小脑顶核电刺激对急性脑梗死患者血清NSE和神经功能缺损的影响

目的 :观察小脑顶核电刺激 (FNS)对急性脑梗死患者血清神经元特异性烯醇化酶 (NSE)和神经功能缺损的影响 ,探讨该治疗方法的康复疗效。方法 :6 0例急性脑梗死患者随机分为FNS组 30例和对照组 30例 ,分别观察治疗前后患者血清NSE浓度的动态变化及神经功能缺损评分情况。结果 :治疗后 2组血清NSE浓度和神经缺损评分与治疗前比较均有下降 ,且FNS组下降更显著 (P <0 0 1)。结论 :FNS可降低急性脑梗死患者血清NSE浓度 ,有利于促进神经功能恢复。

缺血缺氧对体外培养星形胶质细胞细胞周期和增殖的影响

目的 观察缺血缺氧损伤对星形胶质细胞细胞周期和增殖的影响。方法 用流式细胞仪检测缺血缺氧后不同时间点星形胶质细胞细胞周期变化 ,并用荧光免疫细胞化学技术测定胶质细胞纤维酸性蛋白 (GFAP)和增殖细胞核抗原 (PCNA )的表达水平。结果 体外缺血缺氧损伤后星形胶质细胞 S期较正常组明显增高 ,6 h达高峰 ,而随后则呈下降趋势。PCNA阳性反应损伤后表达均增加 ,6 h表达最高 ;在缺血缺氧早期 ,GFAP阳性染色增强 ,6 h最高 ;缺血缺氧 12 h后 GFAP阳性染色变弱。结论 缺血缺氧损伤后星形胶质细胞活化进入增殖期 ;PCNA参与了损伤后星形胶质细胞的修复和增殖 ;

NPPB对低渗诱导海马神经元凋亡的拮抗作用

目的观察体积调节性氯离子通道阻滞剂NPPB对低渗条件下神经元凋亡的影响。方法采用原代培养的大鼠海马神经元细胞,实验分为对照组(无低渗溶液处理)、低渗组、低渗加NPPB干预组;在不同时间点(10min、30min、60min),应用AnnexinⅤ/PI流式细胞检测以及免疫细胞荧光三标法(TUNEL/MAP-2/DAPI)检测各实验组神经元凋亡的情况。结果与对照组相比,神经元在低渗干预10min后凋亡细胞明显增多,60min时神经元的凋亡达到高峰(P<0.01),而NPPB干预组在各时间点凋亡神经元相对低渗组明显下降(P<0.01),较正常对照组增高。结论低渗条件可诱导体外培养海马神经元细胞凋亡,体积调节性氯离子通道阻滞剂NPPB可以显著降低低渗诱导的神经元凋亡,提示VRAC通道参与了低渗诱导的神经元凋亡。

ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞炎性分泌的影响

目的观察ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞活化及其炎性分泌的作用。方法采用小胶质细胞系BV2细胞复苏后传代培养,分为对照组和Y27632干预组;在0、3h、6h、18h和24h收取细胞和细胞培养基;采用免疫荧光细胞染色测定各组BV2细胞上Iba1的表达,ELISA法测定各组培养基中IL-1β和TNF-α的浓度变化。结果 Y27632可明显改变BV2细胞形态,干预组细胞比对照组细胞的胞体更大,细胞突起增多增长,细胞形态改变在干预6h时最为显著。与对照组相比,Y27632干预后BV2细胞分泌的IL-1β和TNF-α降低,在18h时抑制效果最为显著(P<0.01)。结论 ROCK抑制剂Y27632可诱导BV2细胞活化及炎性分泌降低,提示Rho/ROCK信号通路在小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。

