DNA甲基化转移酶hsdM基因对维氏气单胞菌运动性的影响

为探究I型RM系统甲基转移酶基因hsdM对维氏气单胞菌运动性的影响,研究构建hsdM基因敲除的维氏气单胞菌突变株ΔhsdM,并探究该基因敲除对维氏气单胞菌生长、运动能力及鞭毛基因表达的影响。生长曲线测定结果表明:ΔhsdM菌株的生长速率在对数期生长后期开始缓慢降低,但总体生长水平与野生型基本一致;平板运动实验结果显示,hsdM基因敲除后,维氏气单胞菌运动性极显著下降;RT-qPCR结果表明,ΔhsdM菌株部分鞭毛基因表达显著下调。探究hsdM基因敲除对细菌表观性状的调节作用,为进一步探究N6-甲基腺嘌呤(6mA)甲基化调节基因表达的机制奠定理论基础。

琼胶降解菌的筛选及其在龙须菜乙醇发酵中的初步应用

文章以龙须菜为原料,开展发酵产乙醇的基础研究,主要进行了高效琼胶降解菌的筛选和酶解条件的优化。利用琼胶为唯一碳源筛选出2株琼胶降解能力强的菌株QJ14和Hhjh,通过形态学观察和16s r DNA序列分析,对这两株菌株进行了鉴定,经NCBI数据库比对,确定QJ14为假单胞菌属,Hhjh为白色噬琼胶菌属。用QJ14和Hhjh产生的粗酶液酶解龙须菜酸解糊化液,并对影响酶解效果的因素,如起始p H值、酶解时间、震荡处理、混合酶液比例等进行了优化,结果还原糖产量最高可达29.33 mg/g。通过比较酵母单菌发酵、混合菌发酵与分步酶解发酵,利用顶空气相色谱法(HS-GC法)检测发酵液中乙醇产量,结果表明,酵母单菌发酵和混合菌发酵几乎没有乙醇产生,分步酶解发酵的乙醇产量约为2.36m L/L。

维氏气单胞菌flrB基因敲除株构建及其生物特性鉴定

维氏气单胞菌是一种常见的人鱼共患致病菌,为研究维氏气单胞菌中的flrB基因的功能,笔者通过扩增flrB基因上下游同源臂连接至pRE112质粒中,电击转化重组质粒至大肠杆菌WM3064,接合转入野生型维氏气单胞菌,在蔗糖压力下筛选、PCR和测序验证敲除菌株。结果表明,敲除flrB基因后降低生物膜的形成,但不影响维氏气单胞菌的生长。flrB基因能促进其生物膜的形成,这为进一步揭示该基因的功能和作用机制奠定了基础。

维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)引起的细菌性疾病已威胁到鱼类养殖业的发展。Cbl(类CysB蛋白)是细菌硫代谢的重要调控因子之一。本研究选取pET-28a为Cbl的原核表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,使用IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,异丙基−β−D−硫代半乳糖苷)诱导表达,用SDSPAGE凝胶电泳验证蛋白条带,再用BOSTER的BCA蛋白浓度测定试剂盒测量Cbl蛋白浓度,寻找较适宜的蛋白表达条件。结果表明,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为0.1 mmol·L^(−1),诱导温度为15℃,咪唑洗脱浓度为100 mmol·L^(−1)时,Cbl蛋白质量浓度能达到601.405 mg·L^(−1),可满足后续实验要求。

生物科学类创新人才培养模式的探索与实践——以海南大学生物科学理科实验班为例

生物产业作为21世纪最有潜力的战略性产业,其人才储备特别是生物科学类创新人才的培养显得至关重要。本文以海南大学生物科学理科实验班的教育改革为例,从系统构建创新人才培养体系、完善创新人才培养的保障机制两方面入手,建立了符合21世纪需求的生物类创新人才培养模式,包括重视品德素质教育、实行"一对一"导师负责制、强化教学激励机制、突出科技创新训练、完善人才保障制度等。通过一年的探索实践,在实验班中取得初步成效,为国内教学改革及创新人才培养打下基础。

