TLSF_(JM)对T细胞IL-2R表达和蛋白酪氨酸磷酸化的调节作用

应用免疫组化染色技术,研究了TLSF_(JM)对T细胞IL-2R表达和蛋白酪氨酸磷酸化的调节作用。结果表明:TLSF_(JM)对PHA或PA活化的人PBMC以及小鼠CTLL-2 IL-2R表达和蛋白酪氨酸磷酸化具有明显的抑制作用,但对在T淋巴细胞增殖、分化过程中起重要作用的细胞因子IL-1、IL-2和IL-6的产生无明显影响。

9．1C3单克隆抗体轻、重链可变区基因克隆及序列分析

９．１Ｃ３分子是一种参与ＮＫ、巨噬细胞及ＬＡＫ细胞杀伤过程的重要细胞表面分子，主要表达于外周血单个核细胞表面。本文运用分子生物学技术，从分泌９．１Ｃ３ＭＣＡｂ的杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，经反转录、ＰＣＲ分另１１分离了９．１Ｃ３ＭｃＡｂ轻链可变区（ＶＬ）基因及重链可变区（ＶＨ）基因，并用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因序列进行了分析。结果表明：９．１Ｃ３ＶＨ基因为３５１ｂＰ，编码１１７ａａ残基，９．１３ＶＬ为３２４ｂＰ，编码１０８ａａ残基；从推导出的氨基酸序列分析证实９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ序列均符合小鼠ｌｇ可变区的氨基酸序列特征；根据Ｋａｂｂａｔ分类体系，９．１Ｃ３ＶＨ隶属Ｉｇ重链第Ⅱ（Ｃ）亚组，９．１Ｃ３ＶＬ隶属小鼠ＩｇＫ链第Ⅴ亚组。９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因的克隆成功为其单链抗体的构建、表达奠定了良好的物质基础。

miRNA在肿瘤发生、诊断及治疗中的研究进展

对微小RNA(microRNA,miRNA)的产生与肿瘤的关系及其在肿瘤诊断、预后和治疗方面的潜在作用进行了综述.研究表明,miRNA可以调节癌基因和/或抑癌基因,与肿瘤的发生存在着紧密关系;同时miRNA在肿瘤的诊断、预后及治疗方面也发挥着重要的作用.该领域未来研究将主要集中在新miRNA靶标分子的识别、miRNA参与疾病发生分子机制的研究及作为某些疾病诊断、预后和治疗的特异性miRNA分子的筛选及鉴定等.

基因免疫诱导9.1C3分子内影像类抗独特型抗体的产生

本文分别采用真核表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ及ｐＣＭＶ４构建含起始码和终止码的抗９．１Ｃ３分子单克隆抗体重链可变区基因重组表达质粒９．１Ｃ３ＶＨｐＥＦ－ＢＯＳ及９．１Ｃ３ＶＨｐＣＭＶ４，并将其分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠血清对Ｋ５６２细胞进行间接免疫染色和流式细胞仪分析表明，基因免疫小鼠体内可诱导９．１Ｃ３分子内影像类抗独特型抗体的产生。

TLSF_(JM)对活化T细胞内IP3、Ca^(2+)水平和Fos蛋白表达的调节作用

本文应用ABC组化染色、Fura-2/AM标记细胞Ca^(2+)测定法以及阴离子交换树指层析柱分离磷酸肌醇等技术,研究了TLSF_(JM)对活化T细胞内IP3、Ca^(2+)水平以及Fos蛋白表达的调节作用。结果表明,TLSF_(JM)明显抑制PHA活化的PBMC Fos蛋白表达,并对T细胞内IP3、Ca^(2+)水平也有很强的抑制作用。

9．1C3单链抗体的基因构建及序列分析

本文在已克隆９．１Ｃ３抗体ＶＨ和Ｖｋ基因的基础上，用一编码疏水性多肽接头的ＤＮＡ，经重叠延伸拼接ＰＣＲ，构建了９．１Ｃ３单链抗体基因。经测序表明，ＶＨ、Ｖｋ及Ｌｉｎｋｅｒ的序列均正确，为９．１Ｃ３单链抗体的表达奠定了基础。