大鼠局灶性脑缺血后GABA_A受体亚基α2和α3在梗死对侧皮层表达的动态变化

目的研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注后,梗死对侧皮层氨基丁酸A(GABAA)受体α2和α3亚基的表达变化。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,分为MCAO组(n=18)和假手术组(n=18),分别于术后7d、30d和6个月断头取脑,采用免疫组织化学技术检测各组中梗死对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3的表达情况。结果 MCAO组大鼠与假手术组大鼠相比,在7d时梗死对侧亚基α2和α3在皮层各个脑区改变无明显差异(P>0.05);30d和6个月时,亚基α3在各个脑区均显著升高(P<0.05);30d时亚基α2在梗死对侧的Par1和Par2脑区表达增加(P<0.05);6个月时,梗死对侧亚基α2在Par1脑区表达增加而在Par2脑区表达降低(P<0.05)。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死塞对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3发生了广泛而长效的变化,这种变化提示脑缺血后GABAA受体功能受损,GABAA受体的改变可能参与了缺血后突触的重塑和神经网络重建。

大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞过度增殖对局部微循环的影响

目的观察局灶性脑缺血后海马和缺血边缘区星形胶质细胞过度增殖对微循环的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血组和干预组,缺血组和干预组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型,缺血组侧脑室采用ALZET微渗透泵给予0.2%DMSO,干预组给予细胞周期抑制剂roscovitine,假手术组不插入线栓,不给与任何药物干预。缺血7d后于股静脉注入FITC标记的葡聚糖标记血管,小鼠抗大鼠单克隆抗胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体标记星形胶质细胞;激光共聚焦三维成像显示胶质细胞于微循环之间的关系。结果缺血同侧海马和缺血边缘区在GFAP阳性细胞增多的同时,局部微血管血流灌注明显减少,应用细胞周期抑制剂roscovitine抑制星形胶质细胞增生可以明显增加局部微血管的血流灌注。结论脑缺血后缺血边缘区和海马的反应性星形胶质细胞增生与微循环灌注减少密切相关。

缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌BDNF的影响

目的:观察缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法:培养的星形胶质细胞分别在低氧去血清中培养1h、3h、6h、12h、1d、3d,采用逆转录PCR检测星形胶质细胞BDNF mRNA的表达,ELISA检测培养上清液中BDNF的浓度。结果:低氧去血清培养1h时星形胶质细胞BDNF mRNA表达达峰值,之后逐渐降低,培养12h后BDNF mRNA持续低于正常培养水平。在低氧去血清刺激下培养上清液中BDNF的浓度迅速增加,培养12h时达峰值,之后逐渐降低,保持低水平。结论:缺血缺氧促进星形胶质细胞活化,反应性增加BDNF的合成和分泌,这种变化与缺血后神经营养补给有关。

局灶性脑缺血再灌注缺血脑区和远隔脑区氨基酸的动态变化

目的研究大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注过程中缺血脑区和远隔脑区氨基酸动态变化的差异。方法颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用微透析技术取样,高效毛细管电泳-激光诱发荧光法检测,分别观察局灶性脑缺血再灌注过程中缺血脑区（纹状体）和远隔脑区（海马）细胞外3种氨基酸含量的动态变化。结果纹状体细胞外谷氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸3种氨基酸含量在局灶性大脑中动脉缺血20min时即显著升高,再灌注后有所下降,在缺血60min及再灌注60min一直维持在显著高于基线值的水平;海马细胞外3种氨基酸含量缺血20~40min明显升高,以后有所回降,再灌注20-40min又上升,缺血期和再灌注期分别出现一次高峰;假手术组动物纹状体和海马细胞外3种氨基酸含量在相应各时间点与基线值相比无显著变化。结论局灶性大脑中动脉缺血再灌注不仅导致缺血脑区的损伤,在远隔脑区也引起相应的病理生理变化。

