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联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质
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作者 夏英捷 马英玉 +3 位作者 王惠菊 何徐军 叶再元 陶厚权 《浙江医学》 CAS 2010年第9期1318-1321,共4页
目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)分离组织和血清总蛋白,经硝酸... 目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例(58.3%)肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1(SBP1)表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础. 展开更多
关键词 双向凝胶电泳 质谱 胃癌 肿瘤标志物
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血清miRNA-744检测在胃癌诊断中的意义
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作者 蒋晓婷 夏英捷 《浙江实用医学》 2016年第6期394-397,共4页
目的探讨检测血清miR-744水平在胃癌诊治中的作用。方法以2008年1月至2010年12月在浙江省人民医院接受手术的胃癌患者219例为研究对象,另选取160例健康体检者作为对照组。采用qRT-PCR方法检测血清miR-744的表达量、电化学发光法测定血清... 目的探讨检测血清miR-744水平在胃癌诊治中的作用。方法以2008年1月至2010年12月在浙江省人民医院接受手术的胃癌患者219例为研究对象,另选取160例健康体检者作为对照组。采用qRT-PCR方法检测血清miR-744的表达量、电化学发光法测定血清CEA和CA19-9水平,比较胃癌患者与健康体检者血清miR-744、CEA和CA19-9水平差异,分析miR-744表达与胃癌临床病理及预后的关系,并就miR-744水平对胃癌的诊断意义行ROC曲线分析。结果胃癌患者血清miR-744表达量明显高于健康体检者(P<0.001),其表达与胃癌的肿瘤大小、浸润深度、分化程度、TNM分期以及预后相关。ROC曲线分析表明,miR-744以表达量3.5为临界值时,对胃癌的诊断敏感性为86.9%,特异性为64.0%,曲线下面积0.762。术后监测表明,胃癌根治性切除术后血清miR-744下降。结论血清miR-744是一个潜在的胃癌血清标志物,对胃癌的诊断和随访具有临床意义。 展开更多
关键词 miRNA-744 胃癌 诊断 随访
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Toll样受体4及核因子-κB在脂多糖诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9表达中的作用 被引量:4
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作者 李亚清 许武林 +2 位作者 严建平 夏英捷 王宏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1048-1052,共5页
目的探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子(NF-)κB在脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达中的作用,观察TLR4抑制剂TAK-242对MMP-9表达的影响。方法以终浓度为0、0.1、1、10、100μg/L的LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24h,或以L... 目的探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子(NF-)κB在脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达中的作用,观察TLR4抑制剂TAK-242对MMP-9表达的影响。方法以终浓度为0、0.1、1、10、100μg/L的LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24h,或以LPS(终浓度10μg/L)刺激细胞0、8、12、16、24h,检测LPS刺激与MMP-9表达的量效和时效性关系。以TAK-242(100μg/L)或PDTC(50mg/L)预处理HBE4-E6/E7细胞后以100μg/L LPS刺激24h,采用RT-PCR检测MMP-9mRNA表达,用Western blotting检测MMP-9蛋白表达,以明胶酶谱法检测MMP-9酶活性,采用凝胶阻滞实验检测活化NF-κB的含量。结果 MMP-9mRNA表达随着LPS刺激剂量的增加而增加(P<0.05),且随着LPS刺激时间延长,MMP-9mRNA表达量亦显著增加(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著抑制LPS诱导的MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低其酶活性(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著降低LPS诱导的活化NF-κB含量(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路在LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9表达中发挥着重要的调控作用;TAK-242可抑制LPS诱导的MMP-9的表达。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 基质金属蛋白酶9 NF-κB 上皮细胞 呼吸道黏膜
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再生蛋白4的相关表达在胰腺癌诊断中的意义 被引量:2
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作者 陶厚权 何徐军 +3 位作者 蒋晓婷 马英玉 王惠菊 夏英捷 《外科理论与实践》 2010年第5期522-525,共4页
目的:探讨检测血清中再生蛋白4(REG4)水平在胰腺癌诊治中的作用。方法:分别采用ELISA法和化学发光免疫法对84例胰腺癌血清REG4和CA19-9进行测定,并与58例胰腺良性疾病和70名正常人进行比较,分析REG4对胰腺癌的临床诊断价值。结果:胰腺... 目的:探讨检测血清中再生蛋白4(REG4)水平在胰腺癌诊治中的作用。方法:分别采用ELISA法和化学发光免疫法对84例胰腺癌血清REG4和CA19-9进行测定,并与58例胰腺良性疾病和70名正常人进行比较,分析REG4对胰腺癌的临床诊断价值。结果:胰腺癌病人血清REG4水平[(2.34±1.37)μg/L]明显高于胰腺良性疾病[(0.82±0.57)μg/L](P<0.001)和正常人[(0.73±0.43)μg/L](P<0.001);Ⅰ+Ⅱ期胰腺癌REG4升高的病人数明显高于CA19-9升高的病人数(P=0.031)。联合检测血清REG4和CA19-9可将诊断灵敏度提高至90.5%,术后监测表明,胰腺癌切除术后血清REG4下降。血清REG4表达与胰腺癌细胞REG4表达明显相关(χ2=7.54,P<0.001)。结论:血清REG4是一个潜在的胰腺癌血清标志物,对胰腺癌的诊断和随访具有临床价值。 展开更多
