洛伐他汀对HL-60、KG-1、K562白血病细胞体外作用的研究

目的:观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(lovastatin,LOV)对HL60、KG1、K562白血病细胞增殖、凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:首先利用MTT法、台盼蓝拒染法观察LOV对HL60、KG1、K562细胞增殖及活力的影响。再通过细胞形态观察,DNA凝胶电泳,流式细胞术分析,RTPCR半定量测定bcl2mRNA水平等技术,系统观察LOV对HL60、KG1、K562体外诱导凋亡的情况。结果:①LOV抑制HL60、KG1、K562细胞增殖,IC50分别为17.16、51.65、58.95μmol/L;②LOV诱导HL60、KG1、K562细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G1/S期;LOV在诱导HL60细胞凋亡过程中随作用时间延长,bcl2表达水平逐渐下降。结论:LOV抑制HL60、KG1、K562细胞增殖并诱导凋亡,阻滞细胞周期进程于G1/S期;bcl2参与了LOV诱导凋亡的基因调控。

洛伐他汀对NB4细胞ras基因p21^(Ras)膜结合作用影响的体外试验

目的 :探讨洛伐他汀 (LOV)对人白血病NB4细胞的作用及其机制。方法 :以MTT比色法首先观察LOV对NB4细胞增殖的影响 ;利用逆转录 -聚合酶链反应半定量测定LOV作用于NB4细胞不同时间H -ras、K -ras、N -ras癌基因mRNA表达水平 ;同时采用流式细胞术测定NB4细胞p2 1Ras总蛋白、膜蛋白的表达。结果 :①LOV抑制NB4细胞增殖 ,IC5 0为 12 5 9μmol/L。②NB4细胞H、K、N -ras基因表达均为阳性。③LOV处理不同时间的NB4细胞H、K、N -ras基因转录水平无明显变化 ;p2 1Ras总蛋白水平也无变化 ,而细胞膜表面p2 1Ras蛋白水平随时间进行性下降。结论 :LOV抑制NB4细胞增殖。LOV靶向HMG -CoA还原酶 ,抑制p2 1Ras蛋白异戊二烯化、阻滞p2 1Ras蛋白与细胞膜结合 ;不影响ras癌基因以及p2 1Ras总蛋白的表达。

RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究

目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果:雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。

关于经济结构优化升级的思考

加速我国产业结构优化和升级，是我国经济发展中的当务之急，也是我国经济发展战略调整的大策，必须从战略的高度研究结构调整问题。文章结合经济结构调整的国际经验，针对我国产业结构存在的主要问题，系统、全面地提出了我国经济结构调整的指导思想和基本原则、经济结构调整的思路、经济结构调整的基本内容、经济结构调整的政策措施、经济结构调整的突破口。文章最后指出，面临日益激烈的国际竞争，实现产业结构升级，提高产业国际竞争力。

农业政策性金融与消除贫困

农业政策性金融与消除贫困国风农业政策性金融，是以政府发起、组织为前提，为配合、执行政府产业政策和区域政策，以国家信用为基础，不以盈利为主要目标，在农业及相关领域从事资金融通，支持、保护农业生产，促进国民经济协调发展和农民收入稳定增加的一种特殊的金融活...

佛外说佛——读经漫言

佛教徒服务社会、济度世人的行为是有教义做理论基础的，并不只是一般宗教性的善行。佛教徒的主要修行德目是六波罗蜜（六度）与四无量心。六度是布施、持戒、忍辱、精进、禅定与般若（智慧）。四无量心是慈、悲、喜、舍四种心态的充量至极。这些德目包含两类内容：其一是促使个人解脱的智慧与修持；其二是对于众生的同情与救济。可见“舍己为人”不只是一种泛泛的宗教情操，而且是完成其宗教目标的必经途径。

非小细胞肺癌中c-Met、EGFR、K-Ras和EML4-ALK基因的检测分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肝细胞生长因子受体(c-Met)基因扩增与临床病理特征的关系以及分析c-Met与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的相关性。方法采用荧光原位杂交技术(FISH)检测108例NSCLC患者的c-Met基因扩增情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EML4-ALK融合基因及c-Met基因表达量,聚合酶链扩增反应(PCR)及直接测序法检测EGFR和K-Ras基因突变情况,并分析c-Met基因与临床病理特征的关系及其与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的关系。结果 NSCLC中c-Met基因扩增率为1.85%,其在吸烟和非吸烟患者中扩增率分别为2.94%和1.35%;腺癌c-Met基因扩增率为1.23%,鳞癌未发现c-Met基因扩增;仅Ⅰ期和Ⅲ期中分别有1例c-Met基因扩增。NSCLC中EGFR、K-Ras基因突变及EML4-ALK融合基因的阳性率分别为42.59%、5.56%和12.04%。结论 FISH法对c-Met基因扩增检出率与qRT-PCR检测的c-Met基因表达水平基本一致;c-Met基因扩增与EGFR、K-Ras突变及EML4-ALK融合基因之间几乎是不共存的,c-Met扩增与NSCLC患者年龄、性别、吸烟状态、肿瘤组织类型及临床分期无关。