甘珀酸干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的观察缝隙连接阻断剂甘珀酸对局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型(MCAO),将动物随机分为脑缺血60min再灌注(MCAO)组,脑缺血再灌注加甘珀酸干预(MCAO+CBX)组和假手术组(sham)。采用尼氏染色显示脑梗死灶并计算梗死灶体积;应用免疫荧光与TUNEL染色法分别观察脑缺血后3d与7d不同时间点缺血边缘区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达和细胞凋亡情况。结果(1)缺血后3d、7d MCAO+CBX组大鼠梗死体积小于MCAO组,3d、7d MCAO+CBX组大鼠梗死体积较MCAO组分别缩小5%和4.6%;(2)缺血后3d、7d于缺血边缘区可见大量TUNEL阳性染色细胞,且MCAO组大鼠缺血边缘区细胞凋亡数目明显多于MCAO+CBX大鼠(P<0.001);(3)缺血后3d和7d组缺血边缘区GFAP表达明显增强,3d的MCAO组与MCAO+CBX组大鼠缺血边缘区GFAP的表达均较假手术组强(P<0.05),7d的MCAO+CBX组大鼠缺血边缘区GFAP的表达较假手术组强(P<0.001),但明显弱于MCAO组大鼠(P<0.01);结论缝隙连接阻断剂甘珀酸可减少大鼠大脑中动脉阻塞后脑梗死体积,其机制可能与阻断缝隙连接后缺血边缘区神经元凋亡降低有关,星型胶质细胞的反应性变化参与了该过程。

短暂性脑缺血发作对脑梗死患者神经功能的影响

目的 探讨短暂性脑缺血发作 (transientischemicattack ,TIA)对脑梗死患者是否具有脑保护效应。 方法 收集有或无同侧TIAs史的首次脑梗死患者分别 18例和 31例 ,利用酶联免疫分析法测定入院时血清中神经元特异性烯醇化酶 (neuro specificenolase ,NSE)的含量水平 ,并采用改良爱丁堡 斯堪的那维亚卒中量表和半定量的 5级评分法分别对患者入院时及 1月后神经功能状态进行评估。 结果 入院时NSE水平和神经功能缺损程度呈明显正相关 (有TIAs史组r =0 72 8,P <0 0 1;无TIAs史组r =0 6 83,P <0 0 1) ,且有TIAs史的脑梗死患者NSE的含量明显低于无TIAs史组 (P <0 0 1) ,有TIAs史组入院时及 1月后神经功能状态与单纯脑梗死组相比差异也均有显著性 (P <0 0 5 )。 结论 TIA可能对人脑产生缺血耐受作用 ,从而减轻随后严重脑缺血的神经功能缺损程度 ,改善脑梗死的预后。

缺血缺氧对体外培养星形胶质细胞细胞周期和周期相关蛋白的影响

目的 观察缺血缺氧损伤对星形胶质细胞细胞周期及细胞周期相关蛋白的影响。 方法 用流式细胞仪及Brdu掺入法检测缺血缺氧后不同时间点星形胶质细胞细胞周期变化和细胞的增殖活力 ;用荧光免疫细胞化学技术测定增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞周期蛋白cyclinD1的表达水平。结果 体外缺血缺氧损伤后S期星形胶质细胞较正常组明显增加 ,6h达高峰 ,Brdu掺入法显示损伤后 6h星形胶质细胞的增殖活力最高 ,而随后S期细胞数目及细胞增殖活力都呈下降趋势。PCNA阳性反应损伤后表达增加 ,6h表达最高 ,而cyclinD1的表达在损伤后逐渐增加 ,在 2 4h时达高峰。结论 缺血缺氧损伤激活星形胶质细胞 ,使其进入新的细胞周期 ,出现细胞的增殖反应 ;PCNA及cyclinD1参与了损伤后星形胶质细胞的修复和增殖 ;细胞周期事件与星形胶质细胞的增殖活化密切相关。