NK细胞受体的研究进展

ＮＫ细胞是一类重要的淋巴细胞，不仅在抗病毒及抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用，而且可以产生一些细胞因子，在造血、炎症和免疫应答过程中发挥调节作用。本文就ＮＫ细胞受体的种类、结构特点。

非洲爪蛙卵母细胞系统 TLSF_(JM)mRNA 体外翻译研究

应用酸性胍一步法从分泌 TLSF_(JM)的细胞系 JM 中提取总 RNA,进而纯化 mRNA,并应用微注射技术将纯化的 mRNA 注入非洲爪蛙卵母细胞中进行翻译表达。结果表明:非洲爪蛙卵母细胞能有效地翻译外源注入的 mRNA,翻译的 TLSF_(JM)产物主要滞留在卵母细胞内,仅有少量分泌到卵母细胞培养液中.TLSF_(JM) mRNA 体外翻译的成功为其 CDNA 文库的构建以及 TLSF_(JM)基因克隆和表达提供了重要的理论依据和实验基础.

9．1C3单克隆抗体可溶性单链抗体基因的表达及其初步鉴定

用噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ构建含９．１Ｃ３单链抗体基因片段的重组表达栽体，经ＩＰＴＧ诱导后可表达一分子量约为３０ｋＤａ的可溶性融合蛋白。体外生物学实验表明，诱导表达的９．１Ｃ３单链抗体，可阻断ＮＫ细胞对靶细胞Ｋ５６２的杀伤。此结果为临床应用９．１Ｃ３单链抗体治疗自身免疫性疾病和预防移植排异反应提供了基础。

细胞因子分子克隆方法的研究进展

细胞因子是一种重要的免疫调节分子；随着分子生物学技术的迅猛发展，克隆某一新的细胞因子的手段也越来越多。本文就目前克隆新的细胞因子的不同方法加以综述，并分析其优缺点。

免疫抑制因子的研究进展

免疫抑制因子是一类调节免疫应答的重要细胞因子,主要来源于T 细胞、B 细胞、单核细胞和巨噬细胞。目前采用饱和硫酸铵沉淀、凝胶过滤以及高效液相色谱等技术对大部分免疫抑制因子进行了纯化,其中少数几种抑制因子cDNA 克隆和表达成功。免疫抑制因子的作用机理较为复杂,主要是通过细胞表面相应受体以及影响其它的细胞表面标记和基因表达水平方面起作用。免疫抑制因子作为一类免疫应答的调节因子,不仅在基础免疫中有着重要意义,而且同临床免疫学的关系也十分密切。

T细胞活化机理研究的最新进展

T细胞活化过程及其机理的研究是细胞免疫学研究的热门课题。T 细胞活化是T细胞免疫应答早期的重要变化,T 细胞活化过程中的信号传递机理极为复杂。最近研究资料表明,T 细胞活化过程中信号传递除经典的磷脂酰肌醇代谢途径(Phosphatidylinositol metabolism pathway)外,还可通过酪氨酸激酶途径和T 细胞表面多分子参与的旁路途径,这些不同的信号传递途径相互之间存在着密切的关系。随着分子免疫学的发展,T 细胞活化过程中新的信号传递途径不断被发现。本文就T 细胞活化过程中的信号传递途径研究的最新进展作一综述。