关键词 REG4 肿瘤标志物 胰腺癌
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Galectin-1与肿瘤发生发展的研究进展 被引量:2
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作者 何徐军 夏英捷 +2 位作者 刘正闯 陶厚权 叶再元 《中国医师杂志》 CAS 2015年第5期648-651,657,共5页
随着国内外对半乳糖凝集素(Galectins)的研究增多,Galectin-1作为半乳糖凝集家族中的一员日益受到生物学家和免疫学家的关注.Galectin-1分布广泛,存在于多种组织和细胞内,参与细胞的黏附、增殖、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程.近... 随着国内外对半乳糖凝集素(Galectins)的研究增多,Galectin-1作为半乳糖凝集家族中的一员日益受到生物学家和免疫学家的关注.Galectin-1分布广泛,存在于多种组织和细胞内,参与细胞的黏附、增殖、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程.近期研究发现,Galectin-1表达于多种恶性肿瘤组织中,与肿瘤的发生、发展、转移、侵袭及机体的抗肿瘤免疫等各方面密切相关,并很有可能成为肿瘤和炎症治疗的新的作用靶点.本文就Galectin-1与肿瘤进展研究现状作一综述. 展开更多
关键词 半乳糖凝集素类/代谢 肿瘤/代谢 综述
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大鼠羊水间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的体外实验 被引量:2
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作者 顾超 严建平 +3 位作者 许武林 李亚清 夏英捷 陈淳 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第26期2050-2054,共5页
目的:观察体外诱导大鼠羊水间充质干细胞( AF-MSCs )向Ⅱ型肺泡上皮细胞的定向分化。方法选取10只清洁级妊娠SD大鼠,收集羊水标本,分离、培养AF-MSCs,以流式细胞术分析其表型标记、实时荧光定量聚合酶链反应( qRT-PCR)检测Oct-4... 目的:观察体外诱导大鼠羊水间充质干细胞( AF-MSCs )向Ⅱ型肺泡上皮细胞的定向分化。方法选取10只清洁级妊娠SD大鼠,收集羊水标本,分离、培养AF-MSCs,以流式细胞术分析其表型标记、实时荧光定量聚合酶链反应( qRT-PCR)检测Oct-4 mRNA表达(以大鼠胚胎干细胞作为阳性对照);根据不同体外诱导培养方法,将AF-MSCs分为A(空白对照组)、B、C、D、E共5组,各组体外不同诱导方法处理后qRT-PCR检测肺表面活性蛋白( SP) A、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA表达水平,免疫荧光法检测SPA、SPC蛋白水平以及电镜观察嗜锇性板层小体。结果大鼠AF-MSCs在含20%胎牛血清、4μg/L碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM培养基中呈旋涡状生长,第3代AF-MSCs表型标记中 CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和 CD166阳性表达率分别为(99.1±7.9)%、(99.2±7.4)%、(75.6±5.2)%、(98.9±8.1)%、(92.9±7.3)%和(89.3±6.7)%,而CD34和CD45表达阴性;Oct-4 mRNA相对表达量(0.690±0.059)显著低于大鼠胚胎干细胞阳性对照(1.000±0.002)(P<0.01);体外诱导分化后,A组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA及SPA、SPC蛋白均为阴性表达,而B组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA相对表达量分别为0.426±0.043、0.368±0.028、0.492±0.058、0.327±0.024和0.183±0.018,均显著高于其他各组(均P<0.01),SPA、SPC蛋白绿色荧光呈强阳性表达;同时,在B组中观察到嗜锇性板层小体。结论 AF-MSCs在体外能通过特定的诱导定向分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞。 展开更多
关键词 间质干细胞 肺泡 上皮细胞 细胞分化 大鼠
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冬凌草甲素诱导胃癌细胞MKN45凋亡的实验研究 被引量:6
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作者 何徐军 王惠菊 +2 位作者 夏英捷 叶再元 陶厚权 《中华胃肠外科杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期607-610,共4页
目的探讨冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45生长及调亡的影响及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MKN45细胞生长抑制作用:AO/EB和Hoechest33258荧光染色法及倒置显微镜观察细胞形态学变化:单细胞分析系统PI单染检测细胞周期变化:采用单细... 目的探讨冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45生长及调亡的影响及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MKN45细胞生长抑制作用:AO/EB和Hoechest33258荧光染色法及倒置显微镜观察细胞形态学变化:单细胞分析系统PI单染检测细胞周期变化:采用单细胞分析系统Annexinv—PE和7-AAD双染色法检测细胞凋亡率:Western blot检测凋亡相关蛋白Bel-2、Bax和caspase-3的表达改变。结果冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的生长抑制作用,普通形态学、AO/EB及Hoechest33258荧光染色均可见典型的细胞凋亡改变。冬凌草甲素作用MKN45细胞12h后的细胞凋亡率为8.7%~17.9%,24h后的细胞凋亡率为13.9%.29.3%,与未加药对照组(12h:3.3%;24h:4.8%)比较,差异具有统计学意义(P〈0.01)。细胞周期分析显示冬凌草甲素使MKN45细胞增殖阻滞于G2-M期。Western blot检测显示.冬凌草甲素作用MKN45细胞后,Bax和caspase-3蛋白的表达随着药物作用浓度增高而增加.而Bcl-2蛋白表达无明显变化.Bcl-2/Bax比值减低。结论冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的增殖抑制作用:冬凌草甲素可能通过增加Bax蛋白表达.改变Bcl-2/Bax比率.继而启动caspase途径诱导胃癌细胞MKN45凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 冬凌草甲素 MKN45细胞 细胞凋亡
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