扩散性抑制对脑缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的为了研究阻断大鼠局灶性脑缺血诱导的扩散性抑制对同侧海马迟发性神经元死亡的影响。方法颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用电生理学方法记录扩散性抑制波,尼氏染色和TUNEL染色检测海马迟发性神经元死亡;观察阻断局灶性脑缺血再灌注诱导的扩散性抑制对海马迟发性神经元死亡的影响。结果不给予SD阻断剂,大脑中动脉缺血模型有39%的动物出现海马迟发性神经元死亡;用MK-801阻断扩散性抑制后仅10%的动物出现海马迟发性神经元死亡,机率明显减小。结论局灶性脑缺血引起的海马迟发性神经元死亡可能与扩散性抑制由缺血区不断向远隔部位播散有关。

溶血磷脂酸对脊髓星形胶质细胞增殖的影响

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养脊髓星形胶质细胞增殖的影响。方法采用原代培养的大鼠脊髓星形胶质细胞,实验分为对照组(正常培养液培养)和LPA干预组(含有10μmol/L LPA的培养液培养);在不同时间点(0、6、12、24和48h),计数各组的细胞数目,采用Western blot和流式细胞术检测各实验组增殖细胞核抗原(PCNA)表达量变化及细胞周期进展情况。结果免疫荧光染色显示原代培养的脊髓星形胶质细胞纯度达98%;在各观察时间点,对照组和LPA干预组的星形胶质细胞的细胞增殖数目、PCNA蛋白表达量及细胞周期分布情况均无显著差异(均P>0.05)。结论 LPA对体外培养脊髓星形胶质细胞的增殖活力和细胞周期进展并无显著影响。

绿色荧光蛋白作为供体细胞标记物的可行性

目的 :研究绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)的荧光稳定性及对转染细胞的影响 ,探讨其作为供体细胞标记物的可行性。方法 :将增强型GFP基因转入PC1 2细胞 ,经G4 1 8筛选并连续传代 ,在荧光显微镜下观察荧光蛋白阳性表达率 ;比较未转染细胞和转染细胞的形态、细胞活性、细胞周期等。结果 :第 5代、第 4 0代及未用G4 1 8筛选 3个月后的转染细胞 ,荧光蛋白阳性表达率为 1 0 0 % ;未转染细胞和转染细胞的形态无明显区别 ,细胞活性、细胞周期等差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :GFP荧光稳定 ,对转染细胞无明显影响 。

缺血缺氧对体外培养星形胶质细胞细胞活化和细胞周期的影响

目的观察缺血缺氧损伤对星形胶质细胞细胞活化和细胞周期的影响。方法用流式细胞仪及BrdU掺入法检测缺血缺氧后不同时间点星形胶质细胞细胞周期变化和细胞的增殖活力;用荧光免疫细胞化学技术测定胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)及细胞周期蛋白cyclinD1的表达水平。结果体外缺血缺氧损伤后星形胶质细胞S期较正常组明显增高,6h达高峰,BrdU掺入法显示损伤后6h星形胶质细胞的增殖活力最高,而随后S期细胞数目及细胞增殖活力都呈下降趋势。在缺血缺氧早期,GFAP阳性染色增强,6h最高;缺血缺氧12h后GFAP阳性染色变弱,而cyclinD1的表达在损伤后逐渐增加,在24h时达高峰。结论缺血缺氧损伤激活星形胶质细胞,使其进入新的细胞周期,出现细胞的增殖反应;cyclinD1参与了损伤后星形胶质细胞的修复和增殖;细胞周期事件与星形胶质细胞的增殖活化密切相关。

大鼠海马和大脑皮质TRPA1 mRNA的表达

目的观察TRPA1离子通道(一种瞬间受体电位离子通道)在大鼠海马和大脑皮质的表达情况。方法提取SD成年大鼠大脑皮质、双侧海马和脊髓背根神经节(DRG,dorsalrootganglion)组织mRNA,应用RT-PCR(re-versetranscriptasePCR)技术检测TRPA1离子通道mRNA的表达;同时制作大鼠大脑和脊髓背根神经节冰冻冠状切片,采用原位杂交染色的方法用地高辛标记分子探针,检测TRPA1离子通道mRNA的表达。结果RT-PCR和原位杂交染色的结果均显示在大鼠海马和大脑皮质均存在TRPA1离子通道。结论在大鼠海马和大脑皮质均存在TRPA1离子通道。