续断皂苷抗白血病作用的机制探讨

目的探讨续断皂苷(akebia saponinD,ASD)抗白血病细胞及其作用机制。方法用不同剂量(10、30、50、100μg/mL)皂苷处理人急性白血病细胞株U937细胞和人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞,采用MTT比色法观察ASD对白血病细胞的作用。以Annexin-Ⅴ染色法检测细胞凋亡并以PCR法检测凋亡相关基因的表达。采用Westernblot法检测P53蛋白的变化。采用Griess分光光度法检测样品中一氧化氮(NO)的代谢产物亚硝酸盐的含量。结果与未处理组相比,50μg/mLASD能明显抑制U937细胞和HL-60细胞的生长并呈剂量依赖性,同时伴随bcl-2mRNA表达的明显下调。Western blot检测结果显示,P53蛋白的表达水平随ASD作用而升高。另外,ASD可以促使U937细胞和HL-60细胞中NO的含量显著提高(P<0.05)。结论 ASD对U937细胞和HL-60细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与bcl-2基因的下调,p53蛋白上调,以及促进白血病细胞内NO含量提高相关。

miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性

背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。

先秦诸子对人生问题的探讨

文章从宇宙观、人生观、人性论、价值观、政治观等五方面对先秦诸子关于人生问题的观点进行综述,探讨了墨、儒、道、法等诸子对"人"之为人的诠释和剖析。运用辩证思想和科学的历史观,揭示了先秦诸子对人生问题的独到见解和启发意义,同时也指出,只重目标而不重进行方法的哲学思想,乃是先秦诸子的共同缺点。

中国农业的区域发展战略

中国农业的区域发展战略中国社会科学院研究生院博士研究生国风中国是一个农业大国，地域辽阔，各地的自然地理、气候和农业资源状况差异很大。尤其是改革开放以来，不同区域的农村经济发展出现了异彩纷呈的局面，差异进一步加大。在这样一个大国，要实现农业的稳定发展和...

慢性淋巴细胞性白血病骨髓基质细胞和正常骨髓基质细胞的比较性分析

本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供理论依据。从CLL患者和正常供者骨髓中分离单个核细胞,进行原代骨髓基质细胞(hBMSC)培养;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CLL-hBMSC和N-hBMSC表面粘附分子如血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的mRNA水平;采用real-time PCR和Western blot法分别检测两类不同来源的hBMSC中淋巴毒素β受体(lymphotoxin beta receptor,LTβR)的mRNA和蛋白质表达水平;采用Western blot法检测NF-κB家族成员的表达并分析细胞因子LTα1β2对NF-κB家族成员表达的影响;建立hBMSC和CLL细胞共培养体系,利用碘化丙啶(PI)染色检测细胞死亡情况。结果表明:从CLL患者骨髓中能成功地培养出贴壁的成纤维样hBMSC。与N-hBMSC相似,表面粘附分子VCAM-1和ICAM-1在两类hBMSC中的mRNA表达一致;两类hBMSC中LTβR的mRNA和蛋白表达水平相似;各NF-κB家族成员在两类hBMSC中都有表达,且蛋白水平无显著性差异;细胞因子LTα1β2可诱导hBMSC中经典性和非经典性NF-κB信号通路的活化;体外实验表明,两类hBMSC都能够有效地支持CLL细胞的体外存活。结论:两类hBMSC培养效率以及细胞形态上无明显差异。LTβR-NF-κB信号分子在两类hBMSC的表达以及活化情况相似。

他汀类药物与细胞增殖及凋亡

他汀类药物作为羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG CoA)还原酶的抑制剂抑制胆固醇合成 ,已普遍用于临床治疗高胆固醇血症。近年来研究发现 ,他汀类药物通过抑制某些蛋白质的异戊二烯化 ,从而抑制多种肿瘤细胞株增殖并诱导凋亡 ,对正常细胞影响不大 ,有望作为新的肿瘤治疗手段。

电穿孔法介导醛脱氢酶基因与多药耐药基因的转移和表达

背景与目的:将不同类型的耐药基因同时导入造血细胞,以扩大耐药范围和进行体内选择是基因治疗的重要策略,这类载体基因片段较长,进行基因转移有一定的难度。本研究旨在寻找安全有效的长片段基因转移途径。方法:将携带不同类型的耐药基因醛脱氢酶基因(ALDH1)和多药耐药基因(MDR1)的逆转录病毒载体G1Na-AIM以NdeI酶切线性化,电穿孔法转导PA317细胞,经长春新碱(VCR)和4-氢过氧化环磷酰胺(4-HC)选择后,应用Southernblot法确定原病毒的整合,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分析转移基因的表达,筑巢式聚合酶链反应(nestedPCR)检验转移系统的安全性。结果:电穿孔法有效介导了ALDH1与MDR1基因的同时转移,Southernblot法证实ALDH1与MDR1基因稳定整合至宿主细胞基因组,RT-PCR检测到转移基因的转录,FCM测定下游基因MDR1蛋白表达增高4倍,转导率达98%。nestedPCR未检测到辅助病毒(env)。结论:电穿孔法安全有效地介导了ALDH1与MDR1基因的共转移和高表达。

