamHI、EcoRI酶切后接入表达载体pET28a 中,构建成新的表达载体pEtac,通过PCR扩增获得P.furiosus 胞外α- 淀粉酶完整结构基因,接入pEtac 中,转化大肠杆菌JM109。在IPTG诱导下,转化子周质中能测出明显酶活,证明Pyrococcusfuriosus 的胞外α- 淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞周质中。重组酶最适pH为4.5,最适温度为95℃,重组酶经121℃保温1h,酶活仍能保持50%以上,性质与由P.furiosus自身分泌的胞外α- 淀粉酶相似。

乙酰胆碱酯酶酶抑制法快速检测农药残留的研究进展

概述了乙酰胆碱酯酶酶抑制法快速检测农药残留技术的研究现状,指出了酶抑制法在使用中存在的问题和发展趋势。

ARTP诱变筛选草菇优良菌株及RAPD分析

为构建草菇优良菌株突变体库,首次利用常压室温等离子体技术诱变草菇原生质体,优化的诱变条件是输出功率125 W、处理时间20 s。筛选出3株抗冻能力明显提高的突变菌株,3株突变株在草菇生长的20℃低温环境与对照相比生长速度提高了17%~57%,出菇爬料速度提高了0.8~2.4倍,出菇时间提前了1~2d,抗低温胁迫能力提高了24h。研究运用RAPD技术进行分子鉴定,建立草菇ARTP诱变育种筛选与检测评价平台。