星形胶质细胞促进共培养骨髓间充质干细胞的生长和分化

目的:探讨星形胶质细胞对共培养的骨髓间充质干细胞生长和分化的影响。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,经Hoechst33342标记后与纯化的星形胶质细胞在DMEM/F12/10%FBS中一起培养,观察骨髓间充质干细胞的生长状况、形态变化和特异性标志蛋白NeuN、GFAP和CNP的表达。结果:倒置显微镜下2种细胞生长状态良好,少数Hoechst33342标记细胞伸出细长突起,呈锥形、多角形或星形,有NeuN、GFAP和CNP的表达。结论:星形胶质细胞与骨髓间充质干细胞共培养可以维持骨髓间充质干细胞的生长,并可在一定程度上诱导其向神经样细胞分化。

磷酸化细胞周期素依赖性激酶在局灶性脑缺血大鼠神经细胞中的表达

目的:观察磷酸化细胞周期素依赖激酶在大鼠局灶性脑缺血后神经元和星形胶质细胞的表达。方法:采用大脑中动脉阻塞(MCAO)方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫荧光技术检测缺血后1d、3d、7d、14d大鼠缺血侧病灶周围神经元和星形胶质细胞中磷酸化周期素依赖激酶2(CDK2)、磷酸化细胞分裂周期激酶2(CDC2)的表达。结果:在神经元中,与正常对照组相比,缺血后1d、3d组磷酸化CDK2的表达量明显增加(P<0.05),磷酸化CDC2在正常组及缺血组均无明显表达;在星形胶质细胞中,缺血后1d、3d、7d均出现明显的磷酸化CDK2、CDC2的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论:大鼠局灶性脑缺血后早期部分神经元再次进入细胞周期,细胞周期调控机制可能参与了大鼠局灶性脑缺血后神经元的凋亡及星形胶质细胞的分裂增殖。

脑血吸虫病的影像学特征及诊断意义

目的探讨脑血吸虫病的影像学特征及诊断意义。方法对26例脑血吸虫病患者的免疫学检查结果、临床及影像学表现进行分析。结果脑血吸虫病患者可出现各种神经系统临床症状和局灶体征,血清血吸虫抗体阳性,头部CT平扫病变部位低密度影,呈"指套样"水肿;增强后病灶呈"团块样"强化;MRI平扫病变部位长T1长T2异常信号;增强后病灶为"结节样"、"泥沙样"或"斑片样"强化。结论结合临床、免疫学检查及特征性影像学表现可确诊脑血吸虫病。

Adam10基因在成年小鼠中枢神经系统的表达模式研究

目的研究adam10基因在成年小鼠中枢神经系统表达的脑区分布特点以及细胞类型。方法构建小鼠源性adam10 cRNA探针,通过原位杂交技术,观察adam10 mRNA在成年小鼠中枢神经系统分布特点,并在原位杂交后进行免疫组织化学染色,把adam10原位杂交信号和神经元、星形胶质细胞特异性细胞标记物进行双标,观察adam10基因表达的细胞类型。结果 Adam10基因在成年小鼠大脑皮层、海马、丘脑和小脑中表达,原位杂交后进行免疫组织化学染色结果显示adam10原位杂交阳性信号主要和神经元标记物NeuN共标,而和星形胶质细胞标记物GFAP不共标。结论本研究证实了在成年小鼠中枢神经系统中adam10基因在大脑皮层、海马、丘脑和小脑中都有表达;并且首次明确了大脑中ad-am10基因主要在神经元中表达,在星形胶质细胞中不表达,小脑中主要在小脑颗粒细胞和蒲肯野细胞中表达。