一种新的免疫球蛋白超家族成员PTA1的细胞分布及表达的研究

ＰＴＡ１分子是一种新的人类Ｔ细胞活化抗原，同时表达于血小板表面，最近基因克隆序列表明，ＰＴＡ１分子属于免疫球蛋白超家族中一个新的成员。ＰＴＡ１分子与杀伤性Ｔ淋巴细胞的分化密切相关，并参与血小板的凝集和活化。本文应用ＰＴＡ１单克隆抗体间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析，对ＰＴＡ１抗原在正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、人胎儿胸腺细胞及各种血液细胞系的分布及表达进行了较系统的观察。结果表明，正常人ＰＢＭＣ经ＰＨＡ刺激后ＰＴＡ１有较高水平表达，并与Ｔａｃ抗原（ＣＤ２５）表达具有良好的相关性；ＰＭＡ刺激的胎儿胸腺细胞、ＰＭＡ刺激的Ｊｕｒｋａｔ细胞和Ｔ淋巴细胞杂交瘤细胞系４７Ｃ７均有高水平的表达，而Ｂ淋巴细胞系和绝大多数髓样细胞系则不表达该抗原。此结果对于进一步研究ＰＴＡ１分子的功能，以及对ＰＴＡ１配体的鉴定具有重要的价值。

仿真头颅模型用于口腔修复学教学的效果评价

目的:证明与传统的临床前期教学相比,仿真头颅模型教学是否提高口腔修复学教学质量。方法:向武汉大学口腔医学院接受仿真头颅模型教学的2000级学生发放问卷调查,及对额外接受10h仿真头颅模型教学的2000级和只接受传统实验室教学的1998两个年级学生的牙体预备质量进行评价。结果:绝大多数学生对仿真头颅模型在教学中的作用给予了肯定,额外的10h仿真头颅模型训练对学生的操作水平有显著提高。结论:仿真头颅模型提高了修复学教学质量,是值得推广的教学工具。

应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系

目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的。首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2串联载体。然后将p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2和p Ad-E1/hRev-erbβdonor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系。最后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβHEK293细胞系(C3-6)进行检测。结果敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβmRNA和蛋白质的表达。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具。

JM 细胞培养上清对人 B 淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖的免疫调节作用

JM 是来自人胸腺不成熟 T 细胞的急性淋巴细胞白血病细胞系.本文以 SAC 刺激的人外周血纯化 B 淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖为模型,观察了 JM 细胞培养上清(SPN_(JM))对人 B 淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖的免疫调节作用.发现具有 T 细胞抑制活性的 SPN_(JM)对人和小鼠 B 淋巴细胞的增殖具有促进作用。在无 SAC 诱导时,SPN_(JM)与 HrIL—2协同对 B 细胞仍有促增殖作用.本实验还发现,高浓度时对 T 细胞具有抑制作用的 SPN_(JM),在低浓度时(1:640)对 T 细胞增殖亦具有促进作用.

煤气化装置飞灰过滤器用滤芯研究进展及应用

干煤粉加压气化是目前第二代煤气化技术发展的主流方向,高温除尘设备是该技术装置中的核心设备。煤气化合成气高温除尘用过滤材料及技术是各国研究热点之一,综述了国内外高温除尘用过滤材料的研究进展及现状,特别介绍了国内开发的金属滤芯材料的耐腐蚀特性及工业化应用进展。

9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能。方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞 ,分选CD56 +细胞和CD56 -细胞分别作为效应细胞。采用重导向杀伤实验(redirectedkillingassay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响。结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用 ,在效靶比为4∶1 ,2∶1和1∶1时 ,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4% ,3.4% ,1.1%和21.2 % ,16.7 % ,6.5 %。用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时 ,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强 ;在相同的效靶比例 ,它们对P815的杀伤率分别为:47.1 % ,32.2% ,19.1 %和64.4 % ,50.3% ,39.5 %。但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时 ,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制 ,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调 ,其杀伤率仅为18.5 % ,9.7 %和7.0 % ;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制。结论9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体 ,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同。

9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

探讨 9 1C3分子对杀伤细胞功能的影响。方法 :以新鲜分离的PBMC或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞 ,采用重导向杀伤实验 (Redirectedkillingassay ,RKA)观察 9 1C3抗体对效应细胞杀伤P815细胞作用及其杀伤过程中TNF 浕分泌的影响?峁?:9 1C3抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用 ,并使效应细胞分泌TNF 浕水平降低。结论 :9 1C3分子是一种抑制型杀伤细胞受体。