非传统性NF-κB信号转导通路与血液系统疾患

核因子κB(NF-κB)包括RelA,RelB,c-Rel,NF-κB1和NF-κB2,在免疫反应、炎症反应、肿瘤形成、外周淋巴器官发育和淋巴细胞发育等多种生物学过程中起重要作用。NF-κB活化通路有两条:传统途径(经典途径)和非传统途径(选择性途径)。以往对于恶性血液系统疾患的研究都集中在传统性NF-κB活性(p50-RelA为主)上,近年来非传统性NF-κB信号转导通路在肿瘤尤其是B细胞源性恶性肿瘤中的作用也逐渐引起重视。了解非传统性NF-κB信号转导通路的生物学功能及其与血液系统疾患的关系,为血液病的治疗寻求一种新的途径。本文就非传统性NF-κB信号转导通路及其与恶性血液系统肿瘤的关系进行了综述。

论春秋时期民本思想的勃兴

民本思想是我国古代思想文化的精华和政治思想的理论根基。春秋时期,人们的头脑中尽管还有非常浓厚的天命鬼神观念,但已认识到鬼神的意志是由民的福祉和感受决定的,即"夫民,神之主也"。对于国家的祸福兴衰,不在于祭祀之厚薄,而在于国君的道德修养状况和是否爱民。国君一旦不修身、不爱民,则必然"神怒民叛"。此外,民本思想除了凸显政治和道德的关联外,还将道德修养与个人的命运相联系,体现了中国人文思想伦理化的鲜明特色。

历史上的托古改制

本文以王莽改制、王安石变法和戊戌维新这三次历史上最具代表性的改革为例,分析其历史背景、理想目标、改革措施及其成败得失,具有一定的史鉴意义。

醛脱氢酶基因转导介导的K562细胞对环磷酰胺的耐受性(英文)

本研究的目的是观察经醛脱氢酶基因 (ALDH1)转导的造血细胞对环磷酰胺的耐受性。以逆转录病毒载体pLXSN ALDH1将醛脱氢酶基因导入人造血细胞系K5 6 2 ,应用PCR证实原病毒的整合 ,用RT PCR检测ALDH1基因表达和用MTT法分析ALDH1过表达导致的 4 氢过氧环磷酰胺的耐药表型。结果发现 ,逆转录病毒成功地介导了醛脱氢酶基因转移 ,全长ALDH1cDNA以原病毒形式整合入受体K5 6 2细胞基因组 ,RT PCR检测到ALDH1基因转录表达。ALDH1过表达的基因转移细胞对环磷酰胺的耐受性明显提高 ( 4倍 ) ,IC50 ≈ 10 μmol/L。结论提示 ,体外ALDH1过表达足以引起对环磷酰胺耐受 。

多药耐药基因修饰的小鼠骨髓细胞对造血功能的保护作用

目的 :将体外转染了人多药耐药基因 (MDR1 )的小鼠骨髓细胞 ,移植给经致死剂量照射的受体小鼠 ,观察该基因对小鼠造血功能的保护作用。方法 :分离经 5 -Fu预处理的供体小鼠骨髓有核细胞 ,体外转染由逆转录病毒介导的人多药耐药基因MDR1 ,然后移植给经 8 5Gy致死剂量照射的同系受体小鼠 ,以紫杉醇 (Taxol)、长春新碱(VCR)、柔红霉素 (DNR)筛选 ,观察小鼠血象、生存期和生存率变化 ,应用聚合酶链反应 (PCR)和流式细胞仪 (FCM)分析人多药耐药基因在小鼠中的整合与表达。结果 :致死剂量辐照后 ,移植组小鼠造血功能逐渐恢复 ,未移植组 1 5d内全部死亡。腹腔注射紫杉醇或静脉注射长春新碱、柔红霉素后 ,实验组生存率和生存期明显高于对照组 (P <0 0 5)。表明MDR1基因能保护骨髓细胞 ,并且具有体内选择和富集作用 ,PCR分析提示 ,实验组外周血、骨髓、肝、脾组织中均检测到原病毒整合 ,RT -PCR与FCM检测到MDR1基因表达。结论 :人MDR1基因修饰的小鼠骨髓细胞 ,能有效重建经致死剂量照射的受体小鼠造血功能 。

Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用

目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。