抑制尖孢镰刀菌人工肽适体的筛选和鉴定

香蕉枯萎病严重危害香蕉产业的发展。本研究从肽适体文库中筛选获得对香蕉枯萎病致病菌尖孢镰刀菌有抑制作用的人工肽适体SNP-D4。通过构建人工肽适体体外重组表达载体,获得SNP-D4体外重组蛋白。结果表明,通过抑菌活性检测表达人工肽适体SNP-D4的大肠杆菌全蛋白提取液,能够特异性抑制尖孢镰刀菌孢子的萌发,使其萌发率降低至19.60%。本研究筛选得到的人工肽适体SNP-D4可应用于研发环境友好型特异抗真菌生物制剂,为香蕉枯萎病防治提供新的技术手段。

《热带作物资源学》教学方法探索与实践

《热带作物资源学》是作物学专业硕士研究生的核心课程,也是海南大学一门精品课程和特色课程。该课程主要学习热带作物资源的理论及重要热带作物的起源、种质创新利用现状、研究前沿进展等。通过基本理论和实践教学相结合的教学形式,旨在培养热带作物研究领域高素质的专业人才。

维氏气单胞菌asfR基因敲除菌株的构建及功能初探

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种革兰氏阴性致病菌,能引发水产动物和人类的多种疾病,对水产养殖业和人类公共健康造成严重威胁,但其致病机制尚不明确。维氏气单胞菌C4菌株基因组分析发现,与细菌Ⅲ型分泌系统有关的鞭毛合成基因fliE的相邻位置存在1个功能未知的AraC家族转录因子编码基因,我们将其命名为asfR。NCBI CD-Search预测结果显示,AsfR蛋白含有一个保守的HTH DNA结合功能域,以及1个类似GyrI的小分子结合功能域。已知AraC蛋白超家族广泛存在于细菌中,参与碳代谢、应激反应、细菌毒力和致病性的多种生命活动的调节。asfR基因在维氏气单胞菌AVNIH1和TH0426菌株中高度保守,但对其生物学功能的研究尚未见报道。为进一步探究该蛋白的功能,本研究采用同源重组手段构建asfR基因敲除菌株,并与野生型菌株进行初步比较,发现asfR基因敲除不影响致病菌在富营养条件下的生长能力,但能显著提高其在逆境下的生长能力,而且其生物膜形成能力减弱。上述结果表明,AsfR参与维氏气单胞菌生物膜形成以及逆境抵抗。本研究为进一步鉴定该蛋白的生物学功能提供了必要的研究工具和初步的理论基础。

维氏气单胞菌hfq基因敲除菌株的构建及鉴定

RNA分子伴侣蛋白Hfq是细菌中普遍存在的全局调控因子,对于细菌的生长增殖、毒性和逆境耐受等都有重要影响。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种新型人-鱼共患条件致病菌,会在水产养殖中造成巨大危害。本研究从维氏气单胞菌基因组DNA中扩增hfq基因上、下游序列,连接到pRE112质粒中,构建敲除质粒pRE112-Δhfq,通过接合转移将敲除质粒从大肠杆菌感受态转入维氏气单胞菌后,基于同源重组原理,利用蔗糖压力筛选得到hfq基因敲除的维氏气单胞菌突变株C4-Δhfq。生长曲线分析表明,hfq基因敲除显著延缓维氏气单胞菌的生长速率,同时,回补hfq使细菌恢复生长。本研究获得的hfq基因敲除菌株,可为进一步研究维氏气单胞菌中Hfq调控因子的功能及其调控机制提供一定帮助。

维氏气单胞菌tmRNA突变体构建及其用于反式翻译底物的鉴定

SmpB-tmRNA介导的反式翻译,是细菌中普遍存在的一种主要核糖体拯救机制,对细菌的生存和增殖都具有重要影响。为了探明反式翻译系统在人-鱼共患病原菌维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)中的作用机制,本研究基于维氏气单胞菌tmRNA的二级结构预测,将tmRNA标记肽的后5个氨基酸残基的密码子以及1个终止密码子突变为组氨酸密码子,从而构建tmRNA突变体。生长曲线测定结果表明,该tmRNA突变体能够回补tmRNA缺失导致的细菌生长缺陷;同时,免疫印迹实验确证该突变体能够成功地将反式翻译拯救的蛋白底物标记上组氨酸标签,表明其能够行使tmRNA的正常功能。本研究构建的tmRNA突变体为后续分离和纯化tmRNA-SmpB介导的反式翻译底物,进而研究反式翻译系统在细菌中的作用机制提供了理论基础。